Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Förbered avsmalnande injektionsnålar genom att dra tunnväggiga glaskapiller med hjälp av en nåldragare. Håll en nål under ett mikroskop och bryt spetsen, se till att öppningen är tillräckligt stor för att genomborra den vuxna flugskurikeln utan att såra den mer än nödvändigt. inställningar i enlighet därmed.
Ladda nålen med injektionslösningen och montera den på ett injektionsmunstycke.
- Efter att ha dragit tunnväggiga glas kapillärer med en nåldragare, Använd en mikrometer för att hålla nålen under ett mikroskop och använd tweezers av rostfritt stål nummer fem för att bryta spetsen till en 100 mikrometer spetsdiameter.
Dela ut 10 mikroliter på 1,6 milligram per milliliter partiklar på en liten fyrkant parafilm och dra vätskan i nålen. ventral sida upp, med huvudena riktade mot framsidan av dynan. Placera injektionsflaskan i motsvarande områden på bänken och injicera flugorna i övre hörnet av buken med fem 100 millisekunder pumpar av vätska för att leverera cirka 10 nanoliter partiklar totalt. Överför varje fluga till lämplig injektionsflaska när den injiceras, och notera tiden på injektionsflaskan.
Ladda sedan en ny nål med 0,4% Trypan Blue-lösning och ställ in den pneumatiska injektorn på "gated" så att ett konstant luftflöde kan trycka ut vätskan ur nålen. 30 minuter efter den första injektionen, injicera varje flug buk med Trypan Blue tills buken är fulla och distended. Montera flugorna på mikroskop glider med elektrisk tejp ventral sida ner, tryck vingarna till sidan av flugan för att säkra dem till tejpen.
