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- 屋根付きのアリーナ(透明なシリコンで満たされたシャーレなど)を使用して、ハエが自由に歩くことができますが、アリーナが覆われているとアリーナ内を飛ぶことができないようにします。白い照明面に皿を置き、カメラを真上に置きます。
蓋を開けた状態で、麻酔をかけたハエを皿に移し、蓋をして、被験者が回復するのを待ちます。ハエはトライアル中、アリーナ内を自由に動き回ります。移動を評価するには、各ハエの位置を経時的に追跡し、各ハエの移動距離など、移動を特徴付けるパラメーターを計算します。このプロトコル例では、ビデオトラッキングソフトウェアを使用したアッセイのセットアップと分析のデモンストレーションを見ていきます。
- ペトリ皿でハエの動きを追跡するには、まず、6センチの皿に透明なシリコンエラストマーを充填して追跡アリーナを作ります。シリコンと蓋の間に3ミリメートルの隙間を空けて、ハエが隙間を自由に歩くことができますが、飛べないようにします。トラッキングアリーナの下には、白い背景があります。
次に、同じ治療群の4匹のハエに麻酔をかけ、アリーナに置きます。ハエをアリーナに1時間順応させますが、アリーナは完全に照らされ、摂氏約22度で、室温よりも暑くないようにする必要があります。1時間後、アリーナの上空に設置された電荷結合デバイスカメラを使用して、ハエの活動を5分間記録します。
5分間の録音後、アリーナのハエに麻酔をかけ、新しい家庭用バイアルに戻します。その後、アリーナを処分します。後で、無料で入手できるCtraxソフトウェアを使用して録音を分析します。このソフトウェアは、MATLAB 形式などのプログラム可能な言語互換形式でエクスポートできる追跡データを生成します。
データから、フレームあたりの移動距離、各フライの平均歩行距離、およびフライあたりの平均移動距離を計算します。統計的有意性のために、治療群ごとに約100匹のハエを試験することを期待してください。