Dört Yönlü Olfactometer Tahlil: Drosophila'da Koku-Cued Yanıtlarını Değerlendirme Yöntemi

- Dört yönlü olfaktometre, her köşede tek yönlü bağlantı noktalarına sahip, dört kokuya kadar teslim edebildiği, farklı koku profillerine sahip kadranlar oluşturabilen kapalı bir odadır. Uyanık sinekleri odaya aktararak bir deneye başlayın. Anesteziden kaçının, çünkü bu deney sırasında davranışlarını etkileyebilir.

Sinekleri temiz havaya maruz bırakmayın ve koku vericilerin olfaktometreyi kirletmemesini ve sinek davranışını etkilememesini sağlamak için hareketlerini gözlemleyin. Ardından, test kokularını ayrı şişelerde hazırlayın ve tek yönlü bağlantı noktalarından ana odaya bağlayın. Sinekleri önceden tanımlanmış bir süre boyunca koku vericilere maruz bırakarak, deneme sona erdikten sonra uyaranı çıkarın.

Sinekler, çekici kokulara sahip kadranlara doğru ilerlerken ve yerleşirken itici kokulara sahip kadranlardan kaçınma eğilimindedir. Olfactometer'ı keşfederken zaman içinde konumlarını izleyerek sineklerin kokulu davranışsal tepkilerini ölçün.

Aşağıdaki protokolde, etil propiyonat, itici bir koku ve çekici olan elma sirkesine yanıt olarak sinek davranışını analiz etmek için hava dağıtım sistemine sahip dört çeyreklik bir olfactometer kullanacağız.

- En az beş dakika önceden, sıcaklık kontrol cihazını çalıştırın ve 25 santigrat dereceye ayarlayın. Ardından, koku odalarını plastik bir tüple arenaya bağlayın. Elektronik bir akış ölçer kullanarak arenanın her çeyreğindeki hava akış hızını kontrol edin. Kontrol ve koku ve hava akışlarının dakikada 100 mililitre hızında çalıştığından emin olun.

- Sinekler hava akışına karşı çok hassastır ve her çeyrek için hava akışının her deneyden önce doğrulanmış olması önemlidir.

- Şimdi, arenayı ve cam plakaları % 70 etanol kullanarak temizleyin. Tüm parçaları iki ila üç kez silin ve devam etmeden önce tamamen havayla kurumasını bekleyin. Sonra, cam plakaları arenaya kenetleyin. Sonra, sinekleri anestezi olmadan arenaya aktarın. Yerçekimini kullanarak, cam plakalardan birinde delikten girmelerine izin verin ve ardından deliği dairesel bir ağ ile kapatın.

Şimdi, sinek yüklü arenayı ışık geçirmez odaya yerleştirin. Sonra, dört kontrol hava akışını her arena köşesine bağlayın. Odanın kapısını kapatın ve sineklerin 10 ila 15 dakika boyunca yeni ortama alışmasına izin verin.

Alışma süresinden sonra, sineklerin dört kontrol hava akışına maruz kaldığı 5 ila 10 dakikalık bir kontrol deneyi yapın. Şimdi verileri hemen analiz etmek önemlidir. Sinekler arenada eşit olarak dağıtılmazsa, arena sıfırlanmalıdır.

- Kontrol sineklerinin davranışını sadece temiz havaya test etmek önemlidir. Bu, tüm arka plan koşullarının normal olduğunu hızlı bir şekilde doğrulayacaktır. Sızan ışık, sıcaklık dengesizliği, eğik arena veya koku kirlenmesi sorunlara neden olabilir.

- Gerekirse sinekleri atın ve arenayı tekrar temizleyin. Koku kontaminasyonundan şüphelenilirse, tüm boruları değiştirin. Hayvanlar dört kadrandan herhangi birini tercih edene kadar kontrol testini yeni kohortlarla tekrarlamaya devam edin. Ardından, test koku alma odasını üç yönlü bir valf kullanarak kuruluma bağlayın veya boruyu yeniden bağlayın ve 5 ila 10 dakika boyunca bir test deneyi çalıştırın. Daha uzun deneysel kayıtlar için, izleme programını her 20 dakikada bir hızla durdurun ve yeniden başlatın, aksi taktirde veri dosyaları çok büyük olacaktır.

Testler arasında sinekleri atın, arenayı ve cam plakaları% 70 etanol ile temizleyin ve konektör tüplerini değiştirin. Kuru hava akışını sürekli olarak sistemi yıkamaya devam edin. Verimlilik için, iki arenaya sahip olmak iyidir, böylece koşular sırasında temizlik yapılabilir.

- Aynı gün içinde birkaç deney yapılırsa, önceki bir çalıştırmadan sistemde koku kalmamasını sağlamak için aşırı özen ödeyin. Bu normalde düşük konsantrasyonlarda koku alma veya CO2 ile ilgili bir sorun değildir. Ancak yüksek konsantre uyaranlar için deney çalıştırmaları arasında 24 saate kadar boşluk gerekebilir.