Name: LAESI 질량 분석법에 의해 생물 학적 조직 및 Biofilms의 대기 압력 분자 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-03T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 22 s
Description: 배우세요 LAESI 질량 분석법을 활용한 생물학적 조직과 바이오필름의 대기압 분자 이미징 기법을. 중적외선 레이저와 전기분무 이온화를 결합하여 시료 전처리 없이 직접 분석이 가능합니다.

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저자는 에너지의 미국학과 (DEFG02 - 01ER15129)에 의해 부여 번호 0719232 아래에있는 미국 국립 과학 재단 (National Science Foundation)에 의해이 작품의 재정 지원에 감사하며, 프로 테아 Biosciences, 주식 회사 (모건, WV)에 의해. 저자는 또한 프로토콜 찍고하는 동안 그녀의 도움 제시카 A. Stolee 감사하고 싶습니다.

다음 프로토콜은 레이저 박리 전기 분무 이온화 (LAESI) 실험의 주요 단계를 설명하고 동물과 식물 조직 샘플에 대한 측면과 입체 (3D) 영상을위한 대표적인 예제를 제공합니다. 추가 실험 및 기술 정보는 다른 곳에서 얻을 수 있습니다. 1-6는 1. 조직 준비 및 마운트 <ol><li> sectioning이 필요한 경우, 조직은 -20 -10에서 10-100 μm의 두께로 자른 섹션에 cryomicrotome를 사용 ° C 달리 특정 조직 유형에 대한 권장하지 않는 한. </li><li> 직접 화학 수정자없이 평평한 표면 (예 : 화학적 사전 청소 유리 슬라이드)에 섹션을 탑재합니다. 분석하는 동안 항상 냉동 조직을 유지하기 위해 해동 장착시 sectioned 조직은 섹션을 해동 장착 즉시 펠티어 냉각 단계에 샘플 홀더를 확보. 이 단계는 섹션에서 분자 마이 그 레이션을 최소화 / 방지하기 위해 필요합니다. </li><li> 필요한 경우, 조직은 냉동 유지하는 펠티어 단계에서 열 제거를 용이하게하기 위해 저전력 팬이 장착된 히트 싱크를 사용합니다. </li><li> 시간 (1-2시간)의 연장 기간 동안 습기 환경에서, 물 또는 조직 표면에 얼음의 응축을위한 검사. 조직에 물이 응축은 detrimentally LAESI 실험에서 이미징 성능에 영향을 미치는 1. </li><li> 필요한 경우, 룸 dehumidifier을 사용하거나 결로를 방지하기 위해 불활성 가스 (예 ​​: 건조 질소 가스)로 가득 환경 챔버의 냉각 샘플 장소 1. </li></ol> 2. LAESI 이온 소스의 최적화 LAESI 이온 소스는 중간 적외선 레이저, 가벼운 스티어링을위한 광학 요소의 시리즈와 초점을뿐만 아니라 추가 샘플 홀더, 냉각 부품, 번역 단계 및 용매 전달 시스템으로 구성되어 있습니다. 그림 1은 질량 분석계의 대기 압력 이온 소스의 입구에 관련하여 이러한 요소의 전형적인 배치를 보여줍니다. <ol><li> 그림 1, 위치 질량 분석기 샘플링 콘 (D 또는 - FP)의 구멍 아래의 샘플 15-20mm에 그림과 같이. </li><li> 2.94 μm의 파장과 10 Hz에서 반복 속도 중반 IR 레이저를 운영하고 있습니다. ~ 100 μJ / 펄스 에너지의 레이저 출력을 감쇠. </li><li> 몇 가지 일반적인 입사에서 샘플에 레이저 펄스 에너지 (샘플 표면에 대하여 바로 입사 각도를 볼 수있는 레이저 파장 (예, 평철의 카페 2 ZnSe 렌즈)에서 투명 금색 거울과 초점 렌즈의 조합을 사용 그림 1). </li><li> 질량 분석계 샘플링 콘의 구멍 앞 중간 적외선 빔 축 5~8밀리미터를 놓습니다. </li><li> 초점 렌즈 위치와 초점 자리에 조직 제거를 달성하기 위해 레이저 빔을의 펄스 에너지를 조정합니다. ablated 볼륨의 크기는 이미징 응용 프로그램에 대한 픽셀 (또는 3 차원 영상의 voxel) 크기를 확인합니다. </li><li> 질량 분석계의 입구 축과 일치하며 ~ ​​10 mm의 구멍 - 투 - 에미터 팁 거리 (그림 1 참조)에서 nanospray의 방사체를 놓습니다. </li><li> 전기 분무의 경우, 각각 0.1 % 초산 또는 긍정적이거나 부정적인 이온 모드 0.1 % 암모늄 아세테이트 첨가제로 50 % 메탄올 솔루션을 준비합니다. 기타 유기 용제 이러한 acetonitrile, 이소프로판올, 등, 샘플에 따라 분석 작업에 대한 적절한 농도에서 메탄올을 대체할 수 있습니다. 전기 분무의 안정성을 성공적으로 영상을 위해 매우 중요합니다. 용매 선택에 따라 유량과 분사 전압 안정 스프레이를 달성하기 위해 조정해야합니다. </li><li> 반응 LAESI 6 이미징 애플 리케이션에서, electrosprayed 솔루션 reactants를 포함할 수 있습니다. </li><li> ~ 300 NL / 분 유량에 전기 분무 방출을 통해 전기 분무 솔루션을 제공하기 위해 주사기 펌프를 사용합니다. </li><li> 질량 분석계의 구멍은 낮은 전압 (&lt;500 V는 지상으로부터 측정)에 보관하는 경우, 전기 분무 방출기 (예, 3000 V)로 직접 고압을 적용하거나 금속 노조를 통해 전기 분무를 생성합니다. 그렇지 않으면, 전기 분무를 구축하기 위해 직접 전기 분무 방출기 또는 금속 노조를 통해 지상. </li><li> LAESI에 의해 가장 효율적인 이온 생성을위한 모드를 분사 콘 제트의 전기 분무 소스를 운영하고 있습니다. 질량 스펙트럼에서 분사 모드 및 효과에 대한 운영 변수의 효과를 보려면 다른 토론을 참조하십시오. 5,7,8은 </li><li> 조심스럽게 같은 비행기에 레이저 빔을, 방출 및 오리피스 도끼를 유지하면서 LAESI 이온 수율을 최적화하기 위해 LAESI 설정의 상대적 거리를 조정합니다. 다른 자세한 지침을 찾아 주시기 바랍니다 5. </li><li> 광학 현미경으로, 시료의 절제 분화구의 측면 크기를 결정합니다. </li><li> 입체 LAESI 이미징 실험을 위해, 개별 펄스와 절제를 수행하고 예를 들어, 사용 voxel의 깊이를 결정 광학 현미경의 Z - 스택 모드 3. </li></ol> 3. 분자 이미징 및 데이터 분석 이미징 실험에서 조직 샘플보다 크거나 박리 영역의 크기와 동일한 단계 크기 X와 Y 방향으로 레이저의 초점 평면에서 이동합니다. 공간 해상도는 입사 레이저의 초점에 의해 제한됩니다. <ol><li> 샘플 표면에 대한 관심의 영역을 선택하고 (X, Y)가 해당 경계 좌표 구하십시오. </li><li> 몇 군데로 구역이 지남에 따라 각 픽셀에 시간을 머물러 선택과 샘플 표면을 래스터로있는 gridding 알고리즘 (예, 적응 그리드, 선택된 지역 이미징, 직사각형 그리드, 나선형 패턴, Z 스캔 등) 선택할 수 있습니다. </li><li> 3 축 번역 무대와 정해진 그리드에 따라 샘플을 rastering 수있는 소프트웨어를 사용합니다. </li><li> 이미징에 필요한 총 시간을 계산합니다. </li><li> 질량 분석계의 데이터 수집 시간 제한을 해제합니다. 이것이 불가 능할 경우, 계산 이미징 시간 값을 데이터 수집 시간 제한을 설정합니다. </li><li> LAESI 측면 이미징 실험을 수행하기 위해 각 픽셀에 머물러있는 시간 내에 질량 스펙트럼에 충분한 신호 대 잡음 비율을 생산하기 위해 적절한 반복 속도 중간 적외선 레이저 소스를 시작합니다. 3D 분자 이미징을 위해 성공적으로 단일 레이저 펄스 내에서 생성된 이온을 대량 분석 레이저 소스 반복 속도보다 높은 스펙트럼 수집 속도를 사용합니다. 절제 시퀀스를 시작하려면 시작 신호를 기다립니다. </li><li> 전기 분무 소스를 켭니다. 이미징에 필요한 전체 시간에 대한 충분한 해결책이 있는지 확인합니다. </li><li> 동시에 대량 스펙트럼의 인수 중반 IR 레이저 박리 및 표면 검사를 시작합니다. </li><li> 이미징 실행이 완료되면, 표면 검사, 중반 IR lasing 및 데이터 수집를 중지합니다. </li><li> 레이저 소스를 해제합니다. </li><li> 높은 전압의 전원을 끕니다. </li><li> 주사기 펌프를 전환합니다. </li><li> 대기 모드로 질량 분석기를 설정합니다. </li><li> 펠티어 냉각 전자를 끄십시오. </li><li> 사용하면 불활성 가스 흐름을 닫습니다. </li><li> 해당 검사 결과와 3 차원 분석 측면 영상이나 voxels에있는 픽셀의 절대 좌표를 연관시키는 소프트웨어를 사용합니다. </li><li> 수평 및 3D 분자 이미지를 얻기 위해 분석의 절대 좌표를 상대로 선택한 M / Z 값에 대한 이온 강도 신호를 플롯. </li></ol> 4. 대표 결과 그림 2는 몇 가지 주요 조직 유형 및 이미징 modalities에 대한 대표적인 결과를 제공합니다. 패널 탈수를 방지하기 위해 실험 기간 동안 냉동되어 동물의 조직 섹션에 대한 사건을 묘사. 또한 1, 샘플이 샘플 표면에 응축에서 주변 물 증기를 피하기 위해 건조 질소 가스 환경에 위치했다. 쥐 두뇌의 100 μm의 두께 코로나 섹션 (Rattus norvegicus)가 옆으로 LAESI와 몇 군데했다. 두뇌의 해부 지역 (패널에 광학 이미지를 볼 A) 분자 plasmalogens PC 용 얻은 이미지 (O - 33 : 3)와 좋은 상관 관계 표시 및 / 또는 PE (O - 36 : 3) M / Z 728.559과 함께합니다. 패널 B는 제브라 공장 (Aphelandra squarrosa) 잎 조직의 3D LAESI의 이미지를 보여줍니다. 단풍은 탈수에 대한 자연 방어 메커니즘을 가지고 있기 때문에 샘플은 주위 환경에서 심문 수 있습니다. 3 얻은 3D 분자 이미지 기본 및 보조 metabolites에 대한 유통 패턴의 다양한 밝혔다. 다른 사람들과 M / Z 285.076과 acacetin는 다른 균일한 분포로 위로부터 두 번째 및 세 번째 레이어의 노란 분야에서 높은 이온 카운트에서 검색되었습니다. 이 배포판은 광학 이미지에서 본 잡색의 패턴으로 동의했다. <img src="/files/ftp_upload/2097/2097fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. LAESI 시스템의 개략도 (ES, 전기 분무의 에미터 팁, 또는, 질량 분석계 샘플링 콘의 구멍, FL, 렌즈를 집중, FP, 초점, P, 펠티어 냉각 단계, HS, 히트 싱크). 분자 및 샘플 이온 (녹색 점들)와 씨앗 충전 방울을 낼 수있는 전기 분무와 중반 IR 절제 (빨간색 점) coalesces 동안 퇴학 미립자 문제의 부분. 이러한 방울에서 발표 이온 분석 및 질량 분석기에 의해 기록됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2097/2097fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 수평 및 3D imagi에 대한 대표적인 결과를. 또는 PE (O - 36 / : LAESI 질량 분석계와 함께 NG (A) 상단 패널은 쥐의 두뇌 (Rattus norvegicus) 코로나 섹션 plasmalogens PC 용 얻은 분자 이미지의 광학 이미지 (3 O - 33) 모습 : 3) M / Z 728.559. 흰색 규모 막대가 1mm에 해당합니다. 의 허가 (참고 1) 적응. 저작권 2010 미국 화학 학회. (B) 하단 패널은 잡색 제브라 공장 (Aphelandra squarrosa)에서 나뭇잎의 3D 이미지를 보여줍니다. M / Z 285.076과 Acacetin은 다른 사람의 균일한 분포로 위로부터 두 번째 및 세 번째 레이어의 노란 분야에서 높은 이온 카운트에서 검색되었습니다. 의 허가 (참고 3) Reprinted. 저작권 2009 미국 화학 학회.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

다른 조직 유형이 효과를 완화하기 위해 차례로, 샘플의 박리 특성에 영향을 미칠 수, 물, 컨텐츠 및 인장 강도. 9 다양한 전시, 그것은 사이에 변화하는 때 레이저 fluence, 샘플 처리 및 분석 프로토콜 개정 않는다 주요 조직 유형. 단일 셀 또는 고해상도 수사, 중간 적외선 대신 초점 렌즈의 둘레에 광섬유로 결합 수 있습니다. 조직에서 선택한 세포의 근접 이내에 섬유 팁을 위치하여 10, LAESI 분석을 수행할 수 단일 세포 수준. 주위 이온화 질량 분광법에 대한 레이블이없는 이온 소스로, 11 LAESI는 조직의 생화 학적 과정의 조사에 대한 잠재력을 보이지 않고있다. 직접 분석, 수평 및 3D 이미징의 추가 혜택과 함께, LAESI는 프로파일뿐만 아니라 이미징 어플 리케이션을위한 새로운 bioanalytical 도구입니다.

<table><tbody><tr><td>질량 분석계</td><td>Waters</td><td>Q-TOF Premier</td><td></td></tr><tr><td>중적외선 레이저</td><td>Opotek Inc. (Carlsbad, CA)</td><td>Vibrant IR</td><td></td></tr></tbody></table>

laesi 질량 분석법에 의해 생물 학적 조직 및 biofilms의 대기 압력 분자 이미징

Atmospheric-pressure Molecular Imaging of Biological Tissues and Biofilms by LAESI Mass Spectrometry

질량 분광법에서 대기 이온화 방법은 분석 조사가 모국어와 같은 실험 조건에서 조직이나 biofilm에서 직접 수행할 수있게합니다. 레이저 박리 전기 분무 이온화 (LAESI)는 하나의 개발이며, 특히 물이 포함된 표본 조사에 적합합니다. LAESI은 샘플의 물 분자를 자극 중간 적외선 레이저 빔 (2.94 μm의 파장)를 사용합니다. 절제 fluence 임계값이 초과되면, 샘플 자료 미립자 물질의 형태로 퇴학이 projectiles은 샘플 표면 위에서 mm 수만 여행입니다. LAESI,이 절제 플륨는 배출 샘플 자료의 일부를 캡처 및 가스 상 이온에의 화학적 성분을 변환하는 높은 비용이 청구 방울에 의해 포착됩니다. 대기 압력 이온 소스 인터페이스를 갖춘 질량 분석기는 시료의 탐지 영역 (픽셀)에서 발생하는 발표 이온의 구성을 분석하고 기록하는 고용됩니다. 픽셀의 배열을 통해 체계적인 심문은 microprobe 분석 모드에서 분자 이미징을위한 방법을 엽니다. LAESI 질량 spectrometric 이미징의 독특한 측면은 측면 이미지와 함께, 3 차원 (3D) 분자 이미징을 가능하게, 깊이 프로 파일링입니다. ~ 100 μm의 각각 ~ 40 μm의, 현재 수평 깊이 해상도로 LAESI 질량 spectrometric 영상은 생물 학적 조직의 분자 구조를 탐구하는 데 도움이됩니다. 여기에, 우리는 LAESI 시스템의 주요 요소를 검토하고 성공적인 영상 실험에 대한 지침을 제공합니다.

레이저 박리 전기 분무 이온화 (LAESI)는 질량 분광법에 대한 대기 압력 이온 소스입니다. 이미징 모드에서 중간 적외선 레이저 프로브 조직 섹션 또는 biofilm에 걸쳐 분자의 배포판. 이 기술은 원래 실험 조건 하에서 수행 다양한 bioanalytical 연구에 대한 새로운 접근법을 제공합니다.

LAESI 질량 분석법에 의해 생물 학적 조직 및 Biofilms의 대기 압력 분자 이미징

질량 분석법의 주변 이온화법은 천연 상태와 유사한 조건의 조직이나 바이오필름에서 직접 분석 조사를 수행할 수 있게 하며...

생물학적 조직 또는 바이오필름에 대해 레이지 질량 분석 이미징 실험을 수행하기 위해, 레이지 설정을 안정적인 작동이 가능하도록 준비합니다. 다음 단계는 시료를 시료 스테이지에 장착하고 조사 대상 시료에 필요한 실험 조건을 설정하는 것입니다. 그 후 측면 레이지 분자 이미징 실험을 시작하며, 획득한 필수 데이터를 사용하여 공간적 분자 분포를 도출합니다.이 결과는 생물학적 조직과 바이오필름의 분자 구조를 보여줍니다. 저는 조지 워싱턴 대학교 Vertus 연구소의 Peter Nemes 박사입니다. 공초점, 광학 및 MALDI와 SIMS 같은 질량 분석 이미징 방법을 포함한 다른 방법들에 비해 이 기술의 주요 장점은, 대기압 조건에서 조직 상에 직접 시료 분석을 수행할 수 있으며 별도의 시료 처리가 필요하지 않다는 점입니다.관심 조직 절편을 화학적 변형제가 없는, 화학적으로 사전 세척된 유리 슬라이드와 같은 평평한 표면에 직접 마운팅합니다. 필요한 경우 마운팅 직후 샘플을 펠티어 냉각 스테이지(pelt cooling stage)에 고정하며, 펠티어 스테이지의 열 제거를 용이하게 하기 위해 저전력 팬이 장착된 히트싱크를 사용합니다. 그 후 약 1~2시간 동안 습한 환경에서 장시간 작업하는 경우, 조직 표면에 물 응결이나 얼음이 형성되었는지 확인합니다.조직 표면에 수분이 응결되면 레이저 실험의 이미징 성능에 부정적인 영향을 미칩니다. 필요한 경우, 제습기를 사용하거나 건조 질소 가스와 같은 불활성 가스로 채워진 환경 챔버에 시료를 배치하여 응결을 방지하십시오. 시료 유지 조건을 최적화한 후, 레이저 어블레이션, 전기분무 이온화 또는 레이저 이온원을 사용하는 이온원을 최적화하십시오. 레이저 이온원은 중적외선(mid-infrared, mid ir) 레이저와 빛의 유도 및 집속을 위한 일련의 광학 소자로 구성됩니다.이 구성에는 추가 샘플 홀더, 냉각 부품, 이동 스테이지 및 전기 분무 시스템이 포함됩니다. 중간 적외선(mid IR) 어블레이션 중에 방출된 입자성 물질의 일부가 전기 분무와 합쳐져 샘플의 분자와 이온이 포함된 전하 띠 방울을 생성합니다. 이러한 방울에서 방출된 이온은 질량 분석기에 의해 분석 및 기록되며, 여기에는 질량 분석기의 오리피스가 표시되어 있습니다.실험을 시작하기 전 레이저 설정을 구성합니다. 선택한 시료에 맞춰 이온원을 최적화하기 위해서는 실험 파라미터의 정밀한 조정이 필요합니다. 우선 시료를 질량 분석기 샘플링 콘의 오리피스 15 to 20 millimeters 아래에 배치하는 것으로 시작하십시오.중적외선(mid IR) 레이저를 2.94 µm 파장과 10 Hz 반복률로 작동시킨다. 레이저 출력을 펄스당 에너지 약 100 µJ가 되도록 감쇄시킨다. 금 거울과 레이저 파장에서 투과성이 있는 집광 렌즈를 조합하여 레이저 빛 에너지를 시료에 결합시킨다.정상 입사 위치에서 중적외선 B 축을 질량 분석기 샘플링 콘의 오리피스 앞 5~8mm 지점에 위치시킵니다. 초점 렌즈의 위치와 레이저 펄스 에너지를 조정하여 초점 영역의 조직이 원하는 깊이까지 제거되도록 합니다. 어블레이션된 부피의 크기입니다.이미징 애플리케이션에 사용할 픽셀 크기를 결정합니다. 나노스프레이 이미터(nanos spray emitter)를 질량 분석기의 입구 축에 맞춰 배치하고, 오리피스(orifice)로부터 팁 거리(tip distance)가 약 10 millimeters가 되도록 조정합니다. 전기분무(electrospray)를 위해, 양이온 모드의 경우 0.1% acetic acid가 포함된 50% methanol 용액 또는 0.1% ammonium acetate 용액을 준비합니다.음이온 모드용입니다. 성공적인 이미징을 위해서는 전기 분무의 안정성이 매우 중요합니다. 용매 선택에 따라, 안정적인 분무를 달성하기 위해 유량과 분무 전압을 조정해야 합니다.반응성, 지연성 및 이미징 응용 분야의 경우, 전기분무 용액에 반응물을 포함할 수 있습니다. 시린지 펌프를 사용하여 전기분무 에미터를 통해 분당 약 300 nanoliters의 유속으로 전기분무 용액을 공급하십시오. 질량 분석계 오리피스가 접지 대비 약 500 volts 미만과 같이 낮은 전압으로 유지되는 경우, 전기분무 에미터에 직접 또는 금속 유니온을 통해 예를 들어 3000 volts의 고전압을 인가하여 전기분무를 생성하십시오.가장 효율적인 이온 생성을 위해 전기 분무원을 콘 제트 분무 모드로 작동시키고, 광학 현미경을 사용하여 레이저 빔, 이미터 및 오리피스 축이 동일한 평면에 있도록 유지하면서 이온 수율을 최적화하기 위해 레이저 설정의 상대적 거리를 신중하게 조정합니다. 3차원 레이저 이미징 실험을 위해 시료에 형성된 어블레이션 크레이터의 가로 세로 크기를 결정합니다. 개별 펄스로 어블레이션을 수행하고, 예를 들어 광학 현미경의 Z 스택 모드를 사용하여 복셀의 깊이를 결정합니다.조직 마운팅 조건과 이온화원이 최적화되었으므로, 이미징 실험에서 분자 이미징을 진행합니다. 조직 샘플을 절제 스폿 크기 이상의 스텝 사이즈로 x 및 y 방향으로 이동시켜 레이저의 초점 평면에 위치시킵니다. 공간 분해능은 입사 레이저 빔의 집속 정도에 의해 제한됩니다.시료 표면에서 관심 영역을 선택하고 해당 경계의 XY 좌표를 구합니다. 이미징할 영역의 각 픽셀에서 설정된 체류 시간을 적용하여 시료 표면을 래스터화할 그리딩 알고리즘을 선택합니다. 3축 XS 이동 스테이지와 미리 결정된 그리드에 따라 시료를 이동시킬 수 있는 소프트웨어를 사용하십시오.그런 다음 이미징에 필요한 총 시간을 계산하십시오. 질량 분석 스펙트럼의 선택된 이온에 대해 각 픽셀의 체류 시간 내에 충분한 신호 대 잡음비를 생성할 수 있는 적절한 반복률로 중적외선 레이저 광원을 시작하십시오. 레이지 가로 이미징 실험을 수행하려면 전기분무 광원을 켜십시오.이미징에 필요한 전체 시간 동안 충분한 양의 용액이 있는지 확인하십시오. 이제 질량 분석 스펙트럼 획득, 중간 적외선(mid IR) 레이저 어블레이션 및 표면 스캐닝을 동시에 시작하여 데이터를 수집하십시오. 이미징 실행이 완료되면 표면 스캐닝, 중간 적외선(mid IR) 레이저 및 데이터 획득을 중단하십시오.레이저 광원을 비활성화하고, 고전압을 끄고, 시린지 펌프의 전원을 차단하며 질량 분석기를 대기 모드로 설정하십시오. 또한, 사용한 경우 플레이트 냉각 전자 장치의 전원을 끄고 불활성 가스 흐름을 차단하십시오.마지막으로, 선택한 MZ 값에 대한 이온 강도 신호를 분석 절대 좌표에 대해 플롯하여 측면 또는 3D 분자 이미지를 얻습니다. 이들은 100 µm 두께의 쥐 뇌 관상 절편을 측면 레이지 이미징(lazy imaging)하여 얻은 대표 이미지들입니다. 해당 절편은 실험 중에 동결되었으며 건조 질소 가스 환경에서 유지되었습니다.뇌의 해부학적 영역은 MZ 2 78 0.59인 두 가지 plasmodium에 대해 얻은 분자 이미지와 좋은 상관관계를 보입니다. 이는 다른 1차 및 2차 대사물질들 사이의 주변 환경에서 분석된 zebra plant 잎 조직을 이용한 3D 분자 이미징 실험입니다. MZ 2 85 0.076인 ASCE는 위에서부터 두 번째와 세 번째 층의 노란색 구역에서 균일한 분포로 더 높은 이온 수로 검출되었습니다.나머지 샘플의 경우, 이러한 분포는 광학 이미지에서 관찰된 변이 패턴과 일치했습니다. H 개발 이후, 이 간편한 기술은 분석 화학 및 B 화학 분야의 연구자들이 상당한 수분 함량을 가진 조직과 바이오필름의 분자 조성 및 공간적 조직을 연구할 수 있는 길을 열어주었습니다.중적외선 레이저와 전기 분무원(electric spray source)을 사용하는 작업은 매우 위험할 수 있음을 유의하십시오. 본 절차를 수행하는 동안 항상 표준 레이저 안전 수칙을 준수하고 모든 전기 연결부에 적절한 차폐 조치를 적용하십시오.

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단일 세포 분석 레이저 박리 전기 분무 이온화 (LAESI) 질량 분광법에 대한 세포 샘플을 날카롭게 광섬유를 사용하여 대기압에서 식물과 동물 세포의 대량 분석법에 의해 수행됩니다.

대기압에서 질량 분석법에 의해 단일 ​​세포의 직접 분석

보조 전기 분무 이온화 질량 분석계 (SESI - MS)은 샘플 전처리가 필요하지 않고 휘발성 유기 화합물 (휘발성 유기 화합물)의 검출이 가능합니다. 이 프로토콜은 SESI - MS를 사용하여 세균 휘발성 유기 화합물의 급속한 (분 이내) 특성화하기위한 지침을 제공합니다.

보조 전기 분무 이온화 질량 분석법 (SESI - MS)를 사용하여 특성화 세균 휘발성 물질

탈착 전기 분무 이온화 질량 분석법 (DESI-MS)는 생체 조직 등의 시료는 최소한의 샘플 준비로 이미징 할 수있는 주위 방법입니다. 이온화 프로브 아래에 샘플을 래스터로,이 스프레이 기반 기술은 조직 섹션에서 관심의 분자 기능을 식별 할 수있는 충분한 공간 해상도를 제공합니다.

탈착 전기 분무 이온화 질량 분석에 의한 생물 조직의 이미지

얇은 기관 및 종양 조직에서 수행 레이저 유도 분석 분광법을 성공적으로 하나님 기반의 나노 입자에서 발행 자연 요소와 인위적으로 주입 가돌리늄 (하나님을) 발견되었습니다. 화학 원소의 이미지는 100 μm의 양적 서브 밀리미터 감도의 해상도에 도달했습니다. 표준 광학 현미경과 설치의 적합성은 같은 생체 조직의 여러 이미지를 제공하기 위해 잠재력을 강조한다.

레이저 유도 내역 분광학 : 장기 조직에 나노 입자의 매핑 및 정량을위한 새로운 접근

여기에서는 MS 분석을 위한 소형 다기능 장치인 단일 프로브를 사용하여 조직의 주변 질량 분석 이미징(MSI)과 현장 라이브 단일 세포 MS(SCMS) 분석을 모두 수행하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

단일 프로브의 응용 프로그램 : 주변 조건에서 질량 분석 이미징 및 단일 세포 분석

대기압에서 작동하는 질량 분석 이미징(MSI) 소스는 중적외선 레이저 탈착과 전기 분무 후 이온화를 결합하여 개발되었습니다. 외인성 얼음 매트릭스는 조직 관련 물질의 공명 탈착을 촉진하기 위해 에너지 흡수 매트릭스로 사용되었습니다. 이 원고는 전신 신생아 마우스의 IR-MALDSI MSI를 수행하기 위한 단계별 프로토콜을 제공합니다.

적외선 매트릭스 보조 레이저 탈착 전자 분무 이온화에 의한 전신 질량 분석 이미징 (IR-MALDESI)

고 분해능 질량 분석 시연 보조 nanoelectrospray 이온화를 사용 하 여 실시간으로 exhaled 호흡의 화학 성분 특성화에 대 한 프로토콜 결합.

고 분해능 질량 분석을 결합 하는 보조 Nanoelectrospray 이온화를 사용 하 여 실시간 호흡 분석

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펩타이드 기반 매트릭스 샘플을 고정 하는 포 르 말린의 최적의 준비 지원 레이저 탈 착/이온화 질량 분석 이미징 워크플로

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조직 및 질량 분석 이미징 사용 하 여 셀 사이의 작은 분자 통신 캡처

이 프로토콜의 목표는 생물학적 샘플에서 대사 및 분자 검출을 최대화하기 위해 MALDI MSI를 사용하여 실험을 계획할 때 샘플 준비에 대한 자세한 지침을 제공하는 것입니다.

MALDI 질량 분광화상 영상을 이용한 대사 프로파일링을 위한 샘플 준비

이 프로토콜은 탈착 전기분무 이온화와 Orbitrap 질량분석기를 결합하여 고공간 해상도 대사체 분석을 위한 OVCAR-8 세포의 단일 세포 질량분석법 영상을 설명합니다.

오비트랩 질량분석기와 결합된 해착 전기분무 이온화를 이용한 단세포 질량분석법 영상

배우세요 LAESI 질량 분석법을 활용한 생물학적 조직과 바이오필름의 대기압 분자 이미징 기법을. 중적외선 레이저와 전기분무 이온화를 결합하여 시료 전처리 없이 직접 분석이 가능합니다.

LAESI 질량 분석법에 의해 생물 학적 조직 및 Biofilms의 대기 압력 분자 이미징

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