Name: Veranderingen in de borstklier Morfologie en het risico op borstkanker bij ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-16T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: Leer de dissectie en preparatie van mammaklieren bij ratten voor morfologische analyse. Deze methode helpt onderzoekers borstkankerrisico te voorspellen op basis van vroege voedingsinterventies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

NCI (U54 CA00100970), NCI (1 R03 CA150040-01), ACS (116602-PF-09-018-01-CNE)

1. Verwijdering van de buik borstklier en de opstelling van een hele berg <ol><li> Euthanaseren het dier volgens de IACUC richtlijnen. Pin het dier op zijn rug van zijn benen met naalden, of tape de benen op het oppervlak raad van bestuur, en veeg de huid nat met ethanol (EtOH). Til de huid een beetje met een pincet en met scherpe schaar een middellijn incisie in de huid te beginnen tussen de twee # 5 tepels en snijden in de richting van de nek. Maak een omgekeerde Y incisie vanaf de middenlijn richting de achterpoten. Als thoracale borstklieren zijn ook worden verzameld, maken ook een Y incisie vanaf de middellijn tussen de twee # 2 tepels naar de voorpoten. </li><li> Ontleden van de huid met een schaar open aan een kant van de omgekeerde Y-incisie aan de buik # 4 borstklier bloot te leggen; de borstklieren zijn bevestigd aan de huid. Pin van de huid met naalden op het oppervlak bord, volledig bloot te leggen van de klier. Werk de ene kant en klier in die tijd. </li><li> Ontleden de melkklier, zonder uit de huid hetzij met behulp van scherpe schaar en / of een scalpel, vanaf het proximale gebied dicht bij de tepel en werken aan het distale einde van de klier naar de rug van het dier. (Dit kan enkele minuten duren, vooral bij een oudere rat.) </li><li> Onmiddellijk spreiden van de vrijstaande klier op een juiste wijze gelabeld glaasje (gebruik een goede permanent marker pen en / of 'een diamant pen'), en verspreid de klier goed overeenkomt met de oorspronkelijke grootte en vorm in situ. De glasplaatje moet groter zijn dan de klier. Na het verspreiden van de klier op de glijbaan, laat het op de tafel gaan zitten voor een tijdje, zodat de klier stokken op de glijbaan, maar laat het niet droog. </li><li> Zet de schuif in een pot met daarin Carnoy's fixatief (75% ijsazijn, 25% absolute ethanol = EtOH), laat het je vast bij kamertemperatuur (RT) in de zuurkast voor 2 dagen of langer. Dia's kunnen ook worden achtergelaten in de fixeermiddel voor een langere periode van tijd. </li><li> Was de dia's in 70% EtOH gedurende 1 uur bij RT. </li><li> Spoelen in gedestilleerd water gedurende 30 minuten bij RT. </li><li> Vlek in Carmine Alum vlek *) voor 2 dagen of langer (tot je ziet dat de lymfeklieren hebben bevlekt door, kijk naar de achterkant van de dia). </li><li> Wassen in toenemende reeks van EtOH, 1 uur in elke: 70% -&gt; 95% -&gt; 100%. Na de laatste wasbeurt in absolute EtOH de klieren zetten in xyleen. Laat zitten in de zuurkast in RT althans voor twee dagen. Deze laatste stap is het ruimen van de melkklier betekenis delipidation van het uiervet pad, en de latere toename van de transparantie. Hoe vetter de klier is de langere clearing tijd nodig is. </li><li> Mount with cover-slips met behulp van een montage van media zoals Permount. Nou laten we de dia's drogen (enkele dagen) alvorens op te merken onder een stereo-microscoop. * Carmine Alum Stain: Plaats een g karmijn (Sigma C1022) en 2,5 g aluminium kaliumsulfaat (Sigma A7167) in 500 ml gedestilleerd water en kook ze gedurende 20 minuten. Pas uiteindelijk volume van 500 ml met water. Filter en koelkast. Oplossing kan worden gebruikt voor enkele maanden. Gooi als kleur wordt zwak. </li></ol> 2. Analyse van de borstklier Hele Mount Morfologie Borstklier hele mounts morfologie wordt geanalyseerd op basis van de volgende eindpunten en de resultaten gecorreleerd met borstkanker risico. <ol><li> Borstklier whole-mount at PND 21 (pre-puberale leeftijd): <ul><li> Epitheliale groei: <ul><li> Afstand van de tepel tot aan het einde van de epitheliale boom (in millimeters), gemeten met behulp van een liniaal </li></ul></li><li> Potentieel voor maligne transformatie: <ul><li> Aantal TEBs (uiteinde knoppen), geteld onder een lichtmicroscoop. TEBs zijn de grootste bolvormige structuren zich pas aan het distale uiteinde van de borstklieren epitheliale boom </li></ul></li><li> Differentiatie: <ul><li> AB1 (alveolaire knop) score (0-5). Alveolaire knoppen zijn verspreid over het epitheel. </li><li> AB2 score (0-5) </li></ul></li></ul> Gehelen mounts worden gescoord onder een lichtmicroscoop. De score waarden van AB1 en AB2 worden toegevoegd voor een laatste differentiatie score. </li><li> Borstklier hele-mount verzameld op PND 50 (post-puberale leeftijd): <ul><li> Epitheliale groei: <ul><li> Afstand van de lymfeklieren aan het einde van de epitheliale boom (in millimeters), gemeten met behulp van een liniaal. </li><li> Afstand tussen het uiteinde van de epitheliale boom aan het einde van vet pad, gemeten met behulp van een liniaal. </li></ul></li><li> Potentieel voor maligne transformatie: <ul><li> Aantal TEBs, geteld onder een lichtmicroscoop </li></ul></li><li> Differentiatie: <ul><li> AB1 score (0-5) </li><li> AB2 score (0-5) </li><li> Melkklieren score (0-5) </li></ul></li></ul> Gehelen mounts worden gescoord onder een lichtmicroscoop. Differentiatie zal worden beoordeelt op twee manieren. Eerst worden de score waarden van AB1, AB2 en lobules toegevoegd voor een laatste differentiatie score. Daarnaast zal de verhouding tussen de melkklieren score en AB1 + AB2 score worden berekend. AB differentiëren naar melkklieren, en hoe hoger de verhouding tussen de melkklieren en ABS, het meer gedifferentieerde de klier is. </li></ol> 3. Palpatie en mammatumor Meting in ratten en correlatie met borstklier Morfologie <ol><li> Om te beginnen deze procedure, houdt de rat door vast te pakken het hele lichaam met de handpalm over de rug, met wijsvinger achter het hoofd en de duim en de tweede vinger onder het tegenovergestelde oksel. Draai de rat dus het ligt op zijn achterste, en palperen om eventuele borsttumoren op te sporen; voelbare tumoren moeten voelen als een "klomp". </li><li> Naast gebruik van een schuifmaat om de breedte, lengte en hoogte van de tumor te meten. Bereken de tumor volume met behulp van de ellipsoïde formule, Volume = 1/6πabc, waar 'een' = breedte 'b' = lengte, en 'c' = hoogte. </li><li> Handmatig registreren van de locatie en de grootte van de tumor in een notebook op een wekelijkse basis. Deze gegevens zullen worden overgedragen aan een spreadsheet later. </li></ol> 4. Representatieve resultaten Zorgvuldige dissectie van het uiervet pad en de verwerking ervan tot wholemount zal beoordeling van de ontwikkeling staat van de borstklier. Wanneer elke stap goed is gedaan, de hele borstklier epitheliale boom is duidelijk zichtbaar in het vet pad, en dit maakt een eenvoudige vaststelling van het aantal TEBs en de berekening van de dichtheid van de alveolaire knoppen en melkklieren. Misstappen bij de voorbereiding van wholemounts kan niet de hele dikke pad, onvoldoende tot vaststelling, en inadequate clearing ontleden. Beoordeling van de borstklier morfologie zal informatie over het aantal structuren aanwezig zijn die aanleiding kunnen geven tot mammatumoren (TEBs), mate van differentiatie van de epitheliale structuren (alveolaire knoppen en melkklieren), en de mate van groei (ductaal verlenging). Het is belangrijk om TEBs scheiden om uiteinden, de laatste bevinden zich aan het distale uiteinde van het epitheel, vergelijkbaar met TEBs, maar ze zijn kleiner dan TEBs en geen aanleiding geven tot kwaadaardige tumoren. Uiteinden worden ook gezien in de epitheliale boom. <img src="/files/ftp_upload/2260/2260fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1:. Vertegenwoordiger resultaat van goed voorbereid borstklier hele berg Alle onderdelen van de klier goed zijn ontleed en karmijn kleuring is optimaal. <img src="/files/ftp_upload/2260/2260fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2:. Vertegenwoordiger gevolg van een slecht voorbereid borstklier ganse berg De klier goed is ontleed (het distale gedeelte van de klier ontbreekt), is niet behoorlijk uitgerekt en delipidation heeft niet volledig plaatsgevonden.

<ol><li>Rasmussen, S. B., Young, L. J. T., Smith, G. H. Preparing mammary gland whole mounts form mice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRasmussen%2C+SB+%22Methods+in+Mammary+Gland+Biology+and+Breast+Cancer+Research%22">Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer Research</a>. Ip, M. M., Asch, B. B. , Kluwer Academic / Plenum Publishers. New York. 75-85 (2000).</li>
<li>Consensus statements from Mammary Gland Whole Mount Round Robin meeting. Oakland, CA, , (2009).</li>
<li>Hilakivi-Clarke, L., Clarke, R., Onojafe, I., Raygada, M., Cho, E., &amp, L. ippman, E, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+maternal+diet+high+in+n-6+polyunsaturated+fats+alters+mammary+gland+development%2C+puberty+onset%2C+and+breast+cancer+risk+among+female+rat+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">A maternal diet high in n-6 polyunsaturated fats alters mammary gland development, puberty onset, and breast cancer risk among female rat offspring.</a> Proc Natl Acad Sci. 94, 9372-9377 (1997).</li>
<li>Russo, I. H., Russo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammary+gland+neoplasia+in+long-term+rodent+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Mammary gland neoplasia in long-term rodent studies.</a> Environ. Health Perspect. 104 (9), 938-967 (1996).</li>
<li>Hilakivi-Clarke, L., de Assis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+origins+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22TRENDS+in+Endocrinol+and+Metabol%22%5BJournal%5D)">Fetal origins of breast cancer.</a> TRENDS in Endocrinol and Metabol. 17 (9), 340-348 (2006).</li>
<li>Hilakivi-Clarke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+modulation+of+terminal+end+buds%3A+its+relevance+to+breast+cancer+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Cancer+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Nutritional modulation of terminal end buds: its relevance to breast cancer prevention.</a> Curr Cancer Drug Targets. 7 (4), 465-474 (2007).</li>
<li>Silva Idos, S., De Stavola, B., Mccormack, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collaborative+Group+On+Pre-Natal+Risk+Factors+And+Subsequent+Risk+Of+Breast+Cancer.+Birth+size+and+breast+cancer+risk%3A+re-analysis+of+individual+participant+data+from+32+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Collaborative Group On Pre-Natal Risk Factors And Subsequent Risk Of Breast Cancer. Birth size and breast cancer risk: re-analysis of individual participant data from 32 studies.</a> PloS Medicine. 5, e193-e193 (2008).</li>
<li>Warri, A., Saarinen, N. M., Makela, S., Hilakivi-Clarke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+early+life+genistein+exposures+in+modifying+breast+cancer+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">The role of early life genistein exposures in modifying breast cancer risk.</a> Br J Cancer. 98, 1485-1493 (2008).</li>
<li>Russo, J., Hu, Y. F., Yang, X., Russo, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental%2C+cellular%2C+and+molecular+basis+of+human+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst+Monogr%22%5BJournal%5D)">Developmental, cellular, and molecular basis of human breast cancer.</a> J Natl Cancer Inst Monogr. , 17-37 (2000).</li>
<li>Oza, A. M., Boyd, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammographic+parenchymal+patterns%3A+A+marker+of+breast+cancer+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Epidemiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Mammographic parenchymal patterns: A marker of breast cancer risk.</a> Epidemiological Reviews. 15, 196-208 (1993).</li>
</ol>

Beoordeling van de borstklier morfologische end-points en de groei van de epitheliale boom kan worden gebruikt om te voorspellen of jonge leven dieet manipulaties, of andere manipulaties die veranderen in de baarmoeder of prepuberale hormonale omgeving, later borstkanker het risico te wijzigen. Omdat borstkanker bij de mens is geïnitieerd in borstklieren structuren (terminal ductaal lobulaire eenheden, TDLUs), vergelijkbaar met TEBs bij ratten, kan deze techniek worden gebruikt om het potentieel van het vroege leven blootstelling aan het risico van borstkanker beïnvloeden vast te stellen. Verder, bij vrouwen een hoge mammografische densiteit verhoogt het risico op borstkanker wordt 4-6 vouwen, en de beoordeling van de groei van de mamma-epitheel boom kan worden gebruikt om de factoren die het borstweefsel en de factoren die deze dichtheid verminderen bepalen te identificeren. Voor het verkrijgen van deze informatie moet borstklier volledig worden ontleed, behoorlijk gespannen op een glasplaatje, zodat alle onderdelen kan gevisualiseerd worden onder een microscoop. Daarnaast zal een goede karmijn vlekken en delipidation in xyleen bieden heel mounts die geschikt zijn voor borstkanker risico-evaluatie.

<table><tbody><tr><td>Gletsijzourzuur</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>AX0073-9</td><td>Carnoy&amp;rsquo;s fixatief</td></tr><tr><td>Absolute ethanol</td><td>The Waner-Graham Co.</td><td>64-17-5</td><td>Carnoy&amp;rsquo;s fixatief</td></tr><tr><td>Carmijn</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1022</td><td>Carmijnoplossing</td></tr><tr><td>Aluminiumkaliumsulfaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7167</td><td>Carmijnoplossing</td></tr></tbody></table>

veranderingen in de borstklier morfologie en het risico op borstkanker bij ratten

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

Studies in knaagdiermodellen van borstkanker tonen aan dat blootstelling aan de voeding / hormonale factoren bij de in utero en puberteitsstadium perioden, waarin de borstklier uitgebreide modellering en re-modellering ondergaat, minder gevoelig maken voor carcinogeen-geïnduceerde borsttumoren. Soortgelijke bevindingen zijn beschreven in de mens: bijvoorbeeld, een hoog geboortegewicht verhoogt later risico op het ontwikkelen van borstkanker, en de inname van soja tijdens de kinderjaren verlaagt het risico op borstkanker. Het is gedacht dat deze pre-en postnatale dieet wijzigingen blijvende morfologische veranderingen in de uier die op hun beurt te wijzigen het risico op borstkanker op latere leeftijd induceren. Deze morfologische veranderingen die reflecteren epigenetische modificaties, zoals veranderingen in de DNA-methylatie, histonen en miRNA expressie die vervolgens van invloed zijn gentranscriptie. In dit artikel beschrijven we hoe veranderingen in borstklieren morfologie kan borstklier het risico op kanker te voorspellen bij ratten. Ons protocol beschrijft specifiek hoe om te ontleden en te verwijderen van de rat buik borstklier en hoe de borstklier hele mounts voor te bereiden. Het beschrijft ook hoe borstklier morfologie te analyseren op basis van drie end-points (aantal terminale einde knoppen, epitheliale rek en differentiatie) en om de gegevens te gebruiken om het risico van het ontwikkelen van borstkanker te voorspellen.

Ons protocol wordt beschreven hoe u de rat buik borstklier ontleden en hoe de borstklier hele mounts voor te bereiden. Het beschrijft ook hoe borstklier morfologie met behulp van drie eindpunten (aantal terminale einde knoppen, epitheliale rek en differentiatie) te analyseren en om deze resultaten te gebruiken om borstkanker het risico te voorspellen bij ratten die werden blootgesteld aan de voeding wijzigingen<em&gt; In utero</em&gt; Of tijdens de prepuberteit.

Veranderingen in de borstklier Morfologie en het risico op borstkanker bij ratten

Studies in knaagdiermodellen voor borstkanker tonen aan dat blootstelling aan nutritionele/hormonale factoren tijdens de in utero- en puberteitsperiode, wanneer de melkklier ...

Het algemene doel van deze procedure is om te laten zien hoe een ma-kliergatmontage wordt gedissecteerd en geprepareerd, en hoe de morfologie ervan wordt geanalyseerd om het risico op geheugenkanker te voorspellen. Dit wordt bereikt door eerst een abdominale geheugenklier van een rat te dissecteren en vervolgens een geheugenkliergatmontage te prepareren vanuit de gedissecteerde klier. De volgende stap is het analyseren van de geheugenklier.Morfologie zichtbaar gemaakt in de hole mounts. De laatste stap van de procedure is het palperen van een rat voor de detectie van een mamma-tumor en het meten van het tumorvolume in millimeters. Met behulp van een schuifmaat kunnen uiteindelijk resultaten worden verkregen die veranderingen in de morfologie van de mamma-klier aantonen door de structuren in de mamma- en home mounts te identificeren en hun aantallen onder een microscoop te tellen of te scoren.Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het vakgebied van vroege blootstellingen en borstkanker, zoals de vraag hoe dieet- of omgevingsblootstellingen tijdens de ontwikkeling de differentiatie van de longen in de melkklieren kunnen beïnvloeden en hiermee het risico op borstkanker later in het leven kunnen bepalen. De implicaties van deze techniek strekken zich ook uit tot de preventie van borstkanker. We kunnen bijvoorbeeld omgevings- en dieetblootstellingen tijdens de ontwikkeling bestuderen en de veranderingen in de melkklier observeren, en vaststellen of deze gerelateerd zijn aan een verhoogd of verlaagd risico op borstkanker.De procedure voor tumorpalpatie wordt gedemonstreerd door Idli Cruz, diertechnicus en manager voor gedeelde diersources. Om te beginnen met de procedure voor het verwijderen van de melkklier, gebruik dan eerst naalden om het geëuthanaseerde dier bij de poten op de rug op het oppervlaktebord vast te pinnen. Veeg vervolgens de huid schoon met ethanol.Til de huid iets op met een pincet en gebruik een scherpe schaar. Maak een midline-incisie in de huid, beginnend tussen de tepels van paar nummer vijf, en snijd in richting de nek. Maak vervolgens een omgekeerde Y-incisie vanaf de middellijn in richting de achterpoten.Ontleed de huid open met een schaar aan één zijde van de omgekeerde Y-incisie om de abdominale nummer vier memory-klier bloot te leggen, welke aan de huid is bevestigd. Zet de huid met naalden vast op de ondergrondplaat om de klier volledig vrij te leggen. Gebruik vervolgens een scherpe schaar om de memory-klier los te snijden van de huid.Begin bij het proximale gebied dicht bij de tepel en werk richting het distale uiteinde van de klier, in de richting van de wervelkolom van het dier. Zodra de geheugenklier is losgemaakt, moet deze onmiddellijk op een objectglas worden uitgespreid ter voorbereiding van een whole mount. Het objectglas moet groter zijn dan de klier en voorzien zijn van de juiste etikettering. Gebruik een watervaste stift en/of een diamantstift om de klier voorzichtig uit te spreiden, overeenkomstig de oorspronkelijke grootte en vorm in C twee.Nadat de klier op het objectglas is uitgesmeerd, laat u dit ongeveer 30 minuten op de tafel rusten, zodat de klier aan het glas hecht zonder uit te drogen. Plaats het objectglas vervolgens in een pot met carnoise-fixatief en laat dit gedurende twee dagen of langer bij kamertemperatuur in de zuurkast staan. Was het objectglas vervolgens gedurende één uur in 70% ethanol bij kamertemperatuur.Spoel het objectglas af met gedestilleerd water gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur. Kleur vervolgens de klier in carmine alum-kleurstof gedurende twee dagen of langer. De kleuring is voltooid wanneer u de achterzijde van het objectglas controleert en ziet dat de lymfeklieren volledig zijn doorgekleurd.Was het preparaat in een reeks oplossingen met een toenemende ethanolconcentratie, telkens gedurende één uur. Begin met 70% ethanol, gevolgd door 95% ethanol en vervolgens 100% ethanol. Om mammary gland whole mounts te verkrijgen die technisch geschikt zijn voor morfologische analyse, zijn twee stappen essentieel: de dissectie van de gehele klier en de lipide-liquidatie van het vetbed van de melkklier.De klier wordt in xyleen geplaatst om de lipiden te verwijderen en de transparantie te verhogen. Deze klaring duurt twee dagen of langer, afhankelijk van de grootte van de klier en de hoeveelheid vet. Plaats het preparaat na de laatste wasstap in absolute ethanol in het xyleen.Laat de klier minstens twee dagen in xyleen bij kamertemperatuur blijven. Zodra de dilapidatedie voltooid is, wordt het preparaat met een dekglas gemonteerd. Gebruik een monteermedium zoals per mount en laat het preparaat enkele dagen drogen in de zuurkast voordat het onder een stereomicroscoop wordt geobserveerd; de morfologie van de montage van het geheugenglandgat wordt geanalyseerd aan de hand van drie eindpunten: epitheliale verlenging, het aantal terminale eindknoppen en differentiatie.De resultaten worden vervolgens gecorreleerd met het risico op borstkanker. We zullen eerst de analyse van een hele mount van een melkklier uit de prepubertaire fase demonstreren om de epitheliale elongatie te beoordelen. Gebruik een liniaal om in millimeters de afstand van de tepel tot het uiteinde van de epitheliale boom te meten.Het tweede eindpunt, het aantal terminale epitheliale knoppen (TEK's), weerspiegelt het potentieel voor maligne transformatie. Tel onder een lichtmicroscoop het aantal TEK's, wat de grootste pulpachtige structuren zijn die zich uitsluitend aan het distale uiteinde van de mamma-epitheliale boom bevinden, voor het derde eindpunt: differentiatie. Het volledige preparaat (whole mount) wordt eveneens onder de lichtmicroscoop onderzocht.Differentiatie wordt gemeten door de alveolaire knoppen, die verspreid over het epitheel liggen, te scoren. De twee alveolaire knoptypes, aangeduid als AB één en AB twee, krijgen elk een score van nul tot vijf op basis van hun overvloed in de klier. De scorewaarden voor AB één en AB twee worden vervolgens bij elkaar opgeteld voor een uiteindelijke differentiatiescore.De morfologische analyse van een postpuberale H-geheugenkliertopname is vergelijkbaar met die van een prepuberale H-geheugenkliertopname, met de volgende verschillen. Om de epitheliale elongatie te onderzoeken, meet u eerst met een liniaal de afstand in millimeters van de lymfeklier tot het uiteinde van de epitheliale boom. Meet vervolgens de afstand van de top van de epitheliale boom tot het uiteinde van het vetkussen.Tevens in millimeters voor de analyse van differentiatie. In een postpuberale H-geheugenkliertopmount worden, naast alveolaire knoppen, lobuli gescoord op een schaal van nul tot vijf onder een lichtmicroscoop. De score weerspiegelt de overvloed aan lobuli in de klier.De differentiatie wordt vervolgens op twee manieren beoordeeld. Ten eerste worden de scorewaarden van AB één, AB twee en de LOE's opgeteld voor een uiteindelijke differentiatiescore. Ten tweede wordt de ratio van de LOE-score ten opzichte van de som van de AB één- en AB twee-score berekend.Aangezien ABS twee LOE's differentiëren, zal een meer gedifferentieerde klier een hogere ratio LOE's ten opzichte van abs hebben. Om met deze procedure te beginnen, houdt u de rat vast door het hele lichaam te omvatten met de palm over de rug, de wijsvinger achter de kop en de duim en middelvinger onder de tegenovergestelde oksel. Draai de rat zodat deze op de rug ligt en palpeer om eventuele geheugentumoren op te sporen; palpabele tumoren moeten aanvoelen als een knobbeltje.Gebruik vervolgens een schuifmaat om de breedte, lengte en hoogte van de tumor te meten. Bereken het tumorvolume met behulp van de ellipsoïdenformule. Het volume is gelijk aan een zesde pi, A, B, C, waarbij A de breedte, B de lengte en C de hoogte is.Noteer wekelijks handmatig de locatie en de grootte van de tumor in een notitieboek. Deze gegevens worden later overgebracht naar een spreadsheet zodra ze correct zijn gedissekeerd en verwerkt. De mount van het gat in de geheugenklier moet alle componenten duidelijk zichtbaar hebben, zoals getoond in dit voorbeeld.In tegenstelling hiermee is dit een voorbeeld van een slecht geprepareerd whole-mount preparaat van een melkklier. De klier is niet correct gedissekeerd omdat het distale gedeelte ontbreekt. Daarnaast is de klier niet voldoende uitgerekt en heeft er geen degradatie plaatsgevonden.Volledig getoond. Hier zijn representatieve resultaten van hoe veranderingen in de morfologie van de melkklier het risico op borstkanker kunnen voorspellen. Bij ratten die waren blootgesteld aan het carcinogeen DMBA, waarbij het aantal terminale N-knoppen of TBS werd geteld, vertoonde de behandelgroep na 21 dagen een hoger aantal TBS in vergelijking met de controlegroep.Deze veranderingen in de morfologie van de melkklier waren geassocieerd met een hoger aandeel geheugentumoren bij ratten in de behandelgroep vergeleken met de controlegroep, zoals weergegeven in deze grafiek. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden de gehele melkklier te dissekeren en alle lipiden te verwijderen om een goede visualisatie van de melkklierstructuren te waarborgen.Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht hebben in hoe u een mammary hole mount moet disseceren en prepareren, en hoe u de morfologie ervan analyseert om het risico op borstkanker te voorspellen.

changes-in-mammary-gland-morphology-and-breast-cancer-risk-in-rats

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit artikel toont de procedure ontwikkeld door DeOme...

Borstklieren Epitheliale Transplant Procedure

Deze methode beschrijft hoe te ontleden en te evalueren ontwikkeling van de borstklier en de functie van muizen. Weggesneden borstklieren zijn beoordeeld op de mate van ontwikkeling met behulp van ganse berg, terwijl melk ejectie is geëvalueerd met behulp van een oxytocine-based myo cel contractie assay.

Evaluatie van de ontwikkeling van de borstklier en functie in muismodellen

De indirecte immunofluorescentie protocol beschreven in dit artikel laat de detectie en de lokalisatie van eiwitten in de muis borstklier. Een complete methode wordt gegeven voor te bereiden borstklier monsters, om immunohistochemie uit te voeren, om de afbeelding van het weefsel secties met behulp van fluorescentie microscopie, en om beelden te reconstrueren.

Indirecte Immunofluorescentie op Bevroren Secties van Muis borstklier

Er werd een chirurgische procedure ontwikkeld om mamma-tumorcellen via injectie in de poortader in de muizenlever af te leveren. Dit model maakt onderzoek naar late stadia van levermetastase mogelijk bij een volledig immuuncompetente gastheer, inclusief extravasatie van tumorcellen, zaaien, overleven en metastatische uitgroei in de lever.

Een poortader Injection Model op de studie van de lever metastase van borstkanker

Ontwikkeling van de mammageklier in het knaagdier is typisch geëvalueerd met behulp van beschrijvende beoordelingen of door het meten van basis fysieke attributen. Vertakingsdichtheid is een indicator van de ontwikkeling van de moeders die moeilijk is om objectief te kwantificeren. Dit protocol beschrijft een betrouwbare methode voor de kwantitatieve beoordeling van de vertakkingseigenschappen van de borstklier.

Kwantificerende vertakkingsdichtheid in Rat Mammary Gland Whole-mounts Met behulp van de Sholl Analyse Methode

We ontwikkelden een methode om succesvol te verwijderen, verwerken, delen en vlek voor histopathologische evaluatie, mammariumweefsel dat oorspronkelijk op glijbanen was vastgezet als gehele mounts. Deze methode kan de verzameling en evaluatie van de hele membraan van de borstklier bevorderen in onderzoeken voor reproductieve en ontwikkelingstest.

Sectie Mammary Gland Whole Mounts voor Lesion Identificatie

Hier presenteren we een protocol voor de isolatie van geheel, intact muis borstklieren om te onderzoeken van de extracellulaire matrix (ECM) expressie en ductaal morfologie. Muis #4 abdominale klieren werden gehaald uit de 8-10 week oude vrouwelijke nullipaar muizen, vast in neutraal gebufferde formaline, gesegmenteerd en gekleurd met behulp van immunohistochemistry voor ECM eiwitten.

Isolatie van Intact, hele muis borstklieren p.a. van extracellulaire Matrix expressie en klier morfologie

Het doel van dit protocol is om een nieuwe borstkanker modellerings aanpak te beschrijven op basis van de intraductale injectie van CRE-uitdrukken van adenovirus in muizen borstklieren. Deze aanpak maakt zowel cel-type-en orgaan-specifieke manipulatie van oncogene gebeurtenissen op een tijdelijk gecontroleerde manier mogelijk.

Het modelleren van borstkanker via een Intraductale injectie van CRE-uitdrukken van adenovirus in de muis borstklier

Dit artikel beschrijft een transplantatiemethode om donorrattenborstepitheelcellen te transplanteren in het interscapulaire witte vetkussen van de ontvangende dieren. Deze methode kan worden gebruikt om gastheer- en/of donoreffecten op de ontwikkeling van borstepitheel te onderzoeken en elimineert de noodzaak van pre-clearing, waardoor het nut van deze techniek wordt uitgebreid.

Rat Mammary Epitheliale Celtransplantatie in de Interscapular White Fat Pad

Patient-derived xenograft (PDX) modellen en transplanteerbare genetisch gemanipuleerde muismodellen getrouw de menselijke ziekte samenvatten en zijn voorkeursmodellen voor fundamenteel en translationeel borstkankeronderzoek. Hier wordt een methode beschreven om borsttumorfragmenten orthotopisch in het borstvetkussen te transplanteren om tumorbiologie te bestuderen en de respons van geneesmiddelen te evalueren.

Orthotopische transplantatie van borsttumoren als preklinische modellen voor borstkanker

Een procedure voor de levering van een chemische ablatieve oplossing aan de borstkanaalboom van de rat voor beeldgeleide preventieve behandeling van borstkanker wordt beschreven. Borstepitheelcellen kunnen worden gericht met minimale collaterale weefselschade door cannulatie rechtstreeks in de tepelopening en intraductale infusie van een 70% op ethanol gebaseerde ablatieve oplossing.

Röntgenvisualisatie van intraductale op ethanol gebaseerde ablatieve behandeling voor de preventie van borstkanker in rattenmodellen

Leer de dissectie en preparatie van mammaklieren bij ratten voor morfologische analyse. Deze methode helpt onderzoekers borstkankerrisico te voorspellen op basis van vroege voedingsinterventies.

Veranderingen in de borstklier Morfologie en het risico op borstkanker bij ratten

Meer video's verkennen