Name: Isolement de lADN génomique de souris Tails (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Découvrez l'extraction d'ADN génomique à partir de biopsies de queue de souriceaux de 10 jours. Cette méthode fiable permet d'obtenir du matériel génétique tout en évitant la contamination entre échantillons.

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<ol style="margin-top: 0in"><li> Couper des morceaux de la queue (3mm) et les oreilles marque. </li><li> Ajouter 720 m l STE et 30 m de l protéinase K (10 mg / ml de stock). </li><li> Incuber à 55 ° C sur le bloc de chauffage et de vortex toutes les heures pendant 3 heures à la vitesse supérieure pendant 10 secondes. </li><li> Inactiver la protéinase K à 70 ° C pendant 5 minutes. </li><li> Quench sur la glace pendant 5 minutes. </li><li> Centrifugeuse ADN de queue pendant 10 minutes à pleine vitesse. </li><li> Décanter dans un nouveau tube contenant 720 m l Isopropanol. &nbsp; </li><li> Précipiter l&#39;ADN en inversant le tube ou vortex. </li><li> Isoler l&#39;ADN pendant 5 minutes à pleine vitesse. Retirer le surnageant. </li><li> Laver le culot à l&#39;éthanol 70%. </li><li> Isoler l&#39;ADN génomique 5 minutes à pleine vitesse. Retirer le surnageant. </li><li> Laisser sécher l&#39;ADN pendant 1-2 minutes. </li><li> Remettre en suspension dans l&#39;ADN 100-200 L m selon la taille des granulés. </li><li> Placer le tube à 55 ° C pendant 1 heure pour faciliter la dissolution de l&#39;ADN. &nbsp; </li></ol>

<table><tbody><tr><td>STE</td><td>Tampon</td><td></td><td></td><td>100 mm Tris ; pH 8,5 / 5 mM EDTA / 0,2 % SDS / 200 mM NaCl / dans H2O</td></tr><tr><td>TE</td><td>Tampon</td><td></td><td></td><td>100 mM Tris ; pH 5,0 / 1 mM EDTA / 10 mM NaCl</td></tr></tbody></table>

isolement de l&#39;adn génomique de souris tails

Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails

Isolement de l&#39;ADN génomique de souris Tails

Il s'agit donc d'un souriceau âgé de 10 jours dont je vais prélever un échantillon de queue, puis extraire l'ADN génomique à partir de cet échantillon. Je vais donc couper une petite partie de sa queue, d'environ trois millimètres, puis placer ce morceau de queue dans un tube Eppendorf, que je mettrai ensuite sur de la glace sèche. Afin d'éviter toute contamination d'une souris à une autre, je marque généralement la lame de rasoir à l'endroit où j'ai effectué la dernière coupe.Ainsi, pour la souris suivante, je m'assurerai d'utiliser un morceau propre de lame de rasoir pour prélever le prochain échantillon de queue. Afin de distinguer les différentes souris de votre portée, vous devrez disposer d'un moyen d'identifier les souris. L'une des méthodes consiste à percer un trou dans leurs oreilles à l'aide d'un poinçon auriculaire, tel que celui illustré ici.Saisissez délicatement la souris par la peau du cou, retournez-la, puis pincez sa queue entre vos doigts. Prenez la perforatrice à oreille de l'autre main et faites une petite incision rapide dans l'oreille de la souris. Voyez comme cela est indolore ?D'accord, vous pouvez maintenant voir que j'ai quelques morceaux de queue dans ce

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Le génotypage complet d'un échantillon de queue de souris, y compris la digestion des tissus et la lecture de PCR, se fait en une heure et demie au moyen de Sigma SYBR Green Extract-N-Amp Tissue kit de PCR.

Génotypage rapide des tissus de souris en utilisant Sigma Extract-N-Amp PCR Kit Tissu

Nous démontrons une immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) méthode pour identifier les interactions de facteurs au tissu-spécifique des gènes pendant ou après l'apparition de tissu-spécifique l'expression des gènes dans les tissus embryonnaires de souris. Ce protocole devrait être largement applicable pour l'étude de l'activation de gènes spécifiques de tissus comme il se produit pendant le développement embryonnaire normal.

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Dans cette vidéo, nous montrons une procédure de coupe de queue dans un modèle murin pour collecter du sang périphérique. Le sang collecté est ensuite soumis à une centrifugation pour séparer le plasma, qui peut être utilisé pour d’autres expériences.

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Cultures Génération fibroblastes primaires de souris oreilles et la queue tissus

La micro-injection d'ovocytes de souris est couramment utilisée à la fois pour la transgénèse classique ( c.-à-d. L'intégration aléatoire des transgènes) et le ciblage des gènes médié par CRISPR. Ce protocole examine les derniers développements en micro-injection, avec un accent particulier sur le contrôle de la qualité et les stratégies de génotypage.

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Découvrez l'extraction d'ADN génomique à partir de biopsies de queue de souriceaux de 10 jours. Cette méthode fiable permet d'obtenir du matériel génétique tout en évitant la contamination entre échantillons.

Isolement de l'ADN génomique de souris Tails

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