Name: 치킨 청각 Brainstem 슬라이스의 준비 및 문화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 16 s
Description: 배우세요 닭 청각 뇌간 슬라이스 제작 및 배양 방법을 통해 청각 신경 발달과 생리학적 특성을 연구하세요. 이 기술은 생체외 전기생리학 기록과 장기 배양에 활용됩니다.

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1. 지역 분석 해 봅시다의 준비 <ol><li> 95% O 2 / 5% CO 2의 혼합물 (7.2-7.4 사이의 산도, osmolarity 295-310 mOsm / L)와 함께 지속적으로 거품 인공 대뇌 척수 (ACSF). </li><li> ACSF가 버블링이지만, 70 % EtOH로 작업 영역을 청소하십시오. vibratome과 깔끔히 칼날에도 청소. 증류수 (DH 2 O)의 칼날을 씻어. </li><li> 적절한 해부 도구로 영역을 해부 깨끗한 유체 흡수 패드를 놓습니다. </li><li> vibratome - 깔끔히 챔버의 무대에 글루 한천 블록 (DH 2 O 40 MG 아가로 오스 / ML, 즉 4%) *. * 도움말 : 해부하기 전에 한천을 준비합니다. 냉장고에 덮여 페트리 접시 안에 스토어 미리 만든 한천. 아가로 오스는 EMD 화학 물질이나 Invitrogen에서 구입했습니다. </li></ol> 2. 문화 매체와 6 - 잘 플레이트의 준비 <ol><li> 멸균 후드 아래, 35 문화 매체와 부화 1 ML과 6 자 접시의 동물마다 잘 작성 1 ° C와 5 % CO 2. </li><li> 많은 문화 막 삽입 등 필요한 준비하고 나중에 사용하기 위해 모자를 놓으십시오. </li></ol> 3. 치킨 청각 Brainstem의 분리 <ol><li> 배아 (일반적으로 계란의 큰 쪽)의 공기 가득한 공간 무효를 결정하는 밝은 광원에 따라 플레이스 달걀. </li><li> 멤브레인 색을 노출 계란의 대형 측면을 열고 브레이크. 때론 막 색으로 슬라이스를 만들어 부드럽게 닭 배아의 머리를 제거합니다. </li><li> 신속하게 가위로 머리가 목을 베다. </li><li> 와 눈 사이 약간 후부 면도날의 장소 끝. 단 약간의 압력을 적용하는 두개골을 통해 주동이의 - 투 - 꼬리 정중선 절개를합니다 *. * 팁 : 적용 압력이 배아의 나이에 따라 달라집니다 (즉, 젊은 = 적은, 나이 = 이상) </li><li> 부드럽게 피부와 두개골을 노출하고 정중선 절개를 확인하기 위해 깃털을 잊어버리게. </li><li> 면도날로 깔끔히에 의해 두개골의 주동이의 부분을 차단합니다. 눈 뒷부분 빠르게 전체 두개골과 뇌 조직을 통해 절단 위치 블레이드 *. * 도움말 : 강한 압력이 완전히 주동이의 섹션을 제거하기 위해 필요합니다. </li><li> 머리 양쪽에 볼 수 목 근육에 약간 앞쪽에 두개골의 꼬리 지역에 작은 가위와 정중선 - 투 - 측면 incisions하십시오. 두개골과 소뇌 및 뇌 노출 조직을 멀리 당기세요. </li><li> 부드럽게 작은 가위로 연결된 조직을 절단하여 두개골 바닥에서 brainstem를 제거합니다. 모든 조직이 절단되면, brainstem가 두개골에서 떨어져 자유롭게 이동한다 *. * 팁 : 연결된 조직을 잘라 두개골 (뇌 아래)를 플립해야 할 수도 있습니다. </li></ol> 4. 부러 뜨리 Brainstem의 준비 <ol><li> 일단 두개골에서 제거, 광학 tecta 통해 brainstem을 핀. </li><li> 완전히 부드럽게, 작은 가위로 peduncles 절삭 번째 뇌실의 바닥을 노출하여 소뇌를 제거합니다. </li><li> 핀셋으로 brainstem의 표면으로부터 막의 조직과 혈관을 제거하고 brainstem을 분리하기 위해 광학 tecta을 통해 측면 인하합니다. </li><li> 한천 블록의 앞에 vibratome 단계 (vibratome 블레이드 향해)에 슈퍼​​ 접착제의 작은 금액을 넣으십시오. </li><li> 족집게를 사용하면, 부드럽게 그리고 신속하게 vibratome 블레이드에 대한 주동이의 측면 아래로 등의 측면과 슈퍼 접착제로 척수와 장소 조직에서 brainstem 리프트 *. * 도움말 : 초과하는 접착제가로 흡수해야 킴 - 닦아 또는 다음 단계 전에 종이를 필터링합니다. </li><li> 부드럽게 vibratome 단계로 산소 ACSF를 따르다 *. * 참고 :이 ACSF 연속 O 2 / CO 2와 함께 부풀어 오른 수 있습니다. 그러나, brainstem의 조각을 원하지 않는 운동의 솔루션 결과 같은 작은 볼륨 (및 손상)에 ACSF들이 꿈틀. 빠르게 수행할 경우, 이미 해부에서 ACSF 충분 산소. </li><li> Vibratome 블레이드는 20-22 °의 각도로해야합니다. 시작 vibratome (진동이 최대 진폭에서 설정해야합니다)과이 조직의 최고가 깔끔히 전에 블레이드와 평행이되도​​록 블레이드 향해 무대를 이동합니다. </li><li> 신속 brainstem 조직으로 블레이드를 이동합니다. 조직과 블레이드 연락 상당히 직전 천천히. </li><li> 느린 가능 전진 운동과 조직을 깔끔히 시작합니다. 일단 조직의 전체 코로나 섹션을 통해, 부드럽게 브러쉬 또는 깨진 유리와 블레이드에서 슬라이스를 멀리 이동 광택 피펫은 고무 전구 한 끝에 맞게, 발사. </li><li> 로우어 300-500 μm의 단계로 무대와 다시 조각. 해부 학적 서명 brainstem 조직에서 볼 때까지 반복합니다. 이때, 200-1000 μm의의 청각 구조를 포함하는 슬라이스 brainstem 조직 조직과 실험 요구 나이에 따라 두께. </li><li> 조심스럽게, IE를 깔끔히의 순서로 사용할 슬라이스를 유지, 1 일 슬라이스는 회로의 가장 꼬리 영역 (저주파 사운드 처리)을 나타내고 마지막 슬라이스가 가장 주동이의 섹션 (고주파 processi을 나타냅니다NG) *. * 참고 : 문화 사용을 위해 조각의 배치에 대해, 제 6으로 이동하십시오. 체외 수정 생리학 스토리지, 다음 섹션을 참조하십시오. </li></ol> 5. 체외 수정 생리학에 대한 슬라이스 스토리지 <ol><li> 치킨 배아 및 슬라이스의 두께의 연령에 따라 각 동물 1-6 조각을 제공한다. </li><li> 부드럽게 고무 벌브 한 끝에 장착되어 화재 광택 유리 피펫을 사용하여 챔버에서 개별 조각 장소. 상공 회의소 번호가 있어야합니다. 일부 tonotopic 특이성 (예, 챔버 한 대부분의 꼬리 조각과 마지막 챔버에서 가장 주동이의 슬라이스) 유지하기 위해 잘마다 하나의 슬라이스를 놓습니다. 상공 회의소는 ACSF 가득 지속 95% O 2 / 5% CO 2 (산도 7.4, osmolarity 295-310 mOsm / L)의 혼합과 함께 부풀어 오른해야합니다. </li><li> 조각은 약 1 시간 동안 따뜻한 목욕 (36 ° C)에 챔버를 삽입하여 평형 수 있습니다. </li><li> 따뜻한 목욕에서 챔버를 제거하고 약 ½의 시간 실온에서 휴식을 허용합니다. </li><li> 상온에서 ½ 시간 후, 조각은 electrophysiological 실험 현미경에 장착된 ~ 0.5 ML 기록 챔버에 보관 챔버에서 전송할 수 있습니다. </li><li> 조각은 따뜻한 목욕에서 제거 후 ~ 6 시​​간에 사용할 수 있습니다. </li></ol> 6. Organotypic 슬라이스 문화 8 준비 <ol><li> 즉시 전송 조각 얼음이 48 잘 접시에 고무 전구 한 끝에 장착되어 화재 광택 유리 피펫을 사용하여 ~ 500 μL ACSF와 (제 6 항 참조) 깔끔히 절차에 따라. 하나는 잘마다 조각 *. * 팁 : 조각이 적어도 300 μm의 두께 및 최대 1000 μm의해야합니다. </li><li> 조각이 수집되고 나면, 후드에 48 잘 접시를 전송합니다. </li><li> 보육의 6 자 플레이트가 포함된 배지 출력을 제거하고 후드에 전송할 수 있습니다. </li><li> 직전 장소는 문화 매체로 우물에 (섹션 2.2 참조), 세포막에 하나의 머리에서 조각을 준비 막 삽입 중 하나를 배치하는. 더 공기 거품이 막 아래에 존재하지 있는지 확인합니다. </li><li> 유리 피펫을 사용하여 문화 막에 ACSF의 드롭에 슬라이스를 전송하고 micropipette로 초과 ACSF를 제거합니다. 남은 조각을 반복 (막 당 최대 4 조각) * * 도움말 : 그들이 막 림을 만지지 않도록 조각이 막에서 중앙 서로 접촉과 장소의 조각하지 않도록합니다. </li><li> 필요에 따라 많은 뇌 조각을 반복 * * 도움말 : 문화가 나중 지점에서 조작하는 경우에는 문화가 인큐베이터에서 제거하는 시간을 줄일 수로가 6 자 판 당 3 세포막의 양을 제한하는 유리 수도 있습니다. </li><li> 문화 매체에게 후드 아래에 3 회 일주일 변경 : 막 삽입이 포셉 한 쌍의으로 잘 밖으로 해제하는 동안 진공 튜브 살균 팁과 함께 오래된 매체를 제거합니다. 멤브레인 삽입이 잘 밖으로 해제되는 동안에 잘 신선한 문화 매체 1 ML을 추가합니다. 모든 매체가 변경되면, 인큐베이터에 다시 접시를 넣어. </li></ol> 7. 대표 결과 : <img src="/files/ftp_upload/2527/2527fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 치킨 청각 brainstem의 Binaural 회로. 코로나 섹션 (A) 도식과 치킨 청각 brainstem의 (BF)에 - 체외의 슬라이스 이미지. (A)의 회로는 핵 magnocellularis (NM)와 핵 angularis (NA)로 청각 신경 ()에서 수입 성의 흥분성의 입력을 보여줍니다. NM은 brainstem 양쪽에 핵 laminaris (NL)에 양자 흥분성의 입력을 프로젝트. NA, NM 및 NL에 뛰어난 olivary 핵 (아들) 프로젝트에서 억제 입력. 의 체외 수정의 조각 (BF)는 순차 이미지 고주파 영역 낮은로 대표 꼬리에서 (B) 치킨 청각 brainstem의 주동이의 (F) 갈 (각 200 μm의)는, 각각 있습니다. 회로 소리 로컬 라이제이션을 위해 주로 사용 소리의 시간적 특성을 코딩에 대한 책임이 있습니다. 규모 바 (B) = 500 μm의 및 이미지 (CF) 적용됩니다. NL의 단세포 몸 레이어 (D) 지점에서 화살표. <img src="/files/ftp_upload/2527/2527fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 교양 뉴런 정상 physiologic 응답 특성을 개발할 수 있습니다. 급성 (A &amp; C) 4 (B) 7 (D) 문화 일 (DIC)에서 교양 조직에서 현재 단계를 hyperpolarizing하고 depolarizing에 대한 응답으로 막 전압 변화를 겹쳐. 연령 상응하는 급성 조직에 비해 슬라이스 문화 접근에 유사하게 개발 전압 "세그"외부 전류에 강한 감소하고, 하나의 AP 시행을 hyperpolarizing에 참고 변경됩니다. 현재 주사가 50-100 PA 200 MS, 단계되었습니다. RMPs은 -55과 -60 MV 사이에 있었다. <img src="/files/ftp_upload/2527/2527fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 문화 SLI의 해부 구조CES. 문화 7 일 후 E11 치킨 (DIC)의 청각 brainstem의 왼쪽 반동안. 소마와 dendrites에서 발생하는 미세 소관 결합 단백질 2 (MAP2)에 대한 항체는 녹색으로 표시됩니다. 핵 magnocellularis (NM) 뉴런과 axons의 클러스터는 알렉사 dextran 염료의 electroporation을 통해 빨간색으로 표시됩니다. NM와 NL 세포 라인 모두 볼 수 있습니다. Ipsilateral NM의 축삭 터미널은 지느러미 NL의 dendrites (흰색 화살촉)에 돌출 볼 수 있습니다.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

몇 수십년 동안 치킨 brainstem의 급성 슬라이스 준비는 청각에게 처리 9, 10을 연구하는 데 사용되었습니다. 이러한 접근 방식은 모두 발달 및 성숙 상태 4, 11, 12 binaural 처리에에 - 체외 생리 어마어마한 양의 데이터를 제공하고 있습니다. 대부분이 고도로 전문화된 회로와 각 핵 소리 13, 14의 시간적 처리하는 역할에 대한 알려져있다. 사실,이 잘 특징 회로의 구조와 기능에 대한 단기 실험 조작과 그 효과가 유리한 15 입증했습니다. 장기적인 관점에서 개발하지만, 이러한 조작은 불가능하고이 문제를 해결하기 위해 기술이 보증됩니다. 여기 우리는 이러한 질문을 조사할 수있는 기회를 제공하는 소설 기법을 제안합니다. 궁극적으로, organotypic 슬라이스 문화는 특정 이상 긴 개발 기간에 시냅스 활동, 내장 채널 규정, postsynaptic 수용체 응답 및 차동 유전자 발현을 조작 가능성을 제공합니다. 이 ...

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;닭 ACSF&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>M-11624</td><td>130 mM</td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>M-10576</td><td>26 mM</td></tr><tr><td>KCl</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-9333</td><td>3 mM</td></tr><tr><td>NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-8282</td><td>1.25 mM</td></tr><tr><td>Glucose</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7528</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>M33-500</td><td>1 mM</td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>Acros Organics</td><td>423525000</td><td>2 mM</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;닭 세포 배양액 (4&amp;#x00B0;C 보관)&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>advanced minimum essential medium (NEAA 함유, sodium pyruvate 110 mg/l 함유, L-glutamate 제외)</td><td></td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>12492-013</td><td>48.00%</td></tr><tr><td>Earl&amp;rsquo;s balanced salt solution</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-2888</td><td>24.00%</td></tr><tr><td>L-glutamine (200 mM)</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7513</td><td>1.00%</td></tr><tr><td>Glucose 용액 (200 g/l, 멸균 여과됨)</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7528</td><td>2.75%</td></tr><tr><td>말 혈청 (열 불활성화, 멸균 여과됨)</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H-1138</td><td>24.00%</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin*</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-0781</td><td>1.00 ml&lt;br/&gt;* = 오염 방지를 위해 필요한 경우 배양액 100 ml에 첨가</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;특수 장비&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millicell-CM 세포 배양 인서트</td><td>PICMORG50</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-웰 플레이트</td><td>6 Well Cell Culture Cluster</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>Forma Scientific CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 워터 재킷 인큐베이터</td><td>Forma Scientific</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

치킨 청각 brainstem 슬라이스의 준비 및 문화

Preparation and Culture of Chicken Auditory Brainstem Slices

닭고기 청각 brainstem 널리 개발 1-4 신중 기간에서뿐만 5-7 중추 신경 시스템에서 시간적 코딩을위한 메커니즘으로 청각 처리의 해부학과 생리학을 연구하는 데 사용되었습니다 잘 구축 모델 시스템입니다. 여기 급성 실험 절차 또는 장기 실험 조작에 대한 문화 organotypic 조각하는 데 사용할 수있는 닭고기 청각 brainstem의 조각을 준비하는 방법을 제시한다. 닭고기 청각 brainstem는 핵의 angularis, magnocellularis, laminaris 및 뛰어난 올리브로 구성되어 있습니다. 이 핵은 binaural 사운드 처리 및 단일 코로나 슬라이스 준비 전체 회로를 보존 책임이 있습니다. 궁극적으로, organotypic 슬라이스 문화는 시냅스 활동, 사전 및 postsynaptic 구성 요소의 표현, 부분 통제 흥분과 차별 유전자 발현의 표현과 같은 몇 가지 발달 매개 변수를 조작할 수있는 기회를 제공할 수 있습니다 이 접근법은 신경 회로 개발, 교양과 성숙에 대한 일반 지식을 확대하는 데 사용할 수 있습니다.

닭고기 청각 brainstem는 binaural 사운드 처리에 대한 책임 핵으로 구성되어 있습니다. 교양 접근, 분자 세포 및 네트워크 수준에서의 연결 구조와 청각 기능의 발달을 연구하기 위해 특별한 준비를 제공하는 동안 하나의 코로나 슬라이스 준비는 전체 회로를 유지합니다.

치킨 청각 Brainstem 슬라이스의 준비 및 문화

닭의 청각 뇌줄기는 ...에서의 청각 처리 해부학 및 생리학을 연구하기 위해 널리 사용되어 온 잘 확립된 모델 시스템입니다.

본 절차의 전반적인 목표는 인 비트로(in vitro) 전세포 생리학 또는 장기 기관형 배양에 사용할 닭의 청각 뇌줄기 절편을 준비하는 것입니다. 이는 먼저 알에서 배아를 제거함으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 두개골에서 뇌를 적출하고 청각 뇌줄기 영역을 분리하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 바이옴(viome) 상에서 뇌줄기 영역의 절편을 준비하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 뇌줄기 절편을 생리학적 기록을 위한 챔버에 넣거나 배양을 위해 Millipore 플레이트에 배치하는 것입니다. 최종적으로, 생리학적 기록 또는 장기 기관 유사 배양을 통해 닭 배아로부터 건강한 청각 뇌줄기 절편을 얻을 수 있습니다.안녕하세요, 제 이름은 Armand Sidle입니다. 이 방법은 조류의 청각 발달에 대한 통찰을 제공할 수 있습니다. 또한, 이 양이 청각 회로의 독특한 구조와 기능 덕분에 지형적 축삭 재생, 수지상 돌기 역학뿐만 아니라 내재적 및 시냅스 특성을 연구하는 데에도 사용될 수 있습니다.일반적으로 이 기술을 처음 접하는 사람들은 어려움을 겪을 수 있습니다. 생리학적 분석 및 배양법에 사용할 수 있는 생존 가능한 샘플을 확보하려면 조직을 신속하게 적출하고 절편화하여 보관해야 합니다. 먼저, 증류수 1mL당 agar 40mg을 첨가하여 4% agar 용액을 만든 후, 마이크로웨이브에서 끓을 때까지 가열하십시오.뜨거운 한천 용액을 페트리 접시에 붓고, 응고되어 단단해질 때까지 식힙니다. 한천의 작은 블록을 잘라내어 진동 절편기 스테이지에 고정합니다. 다음으로, 나중에 사용할 인공 뇌척수액(A CSF) 500에서 1000밀리리터를 준비합니다.95% 산소와 5% 이산화탄소 혼합 가스를 지속적으로 버블링하여 진동 절편기(vibrato stage) 챔버 내에서 사용하며, pH 범위는 7.2에서 7.4, 삼투압은 295에서 310 milli osmoles per liter로 유지합니다. A CSF가 버블링되는 동안, 해부 및 배양 영역, 진동 절편기 및 블레이드를 70% 에탄올로 세척합니다. 진동 절편기 블레이드를 증류수로 헹구고 건조시킨 후, 해부 영역에 깨끗한 액체 흡수 패드를 배치하고 메스, 가위, 핀셋, 면도날, 핀, 페트리 접시, 스파출러로 구성된 적절한 해부 도구들을 준비합니다. 멸균 조직 배양 후드 아래에서, 6구 웰 플레이트의 웰 하나당 닭 배아 하나씩을 채웁니다.1 mL의 배양이 포함된 웰 플레이트를

preparation-and-culture-of-chicken-auditory-brainstem-slices

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이것은 피라미드 뉴런에서 전기 레코딩을 만드는 목적 organotypic 문화 neocortical 슬라이스 준비를 준비하고 유지하는 프로토콜입니다.

네크로 텍스의 Organotypic 슬라이스 준비에서 전체 셀 녹음

이 비디오는 실험실 환경에서 쐐기 모양의 뇌 절편을 준비하는 과정을 보여줍니다. 비브라톰을 사용하여 쥐의 뇌에서 나온 쐐기 모양의 조각을 다양한 두께로 만듭니다. 이 절편에는 청각 신경근이 두꺼운 쪽에 위치하고, 청각 관련 뉴런은 얇은 쪽에 위치합니다.

청각 뉴런을 시각화하기 위한 쐐기 뇌 슬라이스 준비하기

이 비디오는 소뇌 절편을 준비하는 방법을 보여줍니다. 병아리 배아에서 소뇌를 분리하는 자세한 절차를 보여줍니다. 그런 다음 추가 실험 분석을 위해 조직 헬기를 사용하여 절개된 소뇌에서 조각을 준비합니다.

Obtaining Cerebellum Slices from an Embryonic Chick Brain

슬라이스 문화 유전자와 약리 섭동에 의해 배아 개발의 조작을 용이하게합니다. 그러나, 문화 조건은 일반적인 개발 슬라이스의 감소 환경 내에서 수행 할 수 있는지 확인해야합니다. 우리는 최소 24 시간 동안 진행되는 것이 정상적인 척추의 개발을 용이하게하는 프로토콜을 보여줍니다.

닭의 배아 척수 코드 슬라이스 문화 프로토콜

여기 우리는 신경과 hindbrain의 청각 축삭 섬유의 추적 선택을위한 초기 여자의 태아의 청각 신경에 형광 염료를 주입 한 다음 microdissection 기술을 설명합니다.

조류 배아 Vestibulocochlear 신경 청각 섬유의 선택적 추적

진동은 기본적인 네트워크 속성이며 질병과 약물에 의해 조절된다. 뇌 슬라이스 진동을 공부하는 것은 통제 된 조건에서 격리 된 네트워크의 특성을 수 있습니다. 프로토콜은 CA1의 γ 진동을 불러 일으키는 급성 뇌 조각의 준비를 위해 제공됩니다.

파상풍의 자극에 의​​해 지역의 CA1 γ 진동의 발생

소뇌 외부 과립 층은 개발 뇌에서 가장 큰 교통 증폭의 사이트입니다. 여기, 우리는 배아의 날 (14) 병아리 배아에서 생체 전기와 소뇌 조각의 문화를 사용하여 확산의 절정에이 계층에 유전자 변형을 대상으로하는 프로토콜을 제시한다.

예 생체 병아리 소뇌 조각의 문화가 공간적으로 Electroporation에 과립 세포 전구체의 표적

조류와 포유류의 청각 뇌간 신경은 빠른 청력 엔코딩에 특화되어있어 정상적인 청력 기능을위한 기본적인 과정입니다. 이러한 뉴런은 배아 뒷다리의 뚜렷한 전구체에서 발생합니다. 우리는 청각 발달 과정에서 유전자 기능을 연구하기 위해 닭 배아의 뒷배부에 유전자를 발현시키기 위해 일렉트로 포 레이션을 이용하는 기술을 제시한다.

닭 오라클 Brainstem의 Ovo Electroporation에서

이 프로토콜 모두 시각적으로 통신 brainstem 척수 준비 하 고 포괄적인 단계별 방식 brainstem 가로 조각의 준비를 명확히. 그것은 재현성을 증가 하 고 brainstem의 호흡 영역에서 신경 출력 기록 가능한, 오래 지속, 컬 활성 분할 영역 취득의 가능성을 강화 하도록 설계 되었습니다.

리듬-액티브의 준비 체 외 신생아 설치류 Brainstem-척수와 얇은 슬라이스

뉴런에 다양한 시냅스 입력의 통합은 자연 타이밍과 회로 가소성을 위해 모든 사전 시냅스 핵을 보존하는 준비에서 가장 잘 측정되지만, 뇌 슬라이스는 일반적으로 많은 연결을 끊습니다. 우리는 생체 외 실험 능력을 유지하면서 생체 내 회로 활동을 모방하는 수정 된 뇌 조각을 개발했습니다.

생체 내 신경 회로 연결성 모방을 위한 체외 쐐기 슬라이스 준비

여기서 우리는 하나의 뇌간 조각 내에서 긴장성 특성과 발달 궤적을 조사하기 위해 닭 배아의 비관상 청각 뇌간 조각을 얻기 위한 프로토콜을 제시합니다. 이러한 슬라이스는 시상, 수평 및 수평/횡단면을 포함하며, 이는 전통적인 관상 섹션보다 개별 슬라이스 평면 내에서 더 큰 토노토픽 영역을 포함한다.

긴장성 구배와 미세 회로를 평가하기 위해 배아 닭 청각 뇌간 절단

배우세요 닭 청각 뇌간 슬라이스 제작 및 배양 방법을 통해 청각 신경 발달과 생리학적 특성을 연구하세요. 이 기술은 생체외 전기생리학 기록과 장기 배양에 활용됩니다.

치킨 청각 Brainstem 슬라이스의 준비 및 문화

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