Name: מדידה של Cytosolic Ca 2 + ב lymphatics כויץ מבודד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: חקור את הקשר בין ריכוז סידן ציטוזולי לכיווץ כלי הלימפה בבעלי החיים. השיטה משתמשת בדמיון Fura-2 AM ובמיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי למדוד שינויים בסידן תוך תאי וקוטר כלי הדם בזמן אמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<p class="jove_content"&gt; עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענק P20RR018766 ומענק מן ABMRF / קרן למחקר אלכוהול.</p

<ol><li>Chakraborty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+system%3A+a+vital+link+between+metabolic+syndrome+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.+Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Lymphatic system: a vital link between metabolic syndrome and inflammation.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 1207, Suppl 1. 94-94 (2010).</li>
<li>Zawieja, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+biology+and+the+microcirculation%3A+past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Lymphatic biology and the microcirculation: past, present and future.</a> Microcirculation. 12, 141-141 (2005).</li>
<li>Benoit, J. N., Zawieja, D. C., Goodman, A. H., Granger, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+intact+mesenteric+lymphatic+pump+and+its+responsiveness+to+acute+edemagenic+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of intact mesenteric lymphatic pump and its responsiveness to acute edemagenic stress.</a> Am. J. Physiol. 257, H2059-H2059 (1989).</li>
<li>Davis, M. J., Davis, A. M., Ku, C. W., Gashev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myogenic+constriction+and+dilation+of+isolated+lymphatic+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Myogenic constriction and dilation of isolated lymphatic vessels.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 296, H293-H293 (2009).</li>
<li>Dougherty, P. J., Davis, M. J., Zawieja, D. C., Muthuchamy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+sensitivity+and+cooperativity+of+permeabilized+rat+mesenteric+lymphatics%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium sensitivity and cooperativity of permeabilized rat mesenteric lymphatics.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 294, R1524-R1524 (2008).</li>
<li>Fay, F. S., Shlevin, H. H., Granger, W. C., Taylor, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aequorin+luminescence+during+activation+of+single+isolated+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Aequorin luminescence during activation of single isolated smooth muscle cells.</a> Nature. 280, 506-506 (1979).</li>
<li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+myosin+light+chain+phosphorylation+decreases+rat+mesenteric+lymphatic+contractile+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of myosin light chain phosphorylation decreases rat mesenteric lymphatic contractile activity.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, 726-726 (2009).</li>
<li>Karaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+movements%2C+distribution%2C+and+functions+in+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Calcium movements, distribution, and functions in smooth muscle.</a> Pharmacol. Rev. 49, 157-157 (1997).</li>
<li>Ratz, P. H., Berg, K. M., Urban, N. H., Miner, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+smooth+muscle+calcium+sensitivity%3A+KCl+as+a+calcium-sensitizing+stimulus%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regulation of smooth muscle calcium sensitivity: KCl as a calcium-sensitizing stimulus.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 288, C769-C769 (2005).</li>
<li>Somlyo, A. P., Somlyo, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ca2%2B+sensitivity+of+smooth+muscle+and+nonmuscle+myosin+II%3A+modulated+by+G+proteins%2C+kinases%2C+and+myosin+phosphatase%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Ca2+ sensitivity of smooth muscle and nonmuscle myosin II: modulated by G proteins, kinases, and myosin phosphatase.</a> Physiol. Rev. 83, 1325-1325 (2003).</li>
<li>Souza-Smith, F. M., Kurtz, K. M., Molina, P. E., Breslin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+mesenteric+collecting+lymphatic+pump+function+following+acute+alcohol+intoxication%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Adaptation of mesenteric collecting lymphatic pump function following acute alcohol intoxication.</a> Microcirculation. 17, 514-514 (2010).</li>
<li>Breslin, J. W., Yuan, S. Y., Wu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-C+alters+barrier+function+of+cultured+lymphatic+endothelial+cells+through+a+VEGFR-3-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Lymphat.+Res.+Biol%22%5BJournal%5D)">VEGF-C alters barrier function of cultured lymphatic endothelial cells through a VEGFR-3-dependent mechanism.</a> Lymphat. Res. Biol. 5, 105-105 (2007).</li>
<li>Shirasawa, Y., Benoit, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stretch-induced+calcium+sensitization+of+rat+lymphatic+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Stretch-induced calcium sensitization of rat lymphatic smooth muscle.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 285, H2573-H2573 (2003).</li>
<li>Imtiaz, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pacemaking+through+Ca2%2B+stores+interacting+as+coupled+oscillators+via+membrane+depolarization%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Pacemaking through Ca2+ stores interacting as coupled oscillators via membrane depolarization.</a> Biophys. J. 92, 3843-3843 (2007).</li>
<li>Muller, J. M., Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+coronary+endothelial+cell+Ca2%2B+concentration+during+shear+stress-+and+agonist-induced+vasodilation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Changes in coronary endothelial cell Ca2+ concentration during shear stress- and agonist-induced vasodilation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1706-1706 (1999).</li>
<li>Ferrusi, I., Zhao, J., van Helden, D., von der Weid, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclopiazonic+acid+decreases+spontaneous+transient+depolarizations+in+guinea+pig+mesenteric+lymphatic+vessels+in+endothelium-dependent+and+-independent%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Cyclopiazonic acid decreases spontaneous transient depolarizations in guinea pig mesenteric lymphatic vessels in endothelium-dependent and -independent.</a> 286, H2287-H2287 (2004).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

שילוב הרומן של שיטות הועסק ללמוד מהותי שאיבה של כלי הלימפה. היכולת למדוד בו זמנית שינויים [Ca 2 +] i ו בקוטר lymphatics שאיבה יאפשר מחקרים על התרומה היחסית של Ca 2 + תלויות Ca 2 + ו-רגישות מסלולי איתות במנגנון הכולל המסדירים את מחזור הלימפה התכווצות. מחזור הלימפה כויץ מורכב התכווצויות phasic מעל גבי בטון. הנתונים מראים כי כל התכווצות phasic קשורה לעלייה חולפות [Ca ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> 1. רינגר 5x במלאי </td></tr><tr><td כימי </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוג </td><td> כמות </td></tr><tr><td> נתרן כלוריד </td><td> EMD </td><td> SX0420-3 </td><td> 35 גרם </td></tr><tr><td> אשלגן כלוריד </td><td> JT בייקר </td><td> 3040 </td><td> 1.75 גר &#39; </td></tr><tr><td> סידן כלוריד </td><td> סיגמא </td><td> C-3881 </td><td> 1.47 גר &#39; </td></tr><tr><td> מגנזיום סולפט </td><td> סיגמא </td><td> M-9397 </td><td> 1.44 גר &#39; </td></tr><tr><td> מים מסוננים ועיקור </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> מביאים L 1 </td></tr><tr><td> סינון סטרילי לתוך בקבוקים חנויות autoclaved ב 4 ° C </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2. מגבים חיץ </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> כימי </td><td> חברה </td&gt; <td> מספר קטלוג </td><td> כמות </td></tr><tr><td> מגבים </td><td> סיגמא </td><td> M3183 </td><td> 125.6 גרם </td></tr><tr><td> מים מסוננים ועיקור </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> מביאים L 1 </td></tr><tr><td> סינון סטרילי לתוך בקבוקים חנויות autoclaved ב 4 ° C </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3. הפתרון אלבומין מלח פיזיולוגיים (APSS) </td></tr><tr><td> כימי </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוג </td><td> כמות </td></tr><tr><td> רינגר מניות (5x) </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 200 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> מגבים הצפת </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 5 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> סודיום פוספט </td><td> סיגמא </td><td> S-9638 </td><td> 0.168 גרם </td></tr><tr><td> נתרן Pyruvate </td><td> סיגמא </td><td> P5280 </td><td> 0.22 גר &#39; </td></tr><tr><td> נתרן EDTA סאללא </td><td> סיגמא </td><td> ED2SS </td><td> 0.0074 גרם </td></tr><tr><td> גלוקוז </td><td> סיגמא </td><td> G7528 </td><td> 0.901 גרם </td></tr><tr><td> אלבומין, שור </td><td> USB </td><td> 10856 </td><td> 10 גרם </td></tr><tr><td> מים מסוננים ועיקור </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> מביאים L 1 </td></tr><tr><td> התאם את ה-pH 7.4 בשעה 37 ° C, ואז לסנן לתוך בקבוקים סטריליים autoclaved ולאחסן ב 4 ° C. </td></tr></tbody></table> טבלה 1. ריאגנטים ספציפיים משומשים. חנות הכל ב 4 ° C.

מדידה של cytosolic ca 2 + ב lymphatics כויץ מבודד

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

כלי הלימפה מהווים מערכת תחבורה רב תכליתיים המקיימת הומאוסטזיס נוזל, שומנים מספקת כדי זרימת המרכזית, ופועל כמערכת מעקב עבור אנטיגנים מזיקים, אופטימיזציה חסינות הרירית ונרכשת 1. לימפה נוצר מן נוזל interstitial שנכנס עיוורת הסתיימה lymphatics הראשוני, ולאחר מכן מועבר כנגד מפל הלחץ lymphatics איסוף גדול יותר. לימפטי כל איסוף מורכב מסדרה של קטעים בשם lymphangions, מופרדים על ידי שסתומים המונעים backflow הטוחנת. Lymphangion כל בעל מחזור התכווצות המניע הלימפה נגד הפרש לחצים לקראת מחזור המרכזי 2. דפוס זה התכווצות phasic משול מחזור הלב, עם סיסטולי ודיאסטולי שלבים, ועם 4 בתדר נמוך התכווצות. בנוסף, שריר חלק הלימפה יוצרת צליל ומציג התכווצות התרחבות myogenic ואניn בתגובה עליות וירידות בלחץ luminal, בהתאמה 5. היברידית של המנגנונים המולקולריים התומכות הן contractility phasic טוניק של lymphatics מוצעים כך. התכווצות של שריר חלק מוסדר בדרך כלל על ידי cytosolic Ca 2 + ריכוז ([Ca 2 +] i) בתוספת רגישות Ca 2 +, האלמנטים כויץ בתגובה לשינויים בסביבה המקיפה את תא 6. [Ca 2 +] i נקבעת על ידי שילוב של תנועת Ca 2 + דרך הממברנה הפלסמטית ליגנד או מתח מגודרת Ca 2 + ערוצים שחרור ספיגת של Ca 2 + מחנויות פנימי. Cytosolic Ca 2 + נקשר calmodulin ומפעיל אנזימים כגון שרשרת אור שרירן (MLC) קינאז (MLCK), אשר בתורו phosphorylates MLC המוביל להתכווצות אקטין שרירן בתיווך 8. עם זאת, הרגישות של מסלול זה Ca <sup&gt; 2 + יכול להיות מוסדר על ידי phosphatase MLC (MLCP) 9. פעילות MLCP מוסדר על ידי Rho קינאז (רוק) לבין מעכב phosphatase שרירן חלבון למדד 17. כאן, אנו מציגים שיטה להערכת שינויים [Ca 2 +] i לאורך זמן, lymphatics מבודד perfused כדי ללמוד Ca 2 + תלויות Ca 2 + ו-רגישות מנגנוני התכווצות שריר חלק הלימפה. שימוש מבודד mesenteric עכברוש lymphatics איסוף למדנו למתוח-Induced שינויים [Ca 2 +] i ו התכווצות בפעילות. המודל הלימפה מבודד מציע את היתרון הזה, הלחץ הזרימה, את ההרכב הכימי של הפתרון אמבטיה ניתן לשלוט בחוזקה. [Ca 2 +] i נקבע על ידי טעינת lymphatics עם ratiometric, Ca 2 + מחייב לצבוע Fura-2. מחקרים אלה יספקו גישה חדשה לבעיה רחבה יותר של חקר המנגנונים המולקולריים שונים המווסתים phasicהתכווצויות לעומת התכווצות בשריר טוניק הלימפה חלקה.

אנחנו מציגים גישה להעריך את Ca cytosolic<sup&gt; 2 +</sup&gt; ריכוז lymphatics מבודדים ללמוד Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; תלויי Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt;-רגישות מנגנוני התכווצות שריר חלק הלימפה.

מדידה של Cytosolic Ca 2 + ב lymphatics כויץ מבודד

כלי הלימפה מהווים מערכת הובלה רב-תכליתית השומרת על הומאוסטזיס של נוזלים, מעבירה ליפידים למחזור הדם המרכזי ומשמשת כ...

מערכת ניסויית זו קובעת האם שינויים ברמות הסידן התו-תאי קשורים לשינויים בדפוס ההתכווצות הלימפטית הנגרמים מלחץ לומנלי מוגבר. ראשית, הוצאו כלי לימפתי מתכווץ מהקרום הסביבי (mesentery) של חולדה וחברו לקנולות בשני קצותיו כדי לשלוט באופן הדוק בלחץ הלומנלי. לאחר מכן, העמיסו אל תוך הכלי את צבע חיישן הסידן ratiometric fira 2:00 AM, המאפשר מדידה של שינויים בסידן הצטוזולי באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית עם עירור חילופי של 340 ו-380 nanometer.תעדו שינויים בקוטר כלי הלימפה וברמות הסידן הציטזולי בזמן שהכלי חשוף ללחץ לומנלי. הפרוטוקול כולל גם קביעה של קוטר כלי הלימפה מתוך תמונות ה-time-lapse שהתקבלו. התוצאות מעידות על קשר זמני בין עליות חולפות בסידן הציטזולי לבין התכווצויות פאזיות של כלי הלימפה, ועל מתאם בין רמות הסידן לבין התכווצות מיוגנית.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון מיקרוסקופיה תוך-חיה (intravital microscopy), הוא שהשפעות חיצוניות על השאיבה הלימפטית — כולל קצב הדלקת, בקרה נוירוגנית ואנדוקרינית, וכן לחץ וזרימה בתוך הלומן — הן כולן תחת בקרה מלאה, מה שמאפשר מחקר מדויק של מסלולי השיגנלינג הקובעים את מחזור הכיווץ הלימפטי. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון ששלבי הבידוד והקנולציה קשים ללמידה. כלי הדף הלימפתיים עדינים ביותר, ומניפולציה לקויה עלולה לגרום להם לאבד את תפק

measurement-of-cytosolic-ca2-in-isolated-contractile-lymphatics

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

כאן אנו מתארים את הבידוד של cardiomyoctyes עכבר המבוגר באמצעות מערכת זלוף Langendorff. תאים וכתוצאה מכך הם Ca2 +, סובלניים, חשמלי שקט ויכולים להיות מתורבת וtransfected עם אדנו או lentiviruses כדי לתפעל ביטוי גנים. הפונקציונליות שלהם יכולה גם להיות מנותחת באמצעות מערכת MMSYS וטכניקות תיקון מהדק.

בידוד, תרבות ואפיון פונקציונלי של Cardiomyoctyes מאוס למבוגרים

שריר פפילרי חדרית עזב Murine יכול לשמש כדי לחקור התכווצות לב במבחנה. מאמר זה מתאר בפירוט את הבידוד ופרוטוקולי ניסוי ללמוד מאפייני התכווצות לב.

מדידות התכווצות שרירים בpapillary מבודדים לחקירת הלב Inotropy בעכברים

מאמר זה מתאר את הפרוטוקול מפורט וציוד הכרחי למיפוי כפול אופטי של (מ 'V) פוטנציאל הטרנסממברני וחופשי רשתית תוך-sarcoplasmic (SR) Ca 2 + בלב ארנב Langendorff-perfused. שיטה זו מאפשרת לתצפית ישירה וכימות של מטר V ו2+ דינמיקת Ca SR בלב שלם.

מיפוי אופטי של Intra-sarcoplasmic reticulum Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; ופוטנציאל הטרנסממברני בלב ארנב Langendorff-perfused

נכון לעכשיו, רוב מדדי הסידן הזמינים משמשים לכימות מעברי סידן ציטופלזמיים כמדדים עקיפים של סידן המשתחרר מהרטיקולום הסרקופלזמי בתאי שריר חלק מתורבתים. פרוטוקול זה מתאר את השימוש באינדיקטור ספציפי מבוסס FRET המאפשר מדידה ישירה של אותות סידן בתוך לומן הרטיקולום הסרקופלזמי.

מדידת תנודות סידן בתוך הרטיקולום sarcoplasmic של בתאי שריר חלק בתרבית באמצעות מבוססי סריג הדמיה Confocal

מאמר זה מתאר פרוטוקול המעריך את השינויים ברגישות לשריר Ca2+ במהלך התכווצות במיוציטים לבביים מבודדים מלב חולדה. יחד עם אלקטרופיזיולוגיה של הלב, רמות ציטוזול סיסטולי/דיאסטולי Ca2+ והתכווצות/הרפיה, מדידה זו הכרחית בבסיס המנגנונים המתווכים צימוד עירור-התכווצות לב בלב בריא וחולה.

הערכת Myofilament Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; עירור-התכווצות לב ביסוד רגישה זיווגים

סידן תאיים מיחזור שמשחק תפקיד בוויסות של תפקוד סיסטולי, דיאסטולי אצל cardiomyocytes. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול כדי להעריך sarcoplasmic רשת Ca2 + שמורת ובפונקציה הסרת סידן הדיאסטולי ב cardiomyocytes מאת סידן מערכת הדמיה.

הערכה של רשת Sarcoplasmic סידן סידן הדיאסטולי שימור, תאיים הסרת Cardiomyocytes חדרית מבודד

מוצג כאן פרוטוקול כדי להעריך את המאפיינים ההתכווצות של שרירים מחוסנים myofibrils עם רזולוציית ננו ניוטון. הפרוטוקול משתמש בהתקנה עם גשוש כוח אופטי מבוסס אינטרפרומטריה. הגדרה זו יוצרת נתונים עם יחס אות לרעש גבוה ומאפשרת הערכה של קינטיקה מתכוובת של myofibrils.

בידוד מיו-בריאלס מבריות מביופסיות שריר השלד וקביעת תפקוד מתכווץ עם מתמר כוח רזולוציה ננו-ניוטון

מודלים עכבריים מאפשרים ללמוד מנגנוני מפתח של arrhythmogenesis. לשם כך, קרדיומיוציטים באיכות גבוהה נחוצים לביצוע מדידות מהדק תיקון. כאן מתוארת שיטה לבידוד מיוציטים פרוזדוריים וחדרי מורין באמצעות זילוח לנגנדורף מבוסס אנזים מדרדר, המאפשר מדידות בו זמנית של סידן חולף וזרם סידן מסוג L.

בידוד מיוציטים פרוזדוריים וחדריים באיכות גבוהה למדידות בו זמנית של Ca2+ Transients וזרם סידן מסוג L

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הכנה ושימוש בפרוסות ריאה חתוכות באופן מדויק על ידי עכברים כדי להעריך את התכווצות השריר החלק של דרכי הנשימה והעורקים התוך-פולמונריים בסביבה כמעט in vivo .

שימוש בפרוסת הריאה החתוכה באופן מדויק כדי לחקור את ויסות ההתכווצות של שריר חלק עורקי דרכי הנשימה והפנים-פולמונרי

כאן, מתוארת שיטה מבוססת לביצוע מדידות התכווצות וסידן בקרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם באמצעות פלטפורמה מבוססת אופטיקה. פלטפורמה זו מאפשרת לחוקרים לחקור את השפעת המוטציות ואת התגובה לגירויים שונים באופן מהיר וניתן לשחזור.

מדידות בזמן אמת של פרמטרים של סידן והתכווצות בקרדיומיוציטים פלוריפוטנטיים המושרים על ידי תאי גזע המושרים על ידי בני אדם

פרוטוקול זה מתאר שיטה למדוד בו זמנית סידן ציטוסולי, חופשי [Ca2+]i וקוטר כלי הדם בהתכווצות כלי הלימפה בזמן אמת ולאחר מכן לחשב ריכוזי Ca2+ מוחלטים וכן פרמטרים של התכווצות/ריתמוס. פרוטוקול זה יכול לשמש לחקר Ca2+ ודינמיקה של התכווצות במגוון תנאי ניסוי.

הערכה בזמן אמת של Ca2+ מוחלט, ציטוסולי, חופשי והתכווצות מקבילה בכלי לימפה מבודדים בלחץ

חקור את הקשר בין ריכוז סידן ציטוזולי לכיווץ כלי הלימפה בבעלי החיים. השיטה משתמשת בדמיון Fura-2 AM ובמיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי למדוד שינויים בסידן תוך תאי וקוטר כלי הדם בזמן אמת.

מדידה של Cytosolic Ca^{2 +} ב lymphatics כויץ מבודד

גלה סרטונים נוספים