Name: Questo novembre a JOVE (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: Scopri i progressi in neuroscienza e biologia attraverso esperimenti visualizzati. Questo articolo evidenzia metodologie innovative per studiare i processi biologici complessi.

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<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3505/">Misurazione dei flussi di calcio veloci nei cardiomiociti</a></h2>
Urszula Golebiewska1, Suzanne Scarlata2 1Dipartimento di Scienze Biologiche e Geologia, Queensborough Community College, 2Dipartimento di Fisiologia e Biofisica, Stony Brook University
Presentiamo un metodo per isolare eventi rapidi (microsecondi) di calcio da flussi più lenti nelle cellule viventi utilizzando la microscopia confocale a scansione laser. Il metodo misura le fluttuazioni dell'intensità della fluorescenza degli indicatori di calcio registrando scansioni lineari di diverse centinaia di pixel in una cellula. L'analisi dell'istogramma ci permette di isolare le scale temporali dei diversi flussi di calcio.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3373/">Sintesi di Submonomeri in fase solida di polimeri peptoidi e loro autoassemblaggio in nanofogli altamente ordinati </a></h2>
Helen Tran, Sarah L. Gael, Michael D. Connolly, Ronald N. Fonderia molecolare Zuckermann , Laboratorio nazionale Lawrence Berkeley
Viene delineato un metodo di sintesi dei peptoidi manuale semplice e generale che coinvolge attrezzature di base e reagenti disponibili in commercio, consentendo ai peptoidi di essere facilmente sintetizzati nella maggior parte dei laboratori. Viene descritta la sintesi, la purificazione e la caratterizzazione di un peptoide anfifilico 36mer, nonché il suo autoassemblaggio in nanofogli altamente ordinati.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3258/">Valutazione comportamentale della destrezza manuale nei primati non umani</a></h2>
Eric Schmidlin*, Mélanie Kaeser*, Anne- Dominique Gindrat, Julie Savidan, Pauline Chatagny, Simon Badoud, Adjia Hamadjida, Marie-Laure Beaud, Thierry Wannier, Abderraouf Belhaj-Saif, Eric M. Dipartimento di Medicina Rouiller , Università di Friburgo * Questi autori hanno contribuito in egual misura
Poiché la destrezza manuale è una prerogativa principalmente dei primati, nelle scimmie macaco sono stati sviluppati compiti comportamentali. Quattro compiti di presa e presa, che misurano la capacità e la forza di manipolazione della mano, consentono di stabilire il recupero funzionale dopo una lesione del sistema nervoso centrale e di testare l'effetto di un trattamento.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3588/">Determinazione dell'attività fagocitaria di campioni di anticorpi clinici</a></h2>
Elizabeth G. McAndrew1, Anne-Sophie Dugast1, Anna F. Licht1, Justin R. Eusebio1, Galit Alter1, Margaret E. Ackerman2 1Massachusetts General Hospital, Ragon Institute di MGH, MIT e Harvard, 2Thayer School of Engineering, Dartmouth College
Presentiamo un test citometrico a flusso ad alto rendimento per determinare l'attività fagocitaria di anticorpi antigene-specifici da campioni clinici, utilizzando perle rivestite di antigene fluorescente e una linea cellulare monocitica che esprime l'uso di più recettori Fc e determinazioni dell'attività fagocitaria in modo standardizzato e riproducibile per qualsiasi antigene di interesse.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3187/">Studio del citoscheletro di actina in cellule endoteliali vive che esprimono GFP-actina</a></h2>
Travis M. Doggett, Jerome W. Breslin Department of Physiology, Louisiana State University Health Sciences Center L'imaging microscopico di cellule endoteliali vive che esprimono GFP-actina consente la caratterizzazione dei cambiamenti dinamici nelle strutture citoscheletriche. A differenza delle tecniche che utilizzano campioni fissi, questo metodo fornisce una valutazione dettagliata dei cambiamenti temporali nel citoscheletro di actina nelle stesse cellule prima, durante e dopo vari stimoli fisici, farmacologici o infiammatori.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3260/">Impianto di trasmettitori di radiotelemetria che forniscono dati su ECG, frequenza cardiaca, temperatura corporea interna e attività in topi da laboratorio che si muovono liberamente</a></h2>
Nikola Cesarovic1, Paulin Jirkof2, Andreas Rettich2, Margarete Arras1 1 Divisionedi Ricerca Chirurgica, Ospedale Universitario di Zurigo, 2Istituto di Scienza degli Animali da Laboratorio, Università di Zurigo
Viene mostrata una tecnica chirurgica per l'impianto di trasmettitori telemetrici disponibili in commercio utilizzati per la misurazione continua del biopotenziale (ECG a una derivazione), della frequenza cardiaca, della temperatura corporea interna e dell'attività locomotoria in topi che si muovono liberamente. Vengono inoltre presentate raccomandazioni e protocolli per la cura post-operatoria e il sollievo dal dolore, migliorando il recupero, il benessere e il tasso di sopravvivenza.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3381">Elettroporazione del mesenchima craniofacciale</a></h2>
Jacqueline M. Tabler, Karen J. Dipartimento Liu di Sviluppo Craniofacciale, King's College di Londra
Le cartilagini craniofacciali si sviluppano a stretto contatto con altri tessuti e sono difficili da manipolare negli animali vivi. Stiamo utilizzando l'elettroporazione per fornire strumenti molecolari durante la crescita dello scheletro craniofacciale, bypassando gli effetti embrionali precoci. Questo approccio ci permetterà di testare in modo efficiente le molecole candidate in vivo.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3379">Slice Registrazione elettrofisiologica e stimolazione optogenetica di neuroni nati adulti nel bulbo olfattivo</a></h2>
Matthew Valley, Sebastian Wagner, Benjamin W. Gallarda, Laboratorio Pierre-Marie Lledo per la Percezione e la Memoria, Institut Pasteur e Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)
I neuroni nati adulti che esprimono ChR2 possono essere manipolati in preparazioni elettrofisiologiche a fette per esaminare il loro contributo alla funzione dei circuiti neurali olfattivi.

questo novembre a jove

November 2011: This Month in JoVE

Il numero di novembre del Journal of Visualized Experiments inizia con una serie di esperimenti comportamentali per misurare la capacità di prensione nei primati. I ricercatori dell'Università di Friburgo mostrano quattro compiti di presa e di raggiungimento, che seguono tutti passaggi comuni per trattenere comodamente l'animale e posizionare correttamente la testa. Il test Brinkman Board viene utilizzato per valutare il raggiungimento di oggetti statici, mentre il Rotating Brinkman Board presenta una condizione in cui gli animali devono anticipare la posizione dell'oggetto. Il test Brinkman Box consente di studiare la destrezza in condizioni in cui la scimmia ha meno gradi di libertà per eseguire il compito di presa e non può usare la vista per guidare il movimento. Mentre i test di bordo e scatola del brinkman si basano esclusivamente sull'analisi del video ottenuto durante gli esperimenti, al fine di generare dati, l'apparato di attività che raggiunge il cassetto è dotato di rilevatori che monitorano le forze di presa e di carico, nonché la posizione del cassetto, rendendo questo test appropriato per misurare la forza e la capacità di prensione. In combinazione, questi quattro test forniscono un approccio potente per valutare il controllo motorio nell'arto anteriore distale e il gruppo di Friburgo presenta dati provenienti sia da studi sulle lesioni che da esperimenti volti a testare potenziali terapie per le lesioni del midollo spinale. In Medicina clinica e traslazionale, i collaboratori della Divisione di ricerca chirurgica dell'Ospedale universitario di Zurigo e dell'Istituto di scienze animali da laboratorio dell'Università di Zurigo, lavorare insieme per impiantare un dispositivo di radiotelemetria nei topi, che può essere utilizzato per effettuare misurazioni fisiologiche in animali che si muovono liberamente. I dispositivi sono costituiti da due elettrocateteri, in grado di misurare l'attività del biopotenziale (ECG, EEG o EMG) e la temperatura, e da un trasmettitore radio leggero (larghezza di banda 1-200 Hz) che può essere impiantato nella cavità addominale. Lo stress della manipolazione degli animali e l'anestesia sono noti elementi confondenti, che influiscono sulle misurazioni fisiologiche, quindi i dispositivi di radiotelemetria sono un modo conveniente per acquisire dati fisiologici da animali in uno stato naturale imperturbato, nonché per effettuare misurazioni di più animali, contemporaneamente. JoVE aggiunge anche alla sua serie di protocolli di elettroporazione un metodo per introdurre macromoleduli nel mesenchima craniofacciale dei girini in via di sviluppo di Xenopus laevis, dal Liu Lab del King's College di Londra. I girini di Xenopus vengono trasferiti in una camera di elettroporazione, dove possono essere iniettati con acido nucleico, e quindi sottoposti a elettroporazione, che fornirà vettori di espressione o morfolini nel tessuto craniofacciale in via di sviluppo. La consegna genica nella cartilagine differenziata è intrinsecamente problematica e il laboratorio Liu dimostra che, attraverso l'elettrocoltura, i morfolini possono essere introdotti nei tessuti procartilaginei e cartilaginei del girino di Xenopus attraverso una serie di stadi di sviluppo>><<. In bioingegneria, il gruppo Zuckerman del Lawrence Berkeley National Laboratory illustra il loro metodo per sintetizzare i peptoidi, una classe di molecole organiche biologicamente attive che assomigliano ai peptidi, ma hanno le loro catene laterali attaccate all'azoto del legame peptidico, piuttosto che al carbonio alfa, il che li rende resistenti alla proteolisi. Il gruppo di Zuckerman dimostra la sintesi dei submonomeri, in cui i monomeri peptidici vengono aggiunti in sequenza nelle reazioni di bromoacetilazione e spostamento del bromuro, consentendo di controllare con precisione la lunghezza e la composizione della catena peptoide. Inoltre, il fatto che la sintesi venga eseguita su resina ammidica, e quindi in fase solida, semplifica notevolmente la purificazione dei peptoidi sintetizzati. Questi autori mostrano anche come i peptoidi di nuova sintesi possano essere indotti ad auto-assemblarsi in strutture altamente ordinate, chiamate nanofogli, che possono essere visualizzate mediante fluorescenza e microscopia elettronica a scansione. Questi nanofogli potrebbero fungere da potenziale piattaforma per la mimetica delle proteine e delle membrane. Più avanti nel mese, JoVE presenta un test per misurare l'attività fagocitaria nelle cellule esposte a campioni di anticorpi clinici per la nostra sezione di immunologia e infezioni. I collaboratori del Massachusetts General Hospital e del Dartmouth College dimostrano che le cellule THP-1 inghiottiranno le perle rivestite di antigene legate agli anticorpi nella microscopia video timelapse e presenteranno un metodo di citometria a flusso basato su piastra per quantificare l'entità della fagocitosi. I nostri autori utilizzano questo metodo per determinare la capacità di diversi campioni di anticorpi di indurre fagocitosi, come quelli di pazienti con HIV sia trattati che non trattati con terapie antiretrovirali. Questo riassunto dei contenuti di JoVE a novembre fornisce una breve panoramica dei punti salienti di JoVE per il mese. Altri articoli degni di nota includono metodi per l'imaging dal vivo delle dinamiche del citoscheletro nelle cellule endoteliali, la misurazione del flusso di calcio nei cardiomiociti e l'elettrofisiologia a fette di neuroni nati adulti nel bulbo olfattivo.

Questo novembre a JOVE

The November issue of the Journal of Visualized Experiments begins with a series of behavioral experiments for measuring prehension ability in primates. ...

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Scopri i progressi in neuroscienza e biologia attraverso esperimenti visualizzati. Questo articolo evidenzia metodologie innovative per studiare i processi biologici complessi.

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Aaron Kolski-Andreaco

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