Name: 準備とINTERCEPT血液系を使用してDouble線量バフィーコート血小板製剤の病原体不活化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-07T11:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: 学ぶINTERCEPT血液系を用いたダブル線量バフィーコート血小板製剤の調製法。7日間の保存期間中の品質評価と病原体不活化プロセスを含む詳細な手順を解説し、輸血安全性向上に貢献する技術を紹介します。

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</ol>

この記事への生産とフリーアクセスはシーラスが主催しています。

軟膜の血小板は、人事時間、消耗品、機器、および血小板のユニットを生産するコスト全体に組み込む必要があり、廃棄物、を含むポスト回収費用、その結果、いくつかの処理工程を必要とします。各バフィーコート（バフィーコート量とヘマトクリット値の最適化を介して）から血小板収量を向上させることが7軟膜のプールから二重線量軟膜血小板ユニットを製造することができる。この最適化が実行されると、血小板用量の固定番号を生成するために必要な軟膜の数は、それによって、軟膜の全体的な利用率を改善し、（PC）を集中して、追加の血小板の生産を可能にする、減少させることができる。人事時間だけでなく、セット、血小板添加溶液、無菌接続ウェーハ、フィルターセット、遠心分離の手続きをプールするなどの消耗品や機器のコストを50％まで削減されます。血小板産生を最適化し、コストを削減することに加えて、THIのプーリング法は、私たちだけでなく、私たちの輸血の受信者向けに強化された保護を提供できるように、INTERCEPT、デュアルストレージコンテナの処理セットを使用するための入力要件を満たして濃厚血小板（PC）を生成することができます。 INTERCEPT血液系病原体の不活性化は、病気を引き起こすことができません核酸複製およびレンダリングする病原体を防ぐこと、共有結合架橋DNAとRNAにamotosalenおよび紫外線（UVA）光を使用するため。3それが効果的にウイルス、細菌を含めた病原体の広いスペクトルを不活性化する、寄生虫、およびドナー白血球を混入4-6 INTERCEPT新しいテストを開発し、最終的に試験実施するための重要な財政投資を必要としている間に歴史的にかなりの遅れを伴う新興病原体のために、現在のテストのパラダイムに代わるものを提供しています利用できるようになります。7,8は、それはまた、冗長安全measuに代わるものを提供することができますこのような細菌検出9およびガンマ線照射などでRES。さらに10月12日 、切片は、私たちの生産効率に利益をもたらし、私たちは私たちの予算に固執するのに役立ちダブル線量血小板ユニットを扱うことができます。 INTERCEPT、および二重線量軟膜法は血液センターのワークフローの様々に適応することができます。例としては、全血のコレクションは500ミリリットルに増やすことができ、コレクションも22℃で一晩保存することができる°C分離に先立って。また、代替軟膜プーリング法が可能である（ 例えば、タコのメソッドの代わりに鉄道法）および/ ​​または自動装置（ 例えば TACSI）残りの赤血球から第2の遠心分離及び血小板懸濁液の分離のために利用することができる。 増加血小板コンテンツが必要な場合には、いくつかの技術は、血小板数、全血で一晩インキュベーションし、adjusに基づいてドナーの事前選択を含むご利用いただけます遠心分離の設定のtment、または7の代わりに8軟膜のプールを利用する。 プーリングの制限により、現在利用可能な、遠心バケットの容量を設定し、軟膜プールの合計容量は約600ミリリットルである必要があります。このプロトコールに記載の遠心分離プロセスと設定は7軟膜のプールの切片パラメータを満たす製品を得るために最適化されています。プール内の軟膜の数が変更された場合に遠心分離の設定を変更する必要があります。 一部の国では、最小の血小板用量が高くなるとQC要件はスウェーデンよりもさらに厳しくなっています。このように、我々の結果は、普遍的に適用できない場合があります。これらの国では、治療をインターセプトする前に二重線量PCがインターセプト処理と分割後のローカルな要件を満たすために、血小板の数が多く入っていなければなりません。なぜなら最大血小板コンテンツや治療ボリュームFOR切片はそれぞれ7×10 11血小板と420ミリリットルであり、INTERCEPT処理の要件を超えているか、または2つの治療用量に分割するには不十分な血小板含有量を持っているユニットの割合は、例えば血小板投与量、品質管理基準の地域の要件などの要因によって異なります軟膜最適化の結果、生産の安定性。 二重線量PCはINTERCEPT処理要件を超える場合は、手動で要件を​​満たすように調整され、その後に扱われるかもしれません。 7-軟膜プールはINTERCEPT後の二重線量製品の不十分な血小板をもたらすそれらのいくつかの場面では、インターセプト処理を実行しないことを選択した。あるいは、他の血液センターでは、単回投与インターセプト処理セット（大ボリュームセットをIE）を搭載したPCを扱うことにより、すべてのユニットで病原体不活化を行う、単一の大きな治療用量としてPCを格納するために選択することができます。私達が私達を満たしていることを確認するために、QCの要件とする病原体、できるだけ私たちの血小板ユニットの多くのように、私たちは、プールされた場合は、プール内5.6x10 11血小板の最小血小板コンテンツになり、ドナー血小板数に基づいて、軟膜を選択して不活性化する。これは、インターセプト処理後の2つの治療用量を生成するために十分な血小板含有量を保証します。 私たちの検証では、7全血由来軟膜ユニットが正常に製造（スウェーデン要件と欧州のガイドライン）について、患者のサポートのための受け入れ基準を満たす2病原体不活化血小板製剤で、その結果、血小板の切片プロセスをプールし、治療することができることを示して診療ガイドラインとスウェーデンの標準血小板注入法に従って血小板輸血を必要とする。

<table><tbody><tr><td colspan="4">全血献血、一次分離および血小板製剤の製造</td></tr><tr><td>採血パック</td><td>Fenwal</td><td>R6485</td><td>上部/下部セット</td></tr><tr><td>自動コンポーネント抽出装置</td><td>Fenwal</td><td>Optipress-II</td><td></td></tr><tr><td>血液ミキサーおよびバランスシステム</td><td>バクスター</td><td>Easymix V3</td><td></td></tr><tr><td>血小板白血球除去フィルターセット</td><td>Fenwal</td><td>K4R7042</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>Hettich</td><td>Roto Silenta 63 RS</td><td>バージョン 5.5</td></tr><tr><td>血小板添加液 - SSP+</td><td>MacoPharma</td><td>SSP2030U</td><td>300 ml</td></tr><tr><td>滅菌チューブ接合機</td><td>テルモ</td><td>T-SCD</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">INTERCEPT処理 &amp;amp; 保存</td></tr><tr><td>INTERCEPT処理セット</td><td><a href="http://www.interceptbloodsystem.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Cerus</a></td><td>INT2503</td><td>デュアルストレージ（DS）セット</td></tr><tr><td>INTERCEPT イリュミネーター</td><td><a href="http://www.interceptbloodsystem.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Cerus</a></td><td>INT100</td><td></td></tr><tr><td>PCサンプルパック</td><td>Fenwal</td><td>FTX 1122</td><td></td></tr><tr><td>インキュベーター</td><td>Helmer</td><td>PC2200/PC3200</td><td></td></tr><tr><td>撹拌機</td><td>Helmer</td><td>PF48H/PF96H</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">～の評価 &lt;em&gt;in vitro&lt;/em&gt; 血小板機能</td></tr><tr><td>血液ガス分析装置</td><td>ラジオメーター</td><td>ABL 735</td><td>pH、血液ガス、および乳酸値の測定に使用されます</td></tr><tr><td>化学系</td><td>Ortho Clinical Diagnostics</td><td>Vitros 5.1</td><td>グルコース測定に使用される</td></tr><tr><td>血球計数分析装置</td><td>Boule Medical AB</td><td>Medonic CA620-Cellguard</td><td>血小板数測定に使用される</td></tr><tr><td>フローサイトメーター</td><td>BD</td><td>FACSCanto</td><td>白血球測定に使用される</td></tr></tbody></table>

準備とintercept血液系を使用してdouble線量バフィーコート血小板製剤の病原体不活化

Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

血液センターは、最大化、生産、​​彼らが受ける血液製剤の寄付からの収量ならびに輸血感染症からの保護を含む輸血患者の安全を可能な限り高いレベルを確保することなど、多くの課題に直面しています。これは、消耗品、機器、廃棄物、とりわけ人件費などの営業費用を最小限に抑えることが財政的に責任ある方法で行われなければならない。 いくつかのメソッドは、血小板輸血のために集中を生成するために用意されています。最も一般的なものの1つは単一の治療血小板単位（単位当たり、各地域の規制あたり≥2.0×10 11血小板が）から最大6全献血へのバフィーコート層をプールすることにより調製される軟膜方法です。 &quot;二重線量&quot;全血由来血小板を製造するための手順は、ごく最近開発された。 ここに提示され調製するための新規な方法である二重線量全血由来血小板は7軟膜、その後病原体不活化の切片、血液系のダブル投与単位の治療のプールから集中している。インターセプトは、献血された血液中に存在しうるウイルス、細菌、寄生虫、汚染ドナー白血球を不活化するために開発されました。デュアルストレージコンテナ（ &quot;DSセット&quot;）で設定INTERCEPT処理を利用することによって、二重線量軟膜法とINTERCEPTペアリングすることにより、患者の安全性を最大限に、血液センターは、単一の病原体不活化処理セットで彼らの二重投与単位のそれぞれを扱うことができますコストを最小限に抑えながら。二重線量軟膜法は少ない軟膜を必要とし、単回投与軟膜血小板ユニットの準備や治療に比べて50％（ 例えばプーリングセット、フィルターセット、血小板添加溶液、および無菌接続ウェーハ）までで消耗品の使用を削減。その他のコスト削減は無駄の少ない機器maintenanを含めるCE、低所要電力、削減人員時間、アフェレーシス技術と比較して低コストのコレクション。

この記事では全献血から調製し、病原体不活化のためのインターセプト血液システムで処理された二重線量軟膜の血小板濃縮物を生産するエーレブルー大学病院で使用されるプロセスを説明します。ザ<em&gt; in vitroで</em最終血小板ユニットの&gt;質は、ストレージの7日間で評価されます。

準備とINTERCEPT血液系を使用してDouble線量バフィーコート血小板製剤の病原体不活化

血液センターは、受け取った血液製剤の献血からの生産収量を最大化することや、...を確保することなど、多くの課題に直面しています。

このビデオでは、7つのバフィーコートのプールから2回分量（ダブルドーズ）の血小板濃縮液を調製し、その後、Interceptを用いて処理します。このビデオを視聴することで、病原体不活化済みの2回分量血小板濃縮液の製造方法について十分に理解することができます。まず、概略図による概要を説明し、続いて実演を行います。寄贈された全血の最初の7ユニットを遠心分離および分画し、容量とヘマトクリット値の目標を満たす7ユニットのバフィーコートを得ます。これらのバフィーコートを接続してプールし、遠心分離します。その後、血小板懸濁液を残留赤血球から分離し、病原体および白血球を不活化するための2倍量血小板濃縮液を作製します。2回分量の血小板濃縮液を、核酸を架橋させるInterceptシステムを用いて処理します。最終的に、この手順により、pH、グルコース、乳酸、PO₂、PCO₂、および血小板数による評価で、7日間の保存期間にわたり許容可能なin vitro品質を持つ2回分の治療用血小板用量が得られます。血液センターの技術者が手順を実演し、処理要件について説明します。まず、2回分量の血小板濃厚液が、300から420 mLのインターセプト処理基準を満たしていることを確認してください。血小板量は2.5から7×10¹¹で、赤血球数は4×10⁶/mL未満である必要があります。本手順は、450 mLのトップボトム採取セットで回収された全血7ユニットを用いて開始します。血液製剤を遠心管に入れ、製造元の指示に従い、室温にて4,880 RCFで11分間、ブレーキ設定B5でハードスピン（強遠心）を行います。遠心後、血液は赤血球、バフィーコート、血漿の3層に分離します。血漿を上部のサテライトバッグに、赤血球を下部のサテライトバッグに分注し、約48 mLのバフィーコートと37%のヘマトクリットを回収容器に残します。バフィーコートを血小板振盪機に設置し、室温で一晩置きます。7つのバフィーコートと300 mLのSSPおよび血小板添加液を、滅菌接続してください。添加液を最上部にした縦列構成で、ここに示すように、添加液と最初のバフィーコートの間のラインをクランプします。バフィーコートユニット間の溶接箇所を開き、最後のバフィーコート容器に液が流れ込むようにします。次に、添加液と最初のバフィーコート間のクランプと溶接部を開き、クランプを閉じる前に、各バフィーコート容器に順次、添加液の約3分の1（約100 milliliters）を流して洗浄します。この洗浄工程をさらに2回繰り返し、毎回約100 millilitersの添加液を使用します。回収したバフィーコート容器を空の容器から切り離します。添加液を含むバフィーコート回収液の総量は、約600 millilitersになります。プールしたバフィーコートを振盪機にかけ、室温で1時間放置します。次に、leco白血球除去フィルター一体型の血小板保存容器を、バフィーコートプールが入ったバッグに接続します。プールしたバフィーコートと血小板保存容器を遠心分離機にかけ、462 RCFで9分20秒間遠心分離します。遠心分離後、血小板懸濁液をLuca還元フィルターを通して血小板保存容器に分注します。これにより、420 mL中に約7×10¹¹個の血小板を含むダブルドース血小板濃縮液が得られ、これをInterceptを用いて病原体不活化処理することが可能です。ダブルドース血小板濃縮液は、アントイン容器、照射容器、および2つの保存容器で構成されるIntercept処理セットを用いて処理されます。血小板懸濁液の容器をインターセプト処理セットのAmin容器に接続します。次に、血小板を吊り下げます。Amin容器の底部にあるカニュラを切り離し、溶液が照明容器に流れ込むようにします。次に、Amin容器の上のカニューレを折って、血小板がAmin容器を通り、照射容器へと流れるようにします。血小板とアミトシン（am tosin）の混合液を静かに混ぜ合わせます。照射容器を軽く押し、容器内の空気を追い出します。照射容器とアマト容器の間のチューブを密封し、照射容器から伸びるチューブが 4 cm 以下になるようにします。空の容器を取り除いて廃棄します。プロセッシングセットをイルミネーターに設置し、左側の大きなコンパートメントに照射容器を、右側の小さなコンパートメントにオーガナイザーを配置します。ドネーションIDをスキャンします。製品コードと処理を確認してください。ロット番号をイルミネーターに設定します。金属製のカバーとドロワーを閉じます。スタートボタンを押し、照射を開始します。イルミネーターにより、照射容器内の血小板アミン混合物に対して制御された用量のUVA光が照射されます。アミンは、血小板ユニット内に存在する可能性のある病原体の核酸塩基対の間にドッキングします。光照射により、永続的な架橋が形成されてDNAまたはRNAが結合し、病原体が複製できなくなるため、血液製剤の投与を受けたレシピエントへの疾患誘発を防ぐことができます。光照射後、処理セットを取り除いてください。次に、オーガナイザーからコンテナを取り出し、血小板および処理セットを吊り下げます。照明コンテナの出口にあるカニュラを切り離し、血小板をCADコンテナに流入させます。CADコンテナ内部には、血液製剤中の残留アミンレベルを低減させるために固定化されたマクロポーラスポリスチレンビーズを備えたウェハーが入っています。CADウェハーを曲げないように注意しながら、CAD容器内の空気を照明容器へと排出します。CAD容器の入口ポート付近のチューブを密封します。空の照明用コンテナを取り除き、廃棄します。ストレージコンテナを装着したCADコンテナを血小板撹拌機に6時間から16時間設置します。これにより、残留アムリンの濃度が2 µM以下に減少します。CAD処理後、血小板ユニットをアジテーターから取り出して吊り下げ、CADコンテナーの出口にあるカニューレを折って、血小板を2つの保存容器に流し込みます。次に、保存容器から空気を排出します。Y字フィッティングより上のチューブを密封し、CADコンテナーを取り外します。その結果、in vitroでの血小板機能を評価するための、病原体を不活化した2つの血小板濃厚液が得られました。血小板数、pH、pO₂、PC O₂、乳酸産生量、およびグルコース消費量を測定しました。血小板濃厚液は保存7日目まで測定されました。この図は、インターセプト処理前の2倍量血小板濃縮液の平均開始血小板数と、保存7日目までの処理済み分割製品それぞれの平均血小板数を示しています。ここでわかるように、保存中の血小板減少は約9%でした。この減少は、従来の血小板の保存中に予想される血小板減少と差はありません。欧州の要件に従い、血小板のpHは有効期限終了まで6.4以上に維持される必要があります。処理中、血小板濃縮液のpHは、血小板濃縮液の量および血小板保存容器のガス透過性に基づき、わずかに低下します。この図は、分割血小板製剤を7日間保存した際のpHの変化を示しており、保存期間中、pHは安定し、処理要件の範囲内で適切に維持されています。保存された血小板内では好気性代謝が継続して行われているはずであり、これは患者への輸血後に血小板が生体内で機能できる能力の指標となります。血小板のO2消費量およびCO2産生量は、PL 24 10容器に保存されたインターセプト血小板が7日間の保存期間中、呼吸を継続していることを示しています。同様に、保存血小板においても嫌気性代謝が継続すると考えられます。したがって、グルコース消費量と乳酸産生量も、輸血後の血小板の機能能を示す指標となります。これら2つの図は、7日間の保存期間における乳酸およびグルコースのレベルを示しています。血小板のグルコース消費量と乳酸産生量は、互いに一致しています。7日間の保存期間中、5つのユニットでグルコースレベルが1.11 millimoles per liter未満となり、これはグルコースアッセイの下限値に相当します。バフィーコートの調製およびプーリングのバリデーションにより、インターセプト処理の入力基準、具体的には容量、血小板数、血漿比、および赤血球混入率を満たす血小板濃厚液が作製されました。最終的な製剤は、血小板投与量およびpHを含め、7日間の保存期間にわたってバリデーション基準を満たしています。単回投与分の血小板濃厚液を作製する従来のバフィーコート調製法に対する本手法の主な利点は、採血からの成分回収率を最大化し、2回投与分（ダブルドーズ）の手法を用いることで運用コストを削減し、さらに輸血伝播性病原体を不活化させることで患者の安全性を向上させることができる点にあります。

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