Méthodes pour effectuer des croix dans Setaria viridis, Un nouveau système modèle pour les graminées

L’objectif général de cette procédure est de démontrer comment effectuer des croisements pour cter verus un nouveau système modèle pour les graminées. Pour ce faire, il faut d’abord sélectionner, tailler et étiqueter le pinacle. La deuxième étape consiste à émasculer la panicule taillée en la plongeant dans un bain-marie à 48 degrés Celsius.

Ensuite, le pinacle taillé est utilisé comme femelle pour la pollinisation par un pinacle qui libère du pollen. La dernière étape consiste à récolter les graines deux semaines après la pollinisation croisée. En fin de compte, la coloration Gus des graines hybrides présumées est utilisée pour montrer l’efficacité de la technique.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes comme l’émasculation physique, est qu’elle est moins invasive et relativement facile à établir en laboratoire. Cette méthode permettra d’accélérer l’adoption du cter verus comme modèle génétique en facilitant la réalisation des croisements. Pour commencer, retirez une cellule pour l’arrosage, puis remplissez un plateau de quatre cellules sur neuf avec metro Mix 360.

Ensuite, vaporisez légèrement les cellules et semez les graines à la surface du sol, une graine par cellule. Ensuite, recouvrez les graines d’une couche de terre, vaporisez 0,5 centimètre d’épaisseur sur la surface du sol pour les humidifier, puis arrosez à plat par le bas. Continuez à arroser les cellules par le bas une à deux fois par jour après le semis des graines, en prenant soin de ne pas trop arroser.

Réglez les conditions de la chambre de croissance à 31 degrés Celsius le jour et à 22 degrés Celsius la nuit avec un traitement préalable de 15 degrés Celsius de 8h30 à 9h00. Maintenez également un programme d’obscurité légère de 12 heures et réglez l’humidité relative à 50 %Dans ces conditions. Satter verus a 10.1 fleurira 21 à 22 jours après le semis des graines. Idéalement, l’émasculation est effectuée dans l’après-midi ou le soir.

Sélectionnez le pentacle primaire sur chaque plante qui a une à cinq fleurs en fleurs. Coupez ensuite la pointe du pentacle et retirez toutes les fleurs de la partie inférieure des sections médiane et inférieure proximales à l’aide d’une pince fine. Si un n’a qu’un 10e à un cinquième des fleurs en fleurs.

Afin de conserver la partie inférieure de la partie distale, le milieu et la partie supérieure du milieu proximal pour une taille supplémentaire, coupez l’extrémité et coupez les fleurs à partir de la base de la panicule. Si une panicule a un quart à la moitié des fleurs en fleurs, conservez la section médiane proximale pour une taille supplémentaire et coupez la section médiane distale. Une fois le pentacle coupé, utilisez des ciseaux chirurgicaux pour tailler légèrement les poils.

Prenez soin de conserver les poils dans la région qui sera pollinisée afin de protéger les fleurons d’éventuels dommages causés par la chaleur. Pour chaque épillet, conservez le fleuron mature le plus élevé. Le fleuron le plus élevé aura une probabilité plus élevée d’anthèse au moment de la pollinisation.

Ensuite, retirez toutes les fleurs qui ont fleuri et toutes les fleurs immatures, laissant environ 20 à 30 fleurs par pinacle qui sont uniformément réparties. Ensuite, marquez un côté de chaque fleur avec un marqueur permanent rouge. Et notez le nombre de fleurons sur le pinacle drapez le pinacle avec les informations suivantes, la date de l’émasculation, la durée et la température à laquelle l’émasculation est effectuée.

Une fois la panicule taillée, retirez toutes les talles de chaque plante pour assurer la réaffectation de plus de ressources au développement du pinacle principal. Une heure avant l’émasculation, réglez un bain-marie à 48 degrés Celsius pour le traitement thermique. Une fois préchauffés, pliez doucement les pentacles coupés et trempez-les trois à quatre à la fois dans de l’eau tiède pendant trois à six minutes.

Faites attention de ne pas casser la tige du pentacle. La dernière feuille, qui sub dix cents centaines, ne doit pas entrer en contact avec de l’eau chaude. Ceci afin d’éviter d’endommager les tissus foliaires par la chaleur.

Une fois l’émasculation effectuée pendant la durée souhaitée, retirez les panicules du bain-marie et secouez doucement l’eau de la panicule. Ensuite, couvrez entièrement la panicule émasculée avec un sac à pain micro-perforé personnalisé et fixez-la avec une attache torsadée. Les sacs à pain micro perforés peuvent être personnalisés en fonction de la taille de la panicule.

Enfin, remettez les plantes dans la chambre de culture jusqu’au lendemain. À 9h00 le deuxième et le troisième jour, déplacez les parents femelles émasculés et mâles non émasculés de la chambre de croissance au laboratoire pour effectuer des croisements, observer et ajouter un autre rouge. aux fleurs qui ont fleuri ou qui sont en train de fleurir.

À l’aide d’un marqueur permanent rouge, notez le nombre total de fleurs épanouies par panicule. Inscrivez ensuite la date de pollinisation et le nom du parent mâle sur l’étiquette pour garder une trace des croisements effectués. Observez le temps de pointe de l’antithèse chez les parents mâles dans nos conditions de laboratoire, les fleurs sur les pentacles du parent mâle commencent à s’ouvrir de manière synchrone vers 10h10 Une fois ouvert, l’effort complet de l’anthère et la libération du pollen se produiront après 20 minutes.

Démarrez la pollinisation immédiatement lorsqu’elle est jaunâtre. Des anthères blanches sont visibles sur les fleurs du parent mâle. Les pollinisations sont effectuées le deuxième et le troisième jour en utilisant la pollinisation de panicule à panicule ou la pollinisation d’autre à stigmate.

À l’aide d’une panicule détachée pendant que le mâle frotte doucement la panicule avec la panicule émasculée pour faciliter la pollinisation et jetez la panicule mâle pour éviter la contamination, répétez le processus de pollinisation jusqu’à ce que chaque pinacle émasculé ait été pollinisé par deux à trois pentacles. La méthode la plus efficace est la pollinisation par forceps à l’aide de forceps. Choisissez une fleur qui fleurit avec des anthères blanc jaunâtre ou cueillez des anthères et touchez physiquement le stigmate de la fleur sur le parent femelle.

Utilisez une fleur du parent mâle pour polliniser une fleur sur la panicule émasculée entre les pollinisations de différents parents mâles. Trempez la pince dans de l’éthanol à 95 %, puis essuyez-la avec des lingettes Kim pour éviter la contamination due au transfert de pollen entre différents croisements. Une fois la pollinisation effectuée, couvrez la panicule du parent femelle avec un sac à pain micro perforé personnalisé et fixez-le à la base à l’aide d’une attache torsadée.

Après la pollinisation jusqu’à la récolte des graines, récoltez les graines 14 à 16 jours après le jour de la pollinisation et placez l’étiquette dans la même enveloppe que les graines. Les graines avec des marques rouges des deux côtés représentent les graines qui résultent du croisement génétique contrôlé. Jetez toutes les graines sans marques rouges car elles représentent les graines qui résultent des fleurs nouvellement développées.

Après l’émasculation des graines avec des marques rouges, un seul côté représentera probablement les graines résultant de l’autopollinisation. Enfin, séchez les graines à 30 degrés Celsius pendant deux jours. Conservez les graines séchées en laboratoire ou, idéalement, dans une chambre à graines.

Lorsque vous êtes prêt pour une analyse plus approfondie, retirez les physes si nécessaire. Les méthodes décrites dans cette vidéo sont le résultat de nombreux essais utilisant différentes températures et durées de traitement pour optimiser le processus d’émasculation. Le succès de ce processus a été mesuré par le nombre de graines hybrides obtenues.

Six graines provenant de l’un des croisements d’essai où le parent mâle portait un rapporteur. Les gènes codant pour la bêta-glucuronidase sont illustrés ici. Le gène rapporteur fait virer la graine au bleu lorsqu’elle est colorée, ce qui rend le nombre de graines hybrides facile à compter Une fois maîtrisé, jusqu’à 15 pentacles peuvent être franchis par jour si la procédure est effectuée correctement.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer des croix dans Aria verus.