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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
PCR: The Polymerase Chain Reaction
  • 00:00Overview
  • 00:35The Reaction
  • 04:46Reaction Components
  • 07:10Setting up the Reaction
  • 09:54Helpful Hints
  • 11:23Applications
  • 12:56Summary

PCR: A Reação em Cadeia da Polimerase

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Overview

A reação em cadeia de polimerase, ou PCR, é uma técnica usada para amplificar o DNA através do termociclismo – ciles de temperatura mudam em intervalos de tempo fixos. Usando uma polimerase de DNA termoestável, o PCR pode criar numerosas cópias de DNA a partir de blocos de construção de DNA chamados dNTPs. Há três etapas no PCR: desnaturação, ressarcialização e alongamento. A desnaturação é o primeiro passo do ciclo e faz com que o DNA derreta, interrompendo as ligações de hidrogênio entre as bases resultando em DNA mono-encalhado. A ressarência reduz a temperatura o suficiente para permitir a ligação dos primers oligonucleotídeos ao modelo de DNA. Durante a etapa de alongamento, a polimerase de DNA sintetizará novo DNA de dupla cadeia.

Este vídeo fornece uma introdução ao procedimento PCR. Os princípios básicos do PCR são descritos, bem como um procedimento passo-a-passo para a configuração de uma reação pcr generalizada. O vídeo mostra os componentes necessários para uma reação de PCR, inclui instruções para o design do primer e fornece dicas úteis para garantir reações bem-sucedidas do PCR.

Procedure

A reação em cadeia de polimerase ou PCR é um método amplamente utilizado para amplificar fragmentos de DNA. O PCR usa termociclismo, que é o aquecimento repetido e o resfriamento da reação através de três temperaturas distintas chamadas de denaturação, ressarcimento e extensão ou alongamento. A reação termociclante começa quando os reagentes PCR são colocados em um termociclador de uma máquina, que é programada para aquecer precisamente e esfriar a reação. O cic…

Disclosures

No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. PCR: The Polymerase Chain Reaction. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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