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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
DNA Ligation Reactions
  • 00:00Overview
  • 00:28DNA Ligation: Basic Principles
  • 03:04Setting up a Ligation
  • 05:40Applications
  • 07:08Summary

DNA连接反应

English

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Overview

分子生物学中,连接是指通过形成磷酸二酯键将两个DNA片段连起来。连接反应是由一种叫连接酶的酶催化进行的。在细胞内,连接酶用于修复在DNA复制过程中的单链或双链的断裂。在实验室里,DNA连接酶用于分子克隆来连接插入片段和载体-它是宿主生物内复制目的片段的DNA载体分子。

本短片介绍了DNA连接。讲述了连接的基本原理以及准备一个常用的连接反应的逐步步骤,并讨论了连接反应中的关键因素,例如粘末端突出端的长度对反应温度的影响,如何调整DNA插入片段与载体的比例来防止自身连接。还将提及辅助连接的分子生物学工具如Klenow片段和虾的碱性磷酸酶SAP,并讲述连接的应用,例如邻位连接和为测序在片段上添加接头序列。

Procedure

连接是指结合在一起,其生物术语是用来形容两个生物分子通过共价键结合起来的酶联反应。本短片讲述了DNA连接在分子生物学研究中的应用。 在细胞内,连接酶识别并修复DNA链的断裂,催化DNA主链的 3’羟基和5’磷酸集团之间形成磷酸二酯键。连接反应属于正常细胞程序的一部分,如在复制过程中修复单链或双链DNA的断裂。 在实验室里,DNA连接酶经常用在分子克隆?…

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No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. DNA Ligation Reactions. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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