Name: In vivo twee-foton microscopie van de Single zenuwuiteinden in de huid (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Leer longitudinale dynamische veranderingen in zenuwuiteinden bestuderen na selectieve laserlesie bij transgene muizen. Deze methode maakt gedetailleerde in vivo beeldvorming van huidzenuwen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen graag Neurotar Ltd bedanken voor technische bijstand, CIMO Foundation en FGSN voor financiële steun.

Procedures waarbij proefdieren zijn goedgekeurd door de National Animal Experiment Board, Finland. 1 Animal Voorbereiding voor Imaging <ol><li> Verdoven een muis door intraperitional (IP) injectie van ketamine (0.08 mg per kg lichaamsgewicht) en xylazine (0,01 mg per kg lichaamsgewicht). Controleer de anesthesie met de achterste teen knijpen reflex. </li><li> Dompel de ogen dier in oogdruppels (Viscotears) om de ogen te beschermen tegen uitdroging. </li><li> Plaats de muis op een verwarmingselement (Supertech) bij 37 ° C om onderkoeling te voorkomen. </li><li> Reinig de aangewezen voor beeldvorming met 70% ethanol voetzool. </li><li> Voeg een druppel water op de huid van de voet pad voor het elektrisch koppelen tussen de huid en dekglas. </li><li> Leg plastic verpakkingsmateriaal onder de achterpoot die is gepositioneerd onder een metalen ring met deksel klasse. </li><li> Pas de dikte van de kunststof verpakkingsmateriaal de huid plat. </li><li> Doe een druppel water op de cover glass voor onderdompeling tussen dekking van glas en de doelstelling. </li></ol> 2 Metal Fixator Ring Voorbereiding <ol><li> Voor de stabilisatie van de huid gebruik de metalen fixator. Wij gebruiken Gemeenschapsmodel beschermd tweevleugelige fixator met een metalen ring (met dank aan Neurotar Ltd, Finland). Vul de spuit met superlijm, zet de kleine druppel superlijm door de naald op de ring en zachtjes verspreid de lijm voor een uniforme dekking van de ring oppervlak. Het is cruciaal om de minimale hoeveelheid lijm die nodig is alleen uniforme dekking gebracht, vanwege overmatige hoeveelheid lijm het gebied van het zicht kan verminderen of belemmeren latere beeldvorming. Opmerking: Als alternatief kan de combinatie van een metalen staaf (van onder) en standaard microscoop glaasje (als cover) kunnen worden gebruikt om de huid plat en goede optische koppeling van het samenstel 14 te waarborgen. Twee paperclips kunnen worden gebruikt om de poot tussen glas en metaal staaf vast oppervlak (figuur 4 </strong&gt;). </li><li> Bedek de ring met microscoop cover slide (5 mm diameter, Electron Microscopy Science). </li><li> Schroef de ring fixator aan de stijve metalen staaf die wordt montaged op de gemotoriseerde microscoop podium. </li></ol> 3 Imaging Procedure <ol><li> In het geval van het gebruik van thy1-YFP-H muizen, kiest het blauwe deel van fluorescentie lamp spectra om zenuwvezels te visualiseren. Vind de zenuw van belang in epifluorescentie- modus en de focus op het. </li><li> Noteer de coördinaten van een plek voor longitudinale beeldvorming. Gebruik een carpaal pad als een referentiepunt. Tijdens de volgende beeldvormende sessies, detecteren eerst de carpale pad en vinden dan dezelfde upstream grote zenuwvezels en terug te gaan met behulp van de opgeslagen coördinaten. Het is essentieel om de voet pad in dezelfde richting positioneren loodrecht op de metalen staaf hetzelfde referentiesysteem houden. </li><li> Zet de twee-foton mode. Voor de thy1-YFP-H muizen, is het geschikt om de 950 nm golflengte van laserstraling gebruikende zenuwvezels visualiseren. </li><li> Selecteer laser golflengte en emissie-kanalen (450-480 nm voor de tweede harmonische generatie detectie, 520-550 nm voor de beeldvorming van YFP-gelabeld zenuwen en 580-630 nm voor de detectie van YFP fluorescentie en autofluorescentie van het haar), te beginnen met laag laservermogen (3-5%) om photodamage en bleken voorkomen. De typische spanning op de fotovermenigvuldigingsbuizen is 600-700 V voor dergelijke beeldvorming. </li><li> Stel de gewenste resolutie (512 x 512 of 640 x 640 voor een snelle gebeurtenissen metingen, 800 x 800 of 1.024 x 1.024 voor morfologische beeldvorming), axiale stap (1-3 micrometer), dikte van het monster en de tijdsintervallen (1-10 min). De belichtingstijd in de orde van 1 msec per een pixel. </li><li> Markeer eerst de bovenste en onderste grenzen van het beeldvolume in de software. </li><li> Het verwerven van de afbeelding verwijzing stapel voor de verwijzing vóór de laesie. Indien nodig is het mogelijk de basislijn te nemen gedurende enkele minuten. </li><li&gt; Herhaaldelijk (ten minste om de 10-15 min) controleren dierlijke ademhaling en reflexen, wanneer dat nodig is van toepassing een extra bedrag van anesthetica. </li><li> Na de beeldvorming van de pad schoon met een tissue en zet de muis in een doos herstel bij 36 ° C totdat het helemaal wakker. OPMERKING: Meestal de duur van een opnamesessie gecombineerd met laser geïnduceerde laesies (zie hieronder) niet meer dan 1 uur. We raden te gaan of het dier is diep verdoofd elke 10-15 min; dit moet niet bemoeien met zichzelf afbeelden, maar moeten worden beschouwd, terwijl de experimentele ingreep gepland. De duur van het effect van een ketamine / xylazyne dosis ongeveer 30 tot 40 minuten, dus raadzaam toepassen extra ¼ dosis ½ na 25-30 min. OPMERKING: Het moet ook worden overwogen wanneer de experimenten is van plan dat de frequentie van imaging-sessies voor een bepaald dier niet meer dan 1 sessie per 2 dagen om schadelijke effecten van re voorkomencompetitieve anesthesie. </li></ol> 4 Laser laesie <ol><li> Na het verwerven van de referentie-afbeelding stapel, gebruikt u het bleken protocol om een ​​micro-laesie te maken. </li><li> Verhoog de laservermogen tot 100%. </li><li> Verhoog de belichtingstijd tot 100-1000 msec per regio van belang (100-1,000x meer dan in het geval van standaard imaging). </li><li> Een overzicht van de omgeving voor de laesie. </li><li> Voeg de laesie door het inschakelen van het bleken. </li><li> Ga terug naar de normale weergave modus en ga verder met time-lapse-opnamen. </li></ol> 5 Data Processing and Analysis <ol><li> Doorgaan met unmixing met Spectral componenten voor elke pixel plugin in ImageJ 8 (Joachim Walter, <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/spectral-unmixing.html">http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/spectral-unmixing.html</a> ). </li><li> Open de afbeelding stack en splitsing van de kanalen. </li><li> Zoek het gebied vrij is van de zenuwen of haar voor de achtergrond metingen. Zet een gebied of interesse in dat gebied. </li><li> Schets voorzichtig het gedeelte van het haar wanneer het duidelijk van de zenuwen. </li><li> Overzicht van de zenuw in het deel van het beeld waar het gescheiden van het haar. </li><li> Spaar ontmenging matrix. </li><li> Solliciteer gemeten unmixing matrix voor de hele stapel. </li><li> Sla de nieuwe bewerkte beeld stapels in * tif-formaat. </li></ol>

<ol><li>Lumpkin, E. A., Caterina, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+sensory+transduction+in+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of sensory transduction in the skin.</a> Nature. 445, 858-865 (2007).</li>
<li>Kennedy, W. R., Wendelschafer-Crabb, G., Johnson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+epidermal+nerves+in+diabetic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Quantitation of epidermal nerves in diabetic neuropathy.</a> Neurology. 47, 1042-1048 (1996).</li>
<li>Wu, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morton%27s+interdigital+neuroma%3A+a+clinical+review+of+its+etiology%2C+treatment%2C+and+results%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Foot+Ankle+Surg%22%5BJournal%5D)">Morton's interdigital neuroma: a clinical review of its etiology, treatment, and results.</a> J. Foot Ankle Surg. 35, 112-119 (1996).</li>
<li>Lauria, G., Lombardi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+biopsy%3A+a+new+tool+for+diagnosing+peripheral+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ%22%5BJournal%5D)">Skin biopsy: a new tool for diagnosing peripheral neuropathy.</a> BMJ. 334, 1159-1162 (2007).</li>
<li>Cheng, C., Guo, G. F., Martinez, J. A., Singh, V., Zochodne, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+plasticity+of+axons+within+a+cutaneous+milieu%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dynamic plasticity of axons within a cutaneous milieu.</a> J. Neurosci. 30, 14735-14744 (2010).</li>
<li>Wang, B., Zinselmeyer, B. H., McDole, J. R., Gieselman, P. A., Miller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+Imaging+of+Leukocyte+Homing+and+Migration+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo.</a> J Vis Exp. (46), e2062(2010).</li>
<li>Sacconi, L., O'Connor, R. P., Jasaitis, A., Masi, A., Buffelli, M., Pavone, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+multiphoton+nanosurgery+of+cortical+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">In vivo multiphoton nanosurgery of cortical neurons.</a> J Biomed Opt. 12, 050502(2007).</li>
<li>Rasband, W.S., ImageJ. , US National Institutes of Health. Bethesda, Maryland, USA. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij</a> (1997).</li>
<li>Robinson, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+injury+to+peripheral+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Traumatic injury to peripheral nerves.</a> Muscle Nerve. 23, 863-873 (2000).</li>
<li>Feng, G., Mellor, R. H., Bernstein, M., Keller-Peck, C., Nguyen, Q. T., Wallace, M., Nerbonne, J. M., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li>
<li>Marinkovic, P., Reuter, M. S., Brill, M. S., Godinho, L., Kerschensteiner, M., Misgeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+transport+deficits+and+degeneration+can+evolve+independently+in+mouse+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Axonal transport deficits and degeneration can evolve independently in mouse models of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 109, 4296-4301 (2012).</li>
<li>Amit, S., Yaron, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+systems+for+in+vivo+monitoring+and+microenvironmental+investigations+of+diabetic+neuropathy+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm%22%5BJournal%5D)">Novel systems for in vivo monitoring and microenvironmental investigations of diabetic neuropathy in a murine model.</a> J Neural Transm. 119, 1317-1325 (2012).</li>
<li>Yu, H., Fischer, G., Jia, G., Reiser, J., Park, F., Hogan, Q. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+gene+transfer+into+the+dorsal+root+ganglion+of+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">Lentiviral gene transfer into the dorsal root ganglion of adult rats.</a> Mol Pain. 7, 63(2011).</li>
<li>Yuryev, M., Khiroug, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+longitudinal+investigation+of+individual+nerve+endings+in+the+skin+of+anesthetized+mice+using+in+vivo+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Dynamic longitudinal investigation of individual nerve endings in the skin of anesthetized mice using in vivo two-photon microscopy.</a> J Biomed Opt. 17, 046007(2012).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

In deze video protocol tonen we de werkwijze voor niet-invasieve longitudinale twee-foton beeldvorming van enkele zenuwuiteinden. De dynamiek van de huid innervaties wordt beïnvloed in dergelijke ziekten als psoriasis en perifere neuropathie 2, en in traumatische verwondingen 9. Twee-foton beeldvorming maakt een gedetailleerde analyse van de zenuwvezels structuren in collageen matrix. Het gebruik van transgene reporter muizen helpt om de problemen met de kleuring van de...

A correction was made to <a href="/video/51045">In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin</a>.
Leonard Khiroug was removed as an author.

Erratum: In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

Cutane zenuwuiteinden ondergaan dynamische veranderingen onder verschillende pathofysiologische toestanden. Zenuwvezels kan gaan door het proces van degeneratie en regeneratie of herstructurering in de loop van ziektes zoals perifere neuropathie 2 of Morton&#39;s neuroom 3. Na traumatisch letsel, een belangrijk onderdeel van zenuwuiteinden dynamiek huid reinnervation van het beschadigde gebied. Echter, de gemeenschappelijke aanpak voor het onderzoek van de zenuwuiteinden is ex vivo histologische coupes die real-time informatie over de lopende processen 4 ontbreekt. Gebruik van genetisch gecodeerde fluorescente markers, is het mogelijk om de zenuwuiteinden te volgen in de huid van levende dieren, waardoor rijke en significant meer relevante informatie over de structurele veranderingen verkrijgen. Het onderzoek van cutane zenuwuiteinden kan via conventionele fluorescentiemicroscopie echter sterke lichtverstrooiing van het huidweefsel sterk ondermijnd de kwaliteitvan de verkregen gegevens 5. Multifoton microscopie maakt acquisitie van beelden met hoge resolutie in de sterk verstrooiende weefsel als gevolg van de niet-lineaire som van de energie van fotonen excitatie resulteert in emissie van fluorescentie alleen het brandpunt van het objectief. Dit effect leidt tot een sterke toename van de penetratiediepte en de verbetering van de signaal-ruisverhouding van de meting huidweefsels 6. Met dezelfde laser als voor beeldvorming, is het mogelijk om selectieve ontleding van de zenuwvezels 7 produceren. In het volgende protocol tonen we de werkwijze longitudinale beeldvorming van cutane zenuwuiteinden in vivo in reporter transgene muizen gecombineerd met selectieve laser laesie in de handel verkrijgbare multifoton microscoop systeem.

<table><tbody><tr><td>Rond afdekglas&nbsp;</td><td>Electron Microscopy Science</td><td>72296-05</td><td>5 mm diameter #1.5 dikte</td></tr><tr><td>Oogdruppels Viscotears</td><td>Novartis</td><td></td><td>2 mg/g</td></tr><tr><td>Superlijm Loctite 401</td><td>Henkel</td><td>135429</td><td></td></tr><tr><td>Ketaminol</td><td>Intervet</td><td></td><td>Ketamine 50 mg/ml, werkoplossing 10 mg/ml (gebruik het 80 &micro;g per gram dierengewicht)</td></tr><tr><td>Rompun</td><td>Bayer Healthcare</td><td></td><td>Xylazine 20 mg/ml, werkoplossing 1,25 mg/ml (gebruik het 10 &micro;g per gram dierengewicht)</td></tr><tr><td>Ethanol 70%</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gedestilleerd water of Milli-Q water</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spuiten 1 ml</td><td>BD</td><td>300013</td><td></td></tr><tr><td>30 G 1/2" naalden</td><td>BD</td><td>304000</td><td></td></tr><tr><td>Kunststof verpakkingsmateriaal</td><td></td><td></td><td>Kan worden gekocht bij een algemene ijzerhandel</td></tr><tr><td>FV-1000MPE microscoop</td><td>Olympus</td><td>FV-1000MPE</td><td>Microscoop met gemotoriseerde stage en stijve metalen staaf voor fixatie</td></tr><tr><td>25X XLPlan objectief</td><td>Olympus</td><td>XLPLN 25XWMP</td><td>Water immersie objectief geoptimaliseerd voor multifoton beeldvorming</td></tr><tr><td>Mai-Tai DeepSee laser (2 W)</td><td>SpectraPhysics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Verwarmingskussen</td><td>Supertech</td><td>TMP-5b</td><td>Verwarmingskussen met temperatuurregelaar</td></tr><tr><td>Metalen ringfixator</td><td>Neurotar Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td></td><td>Open source software voor beeldverwerking en analyse, http://rsbweb.nih.gov/ij/&nbsp;</td></tr><tr><td>Thy1-YFPH muizenstam</td><td>JaxLab</td><td>003782</td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo twee-foton microscopie van de single zenuwuiteinden in de huid

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

Zenuwuiteinden in de huid zijn betrokken bij fysiologische processen zoals sensing 1 als in pathologische processen zoals neuropathische pijn 2. Hun dicht-bij-oppervlak positionering vergemakkelijkt microscopische beeldvorming van de huid zenuwuiteinden in levende intacte dier. Met multifoton microscopie, is het mogelijk om fijne beelden overwinnen het probleem van sterke lichtverstrooiing van het huidweefsel te verkrijgen. Reporter transgene muizen die EYFP expressie onder de controle van Thy-1 promoter in neuronen (inclusief omtrek sensorische neuronen) zijn zeer geschikt voor de longitudinale studies van afzonderlijke zenuwuiteinden gedurende langere tijd tot enkele maanden of zelfs levenslang. Bovendien, met dezelfde femtoseconde laser als voor de beeldvorming, is het mogelijk een selectieve laesies van zenuwvezels te produceren voor de studies van de herstructurering zenuwvezel. Hier presenteren we een eenvoudige en betrouwbare protocol lengterichting multifoton in vivo beeldvorming enlaser gebaseerde microchirurgie op de huid van muizen zenuwuiteinden.

Met de beschreven techniek is het mogelijk om dezelfde vezel na de laesie te volgen en om de afbraak van de beschadigde zenuwuiteinden (figuur 1) te bestuderen. Verwerving van de stapel met de dikte van 120-150 urn gewoonlijk juist voor de repetitieve beeldvorming gedurende verscheidene dagen om de gehele vezel in het gezichtsveld behouden. De laesie kan typisch beknopt worden geproduceerd wanneer de kunststof verpakkingsmateriaal wordt aangepast aan de huid plat, zodat de c...

Het protocol voor dynamische longitudinale beeldvorming en selectieve laser laesie van zenuwuiteinden in reporter transgene muizen wordt gepresenteerd.

In vivo twee-foton microscopie van de Single zenuwuiteinden in de huid

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Het doel van de volgende procedure is om longitudinale dynamische veranderingen in zenuwuiteinden in de huid te bestuderen na een selectieve laesie. Hiervoor anesthetiseren we een YFP-transgene muis en plaatsen we deze op een warmtemat om de lichaamstemperatuur op peil te houden. Plaats de achterpoot op een plastic verpakkingsmateriaal en breng een druppel water aan op de huid om een betere optische koppeling te bereiken.Dek de achterpool af met een glazen dekglas dat stevig aan een metalen staaf is bevestigd voor stabiliteit. Voeg een druppel water toe voor gebruik met een waterimmersie-objectief en voer tweemaal microscopische beeldvorming uit. In combinatie met laser-geïnduceerde laesies van de zenuwuiteinden beïnvloeden diverse pathologische condities de dynamiek van huidintegraties.Een van de beste manieren om dit effect te controleren is door pathologische veranderingen in de cutane zenuwuiteinden direct in de huid van een levend dier te visualiseren. Vivo-fotomicroscopie is een uitstekend instrument voor deze benadering. Weeg voor de beeldvorming de muis en induceer anesthesie door ketamine in een concentratie van 80 µg per gram lichaamsgewicht en xylazine te injecteren.In e

in-vivo-two-photon-microscopy-of-single-nerve-endings-in-skin

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Om te begrijpen netwerk dynamiek van microcircuits in de neocortex, is het essentieel om tegelijkertijd op te nemen van de activiteit van een groot aantal neuronen. In-vivo twee-foton calcium beeldvorming is de enige methode die het mogelijk maakt een op te nemen van de activiteit van een dichte neuronale populatie met single-cell resolutie.

In vivo 2-Photon Imaging Calcium in Layer 2 / 3 van Muizen

Een minimaal invasieve protocol om de muis te wervelkolom te stabiliseren en uit te voeren...

In vivo beeldvorming van de muis ruggenmerg met behulp van twee-foton Microscopie

Ervaring-afhankelijke moleculaire veranderingen in neuronen zijn essentieel voor het vermogen van de hersenen aan te passen als reactie op gedrags-uitdagingen.

In vivo twee-foton beeldvorming van ervaring-afhankelijke moleculaire veranderingen in corticale neuronen

Om de veranderingen van nociceptieve intraepidermal zenuwvezels (IENFs) in pijnlijke neuropathieën (PN) te bestuderen, ontwikkelden we protocollen die direct kon onderzoeken driedimensionale morfologische veranderingen waargenomen in nociceptieve IENFs. Drie-dimensionale analyse van IENFs heeft de potentie om de morfologische veranderingen van IENF in PN evalueren.

Driedimensionale beeldvorming van Nociceptieve Intraepidermal zenuwvezels in Menselijke huid Biopsieën

Time-lapse beeldvorming in het levende dier levert waardevolle informatie over structurele reorganisatie in de intacte hersenen. Hier introduceren we een voorbereiding met een verdunde schedel die transcraniële beeldvorming mogelijk maakt van fluorescent gelabelde synaptische structuren in de levende muizencortex door middel van twee-foton microscopie.

Twee-Photon<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging van vertakte stekels in de Mouse Cortex met een uitgedunde schedel Voorbereiding

Dit protocol maakt gebruik van driedimensionale (3D) beeldvorming en analyse technieken om te visualiseren en te kwantificeren van zenuw-specifieke mitochondriën. De technieken zijn van toepassing op andere situaties waar een fluorescent signaal wordt gebruikt voor het isoleren van een subset van gegevens uit een ander fluorescent signaal.

Driedimensionale beeldvorming en analyse van Mitochondria binnen menselijke Intraepidermal zenuwvezels

Morfologische veranderingen optreden in immuun responsieve fibroblast cellen na activering en het bevorderen van veranderingen in cellulaire werving. Gebruik makend van 2-Photon Imaging in combinatie met een genetisch gemanipuleerde fibroblast-specifieke proteïne 1 (FSP1)-CRE; tdTomato floxed-stop-floxed (TB/TB) muis lijn en groene fluorescently gelabeld lipopolysaccharide-FITC, we kunnen zeer specifieke opname van lipopolysaccharide in dermale fibroblasten en morfologische veranderingen in...

In vivo tweekleurige 2-Fobe beeldvorming van genetisch gelabelde reporter cellen in de huid

Het huidige protocol beschrijft in vivo calciumbeeldvorming voor het meten van de reacties van ensembles van lumbale-6 DRG-neuronen op somatische en viscerale stimuli. Er kunnen grondige vergelijkingen worden gemaakt tussen neuronen die reageren op verschillende stimuli. Dit protocol is waardevol voor het onderzoeken van mechanismen van viscerale pijn en somatische stimulatie, zoals acupunctuur.

In Vivo calciumbeeldvorming van de respons van neuronen in dorsale wortelganglia op somatische en viscerale stimuli

Dit protocol beschrijft in vivo GCaMP-calciumbeeldvorming van intacte trigeminusganglion (TG)-neuronen. Deze beschrijving omvat TG-blootstellingschirurgie, in vivo confocale microscopiebeeldvorming van TG-neuronen, toepassing van somatische stimuli tijdens microscopische beeldvorming van TG-neuronen en analyse van in vivo GCaMP-calciumbeeldvormingsgegevens.

In vivo Calciumbeeldvorming van neuronale ensembles in netwerken van primaire sensorische neuronen in intacte trigeminusganglia

Deze studie presenteert een in vivo twee-foton beeldvormingsbenadering om de structuren van laag-drempel mechanoreceptor (LTMR) axonterminalen in de voorpoothuid van muizen te visualiseren. Met behulp van herhaalde, hoogresolutiebeeldvorming van individuele axonen biedt deze methode een nieuw platform voor het bestuderen van de structuur en functie van het cutane sensorische circuit tijdens de ontwikkeling en bij volwassenen.

Intravitale tweefotonbeeldvorming van aanrakingssensorische axonmorfologie in muizenhuid

Leer longitudinale dynamische veranderingen in zenuwuiteinden bestuderen na selectieve laserlesie bij transgene muizen. Deze methode maakt gedetailleerde in vivo beeldvorming van huidzenuwen mogelijk.

In vivo twee-foton microscopie van de Single zenuwuiteinden in de huid

Meer video's verkennen