Name: Monte todo Rotulagem de Cilia na Olfativo Sistema de Ratos Principal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: Aprenda a rotulagem de montagem inteira de cílios no sistema olfatório de camundongos usando imunofluorescência. Este método otimizado permite visualização detalhada da localização proteica em neurônios sensoriais.

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Este trabalho foi financiado pela Deutsche Forschungsgemeinschaft DFG (Exc257, SFB958).

NOTA: Todos os procedimentos com animais foram manipulados no Charité University Clinic Jena ou de acordo com as leis Animal Care alemães evitando qualquer sofrimento desnecessário dos animais. 1. Soluções preparação e Dissection Workplace <ol><li> Soluções NOTA: Prepare as soluções a seguir antes de iniciar a dissecção do epitélio. <ol><li> Soluções para o procedimento de dissecção: <ol><li> Preparar a solução de Ringer (pH 7,4) com concentrações de 140 mM de NaCl, 5 mM de KCl, 10 mM de HEPES, 2 mM de CaCl2, 1 mM de MgCl2, e 10 mM de glucose. </li><li> Preparar uma solução de PBS - / - solução (pH 7,4) com concentrações de 2,68 mM de KCl, 1,47 mM de Na KH 2 PO 4, 136 mM de NaCl, 8,1 mM e 2 HPO 4. </li><li> Prepara-se uma solução fixadora (pH 7,2) com concentrações de 1x PBS - / -, 0,2 mM de CaCl2, 4% de sacarose, e 4% de paraformaldeído. Sacarose na solução fixadora melhora crioseccionamento e pick-up de criosecções. Armazenar a -20 ° C. </li></ol></li><li> Soluções para o procedimento de coloração <ol><li> Preparar uma solução de PBS + / + solução com concentrações de 1x PBS - / -, 0,48 mM de MgCl2, 0,9 mM de CaCl2. </li><li> Prepara-se uma PBST + / + solução com concentrações de 1x PBS + / + e 0,1% de Triton X-100. </li><li> Prepara-se uma solução de bloqueio com concentrações de 1x PBST + / + e 1% de gelatina. </li></ol></li></ol></li><li> Local de trabalho <ol><li> Para o local de trabalho dissecção, usar um microscópio de dissecação com iluminação brilhante, bem como uma caneta líquido-bloqueador. </li><li> Prepara-se uma placa de Petri, cheia com solução de Ringer, e lâminas de vidro adesivas. </li><li> Obter os seguintes instrumentos cirúrgicos: um par de tesouras cirúrgicas com uma afiada e uma ponta romba, um par de tesouras de Primavera com forma de ponta de linha reta, duas pinças com ponta curvada forma fina e uma lâmina de barbear ( <strong&gt; Figura 1A). </li></ol></li></ol> 2. Preparação do Septo nasal <ol><li> Casa animais em gaiolas aprovados, com acesso regular a alimentos e água e do ciclo de dia / noite adequado. </li><li> Realizar anestesia em um recipiente contendo gaze embebida fechado com 100% de isoflurano e monitor de analgesia, testando reflexos nos pés traseiros. Desde deslocamento cervical pode causar sangue nas cavidades nasais, decapitar diretamente ratos anestesiados. </li><li> Retire a pele para expor o osso de todo o crânio e nariz, e limpar o sangue restante e tecido, cuidadosamente, com uma toalha de papel. Remover o maxilar inferior e os dentes da frente. </li><li> Incisão no osso dorsal do nariz bilateralmente em 1-2 mm de distância paralela à linha de sutura se separar um lado do septo (medial) da maxila (lateralmente). Dividir o nariz com um único corte. Se restos de ossos e conchas ainda estão ligados ao septo, retire-os cuidadosamente para expor o septo completamentesem tocá-lo. </li><li> Remover o osso nasal dorsal deslizando a ponta curvada de uma pinça fina ao longo do lado dorsal do septo, entre o septo nasal e osso. Aplique uma leve pressão sobre o osso, empurre-o para cima e remova-o. </li><li> Para proporcionar o acesso aos dois tecidos do septo, um de cada cavidade, remover cuidadosamente a maxila do outro lado da cabeça. Ao preparar os animais mais velhos (P&gt; 28), remova a ponta do osso frontal que cobre os bulbos olfatórios. </li><li> Identificar o epitélio olfactivo pela sua cor ligeiramente amarela (Figura 1B). O epitélio respiratório na fronteira é branco e mostra o movimento dos cílios móveis que podem ser vistas sob o microscópio de dissecação. Corte ao longo da fronteira entre o epitélio olfativo e respiratória com um par de tesouras de primavera. </li><li> Estender o corte e separar o septo a partir da conexão ventral ao osso vômer. Em seguida, corte ao longo da fronteira entre o septo e lâmina cribrosa do etmoidal Ose. O septo é agora completamente isolada de todas as conexões com a cabeça. Use as posições de corte mostrado na Figura 1C. </li></ol> 3. O isolamento do Olfativo Epithelium para Immunostaining <ol><li> Coloque uma lâmina de vidro adesiva na placa de petri cheia com solução de Ringer. Colocá-lo sobre o bordo da placa de petri, de modo que uma metade do vidro encontra-se em solução (Figura 1A) da campainha. </li><li> Use uma pinça para transferir cuidadosamente o etmóide com o epitélio olfativo à placa de Petri. Levantá-lo sem agarrando-o com as pontas fórceps. </li><li> Agarrar a placa perpendicular do osso etmóide com uma pinça e usar uma segunda para remover cuidadosamente o epitélio de um lado do septo. Deslize a ponta curvada entre a placa perpendicular e epitélio de descascar o epitélio off. </li><li> Seja sempre a certeza de identificar o lado ciliar, no caso de o epitélio vira em soluti do Ringerno. Se o epitélio vira, dificilmente é possível identificar o lado ciliar depois. Principalmente, o epitélio enrola com a superfície do ciliar dentro. </li><li> Comparar a forma de tecido inscritos com as posições de corte mostrado na Figura 1C. Agarre o epitélio em uma posição na fronteira e puxe-o para a lâmina de vidro. Não toque no lado do ciliar com a pinça para evitar lesões do tecido. </li><li> Ligue o septo e repetir o procedimento com o epitélio do outro lado. </li><li> Seca-se a lâmina de vidro em torno de ambas as peças de epitélio olfactivo com uma toalha de papel e cercam o tecido com uma caneta líquido-bloqueador. </li><li> Fixar o tecido com solução fixadora 150 uL durante 10 min à TA. No que diz respeito a estabilidade e integridade dos cílios, use tempos de fixação curtos para uma variedade de anticorpos testados. Dentro destes 10 min cílios são fixos, mas provavelmente não o todo tecido epitelial. Assim, visualizar imediato com o microscópio subsequente para os stenção procedimento. No entanto, os tempos de fixador pode variar para anticorpos individuais. </li></ol> 4. Coloração Protocol NOTA: Lidar com o tecido com muito cuidado para preservar as estruturas ciliares dos neurônios olfatórios. Remover soluções por pipetagem. Não deixe cair quaisquer soluções diretamente no epitélio, como forças mecânicas poderia interromper os cílios bem. Execute todas as etapas na RT se não for indicado o contrário. <ol><li> Remover a solução fixadora e lavar 2 vezes com PBS + / +. </li><li> Incubar o epitélio durante pelo menos 1 hora com solução de bloqueio. </li><li> Preparar a solução de anticorpo primário por dissolução do anticorpo em solução (1: 200 para os anticorpos utilizados neste estudo) de bloqueio e centrifugar durante 5 minutos a toda a velocidade para remover quaisquer precipitados. </li><li> Incubar o epitélio com solução de anticorpo numa câmara húmida a 4 ° CO / N. </li><li> Lavar epitélio com PBS + / + durante 5 minutos, pelo menos, 3 vezes. </li><li>Preparar a solução de anticorpo secundário por dissolução do anticorpo em solução (1: 500) de bloqueio e centrifuga-se durante 5 minutos à velocidade máxima. </li><li> Incubar o epitélio com solução de anticorpo secundário durante 1 h numa câmara escura. </li><li> Lavar epitélio com PBS + / + durante 5 minutos, pelo menos, 3 vezes. </li><li> Retirar o líquido-bloqueador com uma lâmina de barbear ou toalha de papel. Lava-se a epitélio com água destilada durante 5 s. </li><li> Preserve o tecido em antifade reagente de montagem. NOTA: fluorescência de fundo aumenta rapidamente dentro de dias; análise microscópica, o mais tardar dois dias após a incorporação no meio de montagem é, portanto, recomendada. Cuidados especiais devem ser tomados para não apertar o tecido ao pesquisar o plano focal correto, uma vez que pode causar sérios danos à preparação. Devido a fluorescência fora de foco, é recomendável uma investigação mais aprofundada com a microscopia confocal. </li></ol>

<ol><li>Firestein, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+the+olfactory+system+makes+sense+of+scents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">How the olfactory system makes sense of scents.</a> Nature. 413 (6852), 211-218 (2001).</li>
<li>Buck, L., Axel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+multigene+family+may+encode+odorant+receptors%3A+a+molecular+basis+for+odor+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A novel multigene family may encode odorant receptors: a molecular basis for odor recognition.</a> Cell. 65 (1), 175-187 (1991).</li>
<li>Wong, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+type+III+adenylyl+cyclase+gene+leads+to+peripheral+and+behavioral+anosmia+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Disruption of the type III adenylyl cyclase gene leads to peripheral and behavioral anosmia in transgenic mice.</a> Neuron. 27 (3), 487-497 (2000).</li>
<li>Belluscio, L., Gold, G. H., Nemes, A., Axel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+deficient+in+G%28olf%29+are+anosmic%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Mice deficient in G(olf) are anosmic.</a> Neuron. 20 (1), 69-81 (1998).</li>
<li>Brunet, L. J., Gold, G. H., Ngai, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+anosmia+caused+by+a+targeted+disruption+of+the+mouse+olfactory+cyclic+nucleotide-gated+cation+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">General anosmia caused by a targeted disruption of the mouse olfactory cyclic nucleotide-gated cation channel.</a> Neuron. 17 (4), 681-693 (1996).</li>
<li>Reisert, J., Lai, J., Yau, K. W., Bradley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+the+excitatory+Cl-+response+in+mouse+olfactory+receptor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Mechanism of the excitatory Cl- response in mouse olfactory receptor neurons.</a> Neuron. 45 (4), 553-561 (2005).</li>
<li>Hengl, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+components+of+signal+amplification+in+olfactory+sensory+cilia%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Molecular components of signal amplification in olfactory sensory cilia.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (13), 6052-6057 (2010).</li>
<li>Smith, D. W., Thach, S., Marshall, E. L., Mendoza, M. G., Kleene, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+lacking+NKCC1+have+normal+olfactory+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Physiolog.%2C+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mice lacking NKCC1 have normal olfactory sensitivity.</a> Physiolog., & Behavior. 93 (1-2), 44-49 (2008).</li>
<li>Menco, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+aspects+of+olfactory+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Senses%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural aspects of olfactory signaling.</a> Chemical Senses. 22 (3), 295-311 (1997).</li>
<li>Serizawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neuronal+identity+code+for+the+odorant+receptor-specific+and+activity-dependent+axon+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A neuronal identity code for the odorant receptor-specific and activity-dependent axon sorting.</a> Cell. 127 (5), 1057-1069 (2006).</li>
<li>Baumgart, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffolding+by+MUPP1+regulates+odorant-mediated+signaling+in+olfactory+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Scaffolding by MUPP1 regulates odorant-mediated signaling in olfactory sensory neurons.</a> Journal Of Cell Science. 127 (11), 2518-2527 (2014).</li>
<li>Strotmann, J., Wanner, I., Krieger, J., Raming, K., Breer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+odorant+receptors+in+spatially+restricted+subsets+of+chemosensory+neurones%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Expression of odorant receptors in spatially restricted subsets of chemosensory neurones.</a> Neuroreport. 3 (12), 1053-1056 (1992).</li>
<li>Jenkins, P. M., McEwen, D. P., Martens, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+cilia%3A+linking+sensory+cilia+function+and+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Senses%22%5BJournal%5D)">Olfactory cilia: linking sensory cilia function and human disease.</a> Chemical Senses. 34 (5), 451-464 (2009).</li>
<li>Tadenev, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+Bardet-Biedl+syndrome+protein-8+%28BBS8%29+perturbs+olfactory+function%2C+protein+localization%2C+and+axon+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Loss of Bardet-Biedl syndrome protein-8 (BBS8) perturbs olfactory function, protein localization, and axon targeting.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (25), 10320-10325 (2011).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

A técnica de preparo em face descrita neste protocolo fornece uma ferramenta poderosa para a análise detalhada do sistema olfativo. Até o momento, a maioria dos estudos que caracterizam a localização de proteínas sinalizadoras utiliza imunocolorações de criossecções. Eles apresentam uma boa visão geral do epitélio olfatório, e a expressão de proteínas em diferentes tipos ou regiões celulares pode ser facilmente identificada. No entanto, a expressão nos cílios olfatórios às vezes é difícil de detectar. Mesmo que ...

O epitélio olfativo do mouse na cavidade nasal compreende 6-10.000.000 neurônios olfatórios bipolares 1. Cada neurônio olfativo escolhe um dos 1.200 genes de receptores olfativos para expressão. Detecção de odorantes inicia por ligação a um receptor olfactivo 2, que, em seguida, activa adenilil ciclase do tipo III (ACIII) 3 através da proteína G específica olfactiva Gu olf 4 odorante. O aumento resultando em monofosfato de adenosina cíclico (cAMP) abre uma cíclico (CNG), canal de cátions não seletivos levando a influxo de Ca 2+ e Na +, e, posteriormente, Ca 2+ fechado de nucleotídeo influxo leva à abertura de um Cl Ca 2+ ativado - canal 5,6. O resultante exterior Cl - fluxo é facilitada por uma alta Cl intracelular - concentração mantida constante por Cl - absorção, provavelmente através de Na + / K + / Cl - NKCC1 co-transportador, oCl - / HCO3 - trocador SLC4A1, e transportadores ainda a ser identificados talvez adicionais 6-8. Neurónios olfactivos bipolares têm axónios, não ramificados individuais que se projectam directamente para o bolbo olfactivo e um dendrito que se estende para a superfície do epitélio e termina como um compartimento especializado, o botão dendrítica. A partir deste botão, 10-30 cílios, que pode atingir um comprimento de até 50-60 mm, emanam no muco que cobre a superfície epitelial 9. As proteínas da cascata de transdução de sinal canónico estão principalmente localizados na membrana destas cílios. O aumento da superfície do epitélio sensorial amplifica a capacidade de detectar odorantes. Devido à densidade de neurônios sensoriais, os cílios se estende desde maçanetas dendríticas vizinhos se misturam. Este entrelaçamento resulta numa mistura aleatória dos cílios de diferentes neurónios, que expressam diferentes tipos de receptores olfactivos, na superfície do epitélio. A célula de detecção ealocação ular de proteínas ciliares que estão presentes em apenas um subconjunto de neurônios sensoriais, portanto, difícil de criosecções. Além disso, a localização precisa de tais proteínas ao longo dos cílios é quase impossível, visto que criocortes são tipicamente mais fina do que o comprimento médio dos cílios. Para ativar a investigação da ciliar localização de proteínas de membrana até agora descaracterizados em neurônios olfativos, otimizamos um en face preparação técnica que permite a análise detalhada de localização de proteínas em cílios. Resumidamente, o rato é sacrificado ea cabeça dividida perto da linha média. Cornetos nasais, e os ossos frontais são removidos para expor o septo. O septo com a parte olfativa do epitélio de revestimento é solto por cortar todas as conexões para a cavidade nasal. Depois de colocar o septo numa placa de petri cheia com solução de Ringer, o epitélio é descascada und transferido para uma lâmina de vidro revestido. Após uma breve FIXATion passo, os procedimentos imunocoloração pode ser realizada se a manipulação é o mais suave possível para evitar danos do tecido frágil. Nós demonstramos a resolução alcançável através da comparação da coloração de duas proteínas de membrana em diferentes cílios olfactiva em criocortes clássicos e na preparação cara en descrito.

<table><tbody><tr><td>Tesoura de mola</td><td></td><td></td><td>ponta reta, vários fornecedores</td></tr><tr><td>Tesoura</td><td></td><td></td> cirúrgica <td>ponta afiada e romba, vários fornecedores</td></tr><tr>Pontas curvas de<td>pinça</td><td></td><td></td> fina<td>, Dumont # 7, vários fornecedores</td></tr><tr><td>Lâmina</td><td></td><td></td> de barbear <td>extra fina, vários fornecedores</td></tr><tr><td>Binóculo com iluminação</td><td></td><td></td><td>vários fornecedores, Stemi 2000-C, placa</td></tr><tr><td></td><td></td> de<td>Petri</td> Zeiss <td>vários fornecedores</td></tr><tr><td>Caneta bloqueadora de líquidos</td><td>Science Services</td><td>N71310</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas revestidas de polisina</td><td>Thermo Scientific</td><td>J2800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio confocal</td><td>Leica Microsystems</td><td>TCS SPE</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo primário de cabra anti-Kirrel2</td><td>R& D Systems</td><td>AF2930</td><td>1:200</td></tr><tr><td>anticorpo primário Rabbit anti-mOR-EG</td><td>Baumgart et al., 2014</td><td></td><td>1:200</td></tr><tr><td>anticorpos secundários</td><td>Life Technologies</td><td>A21206, A11057</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Meio de montagem, reagente antidesbotamento ProLong Gold</td><td>Life Technologies</td><td>P36930</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Sigma</td><td>441244</td><td>tóxico, funciona sob a coifa</td></tr></tbody></table>

monte todo rotulagem de cilia na olfativo sistema de ratos principal

Whole Mount Labeling of Cilia in the Main Olfactory System of Mice

O sistema olfativo de camundongo compreende de 6 a 10 milhões de neurônios sensoriais olfativos no epitélio que reveste a cavidade nasal. Os neurônios olfativos estendem um único dendrito até a superfície do epitélio, terminando em uma estrutura chamada botão dendrítico. Os cílios emanam desse botão para o muco que cobre a superfície epitelial. As proteínas da cascata de transdução de sinal olfatório estão localizadas principalmente na membrana ciliar, estando em contato direto com substâncias voláteis no ambiente. Para uma compreensão detalhada da transdução de sinal olfativo, um aspecto importante é a análise morfológica exata da distribuição da proteína de sinalização. Usando abordagens microscópicas de luz em criossecções convencionais, a localização de proteínas em cílios olfatórios é difícil de determinar devido à densidade das estruturas ciliares. Para superar esse problema, otimizamos uma abordagem para a marcação de cílios em toda a montagem, levando a uma melhor visualização de sua morfologia e à distribuição de proteínas de sinalização. Demonstramos o poder dessa abordagem comparando a marcação de criossecção de montagem inteira e convencional de Kirrel2. Sabe-se que esta molécula de adesão guiada por axônio se localiza em um subconjunto de neurônios sensoriais e seus axônios de maneira dependente da atividade. A marcação de cílios de montagem inteira revelou uma imagem adicional e nova da localização dessa proteína.

Epitélio olfactivo en preparações cara pode ser utilizado para investigar a localização de proteínas nos cílios dos neurónios sensoriais, o que permite a investigação aprofundada das proteínas cuja localização é claro após análise de criocortes. Este problema pode ser exemplificado no caso da coloração de proteína para Kin IRRE-like 2 (Kirrel2). Kirrel2 (também chamado Neph3) é um membro da superfamília de imunoglobulina (Ig) de proteínas e funções da membrana como uma proteína de adesão homofílica. Fo...

Os cílios dos neurônios sensoriais olfatórios contêm proteínas da cascata de transdução de sinal, mas uma análise espacial detalhada de sua distribuição é difícil em criossecções. Descrevemos aqui uma abordagem otimizada para marcação de montagem inteira e visualização em face de proteínas ciliares.

Monte todo Rotulagem de Cilia na Olfativo Sistema de Ratos Principal

The mouse olfactory system comprises 6-10 million olfactory sensory neurons in the epithelium lining the nasal cavity. Olfactory neurons extend a single ...

O objetivo geral deste procedimento é fornecer um método para a visualização direta de proteínas ciliares no sistema olfativo de camundongos. Isso é realizado primeiramente dividindo um crânio de camundongo paralelamente à linha da sutura. O segundo passo consiste em expor cuidadosamente o epitélio olfativo que recobre o septo nasal.Em seguida, o epitélio olfativo é isolado de todas as conexões com a cabeça e transferido para uma lâmina de vidro adesiva. O passo final consiste em uma breve fixação e manipulação cuidadosa durante a coloração do tecido. Por fim, a microscopia de imunofluorescência é utilizada para demonstrar a localização proteica nos cílios olfativos.A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como cortes criostáticos, é a preparação rápida. Forneça detalhes adicionais ao analisar proteínas nos cílios de neurônios sensoriais olfativos. A demonstração visual deste método é fundamental, pois as etapas de dissecação são difíceis de aprender, já que as estruturas ciliares podem ser facilmente danificadas, levando a resultados inconsistentes.Comece com a cabeça de camundongo recém-decapitada. Inicie a dissecação removendo a pele para expor o crâni

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Neurociência

Este artigo apresenta os protocolos de sinais ópticos intrínsecos e flavoproteínas imagem sinais autofluorescência para mapear odor evocadas atividades na superfície do bulbo olfatório em ratos.

Atividades de imagem Odor-Evocados no bulbo olfatório do rato usando reflectância óptica e Sinais de autofluorescência

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Registro perfurado de neurônios sensoriais olfativos em camundongos

Um método eficaz para Desossa manual Prepare Intacto Rato tecido nasal com organização anatômica preservada

Aqui descrevemos o processo de imunomarcação de montagem total de antenas de Drosophila, o que nos permite entender melhor os mecanismos moleculares envolvidos na diversificação de neurônios receptores olfativos (ORN)s.

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Perfurado gravação patch-clamp de rato Olfactory neurônios sensoriais na Intact neuroepitélio: Análise Funcional do Neurônios Expressando uma Odorant Receptor Identificados

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