Name: 인간 백신 닭 계란에 인플루엔자 바이러스 전파 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: 학습하세요 닭 계란을 이용한 인플루엔자 A 바이러스 대량 생산 방법을. 고역가 바이러스를 얻어 백신 개발 및 바이러스학 연구에 활용할 수 있습니다.

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본 연구는 NIH 보조금 HL120947(P.C.), HL103868(P.C.) 및 미국 심장 협회 보조금(P.C.)의 지원을 받았습니다.

일반 발언 : 주 멸균 조건에서 계란의 조작과 관련된 모든 절차를 수행하고 멸균 기술 규격 제품을 사용한다. 70 % 에탄올로 모든 장비를 사용하기 전에 사전 깨끗한. 일반적으로, 인플루엔자 바이러스 접종 수확 BSL -2- 실험실에서 수행되어야한다. 그러나,이 프로토콜을 전파하는 데 사용되는 경우 훨씬 더 병원성 인플루엔자 바이러스 (예를 들어, 유행성 및 사전 유행성 균주, 가금류 및 가축, 고병원성 조류 인플루엔자 균주, 1918 년 H1N1 균주에 위험을 초래할 균주), 높은 바이오 안전성 수준 어떤 경우에는, 생물 안전주의 사항과 권한이 필요합니다. 지역 기관 바이오 안전성위원회는 인플루엔자 바이러스와 관련된 모든 연구를 승인해야합니다. 예방 접종에 대한 계란 1. 준비 <ol><li> 적합한 공급 업체에서 혈청 무균 (SPF) 갓 수정 된 조류의 알을 얻습니다. 일반적으로 닭고기 달걀 사용된다. 계란은 우리를해야한다바로 도착 에디션. </li><li> 자동 계란 터너와 가습 계란 인큐베이터에 도착 장소 계란은 계란을 정규적으로 회전시. 자동 계란 터너를 사용할 수없는 경우, 수동으로 적어도 2 ~ 3 회 하루 (장갑을 착용하고 가능한 한 무균 모든 항목을 유지하는 확인) 계란을 회전 할 수 있습니다. </li><li> 37 ° C와 10-11일에 대한 55~60% 습도에서 알을 품어. </li></ol> 2. 계란 캔들링 <ol><li> 배양 7, 8 일 후에 캔들링에 의해 불임 달걀을 확인하는 어두운 방에서 밝은 빛에 계란을 검사 할 수 달걀 캔 들러를 사용합니다. <ol><li> 70 % 에탄올로 계란 캔 들러를 닦습니다. 종종 장갑을 변경하고 병원체에 의한 오염의 위험을 최소화하기 위해 70 % 에탄올로 소독. </li><li> 인큐베이터에서 계란을 제거하고 빈 달걀 종이팩에 배치합니다. </li><li> 실내 조명을 끄고. </li><li> 캔 들러에 대해 한 번에 각 계란 하나의 큰 끝을 잡고. </li><li> determin하기 위해 달걀을 준수전자는 비옥 한 또는 불임 인 경우. 참고 : 콩 모양 배에 이르는 얇은 혈관이 명확하게 볼 수 있어야합니다. 미 수정 달걀은 볼 달걀 노른자와 작은 핏자국으로 표시됩니다. </li></ol></li><li> 미 수정있는 계란을 폐기하고, 인큐베이터 가능한 계란을 반환합니다. 30 분 동안 인큐베이터 밖에서 알을 두지 마십시오. 계란의 상태를 확인할 수없는 경우이를 표시하고 나중에 관찰. </li></ol> 바이러스 접종 3. 준비 <ol><li> 10 mM의 HEPES (PH 7.4)를 포함 멸균 PBS에서 104 PFU / ㎖ - 10 3 인플루엔자 바이러스 주식을 희석. 중요한 단계 : 즉시 사용하기 전에 바이러스 주식을 희석하고 얼음에 모든 시간을 희석 바이러스를 유지합니다. </li></ol> 뇨 경로를 통해 4. 인플루엔자 바이러스 예방 접종 <ol><li> 바이러스 접종 (10 일 또는 11)의 날에 다시 계란을 촛불과 죽은 배아를 제거 할 수 있습니다. 살아있는 배아를 구별계란 내부 이동을 찾고. </li><li> 인큐베이터에서 세 알을 제거하고 공기 주머니 위로 별도의 홀더에 계란을 마련. </li><li> 영구 마커와 계란의 공기 공간을 표시합니다. </li><li> 70 % 에탄올로 공기 공간 위에 달걀 껍질을 씻으십시오. </li><li> 계란 판지 및 바이오 안전성 후드 (BSL-2)에 공기 공간을 최대로 계란을 넣습니다. </li><li> 각 계란의 공기 주머니를 통해 껍질에 작은 구멍을 주먹으로 멸균 18G 바늘을 사용합니다. 배아 또는 노른자를 찔러 방지하기 위해 너무 깊이 바늘을 삽입하지 않도록주의하십시오. </li><li> 멸균 1 ML의 주사기에 희석 된 인플루엔자 바이러스를 그려 22G 바늘을 연결합니다. </li><li> 조심스럽게 뇨 공동으로 45 ° 각도로 바늘과 주사기를 진행합니다. </li><li> 희석 인플루엔자 바이러스 0.2ml를 주입한다. </li><li> 다른 두 계란 주사를 반복 한 다음 주사기와 바늘을 폐기​​합니다. </li><li> 글루건 (또는 녹은 파라핀 왁스)에서 접착제의 드롭 구멍을 밀봉합니다. B전자 접착제 계란 내부에 누출되지 않도록주의. </li><li> 공기 공간이 위쪽으로 지적와 계란 인큐베이터에 계란을 다시 배치합니다. </li><li> 반복 4.2 단계 - 4.12 모든 계란 접종 때까지. </li></ol> 5. 보육 시간 <ol><li> 37 ° C와 ~ 60 %의 습도에서 끄지 않고 감염된 계란을 품어. </li><li> 인플루엔자 바이러스 유형에 따라 최적의 배양 시간을 선택한다. 48 시간 동안 인플루엔자를 품어; 72 시간 동안 인플루엔자 B와 C를 품어. </li></ol> 6. 인플루엔자 바이러스 수확 <ol><li> 인큐베이션 기간 후, 배아를 죽이고 피 감염된 막액 오염의 위험을 최소화하기 위해 혈관을 수축 4 시간 (또는 O / N) 이상 동안 39 ° C에서 계란을 냉각. 수율을 감소 바이러스, 흡수로부터 적혈구를 방지하기 위해 이렇게. 또한, 냉각 계란 30 분 -20 ° C에서; 그러나 혈액이 오염의 위험을 증가시킨다. </li><li> 계란이 충분히 냉각 된 후에, 바이오 안전성 후드에 계란을 전송합니다. 공기 주머니가 위로 향하게 회사 홀더에 달걀을 놓습니다. 70 % 에탄올로 달걀 표면을 청소합니다. </li><li> 공기 주머니 위에 달걀 껍질을 열 멸균 가위를 사용합니다. 융모 막을 파괴하지 않도록주의하면서 공기 주머니 주위에 껍질을 제거합니다. </li><li> 멸균 무딘 집게로 융모 막을 엽니 다. 조심스럽게 배아와 작은 주걱이나 숟가락으로 난황을 옆으로 이동합니다. 노른자를 파열되지 않도록주의하십시오. </li><li> 1 에펜 도르프 피펫을 사용하여 조심스럽게 막액를 수집합니다. 필요한 경우, 옆으로 약간 많은 유체 가능한 수집 계란을 기울입니다. </li><li> 50 ㎖ 플라스틱 원뿔 관에 모든 계란에서 막액을 결합합니다. 바이러스 수확하는 동안 항상 얼음에 튜브를 유지합니다. 하나의 계란 생산량 5 - 약간 노란 유체 10 ㎖. </li><li> 4에서 10 분 동안 1,000 XG에서 바이러스 - 함유 막액 스핀6; C 파편 펠렛합니다. 새로운 50 ㎖ 튜브에 맑은 액체를 이동시켜 얼음에 보관. BSL-2 폐기물 용기에 달걀을 폐기하십시오. </li></ol> 7. 저장 <ol><li> 즉시 뇨 명확히 유체 (예를 들어, 50, 100 또는 500 UL 분량 씩) 나누어지는 스냅 동결을 액체 질소에. 냉동 바이러스 주식 장기 저장을 위해 -80 ° C 냉장고에 전송합니다. </li></ol>

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인플루엔자는 질병의 큰 부담을 글로벌 초래하고 작업 폐 손상 (7)의 병인을 이해로 계속된다. 이 치명적인 질병의 촉진 연구, 다양한 방법 인플루엔자 바이러스 (6)을 전파하기 위해 개발되었습니다. 여기서는 닭고기 계란 인플루엔자 바이러스를 생산하는 방법을 설명한다. 이 방법의 장점은 높은 재현성 있다는 종종 시험 관내 연구에 필요한 높은 역가 인플루엔자 바이러스 주식, 다량 초래한다. 대부분의 기관은 최소한의 초기 비용으로 신속하고 쉽게이 프로토콜을 개발할 수있을 것이다. 우리는 자동 터너와 계란 인큐베이터에 투자를하는 것이 좋지만,이 프로토콜은 장비없이 완료 될 수 있지만, 더 힘든 것입니다. 우리는 또한 계란의 일관성과 불임을 보장하기 위해 수정란의 구입 상업 시장 조사 업체를 사용하는 것이 좋습니다. LABORAT의 사무실동물 애호 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 보건 서비스 (PHS) 정책의 모리 동물 복지 ...

인플루엔자는 인간의 건강에 큰 위협이되고 있습니다. 그것은 큰 글로벌 부담이 매년 전세계에서 1 500000 사망까지 일으키는 잠재적으로 치명적인 호흡기 질환이다. 인플루엔자 바이러스는 가족 오르 쏘 믹소 바이러스과 (orthomixoviridae)에있는 자신의 게놈 1,2 8 음의 감각 단일 가닥 RNA를 수행한다. 바이러스 게놈의 높은 가변성 (즉, 항원 &quot;드리프트&quot;)는 장기 면역을 방지 할 수 있습니다. 또한, 인플루엔자 항 바이러스제 3 더욱 강하다. 2009 H1N1 인플루엔자 대유행 인플루엔자 질병 (유행성 변형, 항 바이러스 성, 지연 백신 생산)과 관련된 모든 어려운 문제를 강조했다. 백신 제제는 대부분 병원성 인플루엔자 균주 4 (H1N1, H3N2 인플루엔자 B 각각 하나씩)에 대한 세계 보건기구 (WHO)에 의해 매년 결정된다. 이 방법은 예측 인플루엔자 균주를 기반으로하기 때문에들, 병원성 균주는 때때로 잘못 파악하고 백신 유효성이 크게 저하된다. 더욱이, 신규 한 인플루엔자 균주의 출현은이 전염병을 일으키는 이러한 예방 프로그램을 회피 할 수있다. 범용 인플루엔자 백신의 생성은 5 애매하고있다. 따라서 연구는 폐 손상의 기전을 이해하기에 계속해야합니다. 시설 실험실 연구에, 여러 가지 방법이 바이러스 분리 및 전파 (6)을 위해 개발되었다. 인간 인플루엔자 바이러스는 포유 동물 세포의 다양한 기판들에서 증폭 될 수있다. 그러나, 대량으로 생성하는 높은 역가의 바이러스는 가장 유정란에 달성된다. 다음 프로토콜은 인플루엔자에 대한 기존의 바이러스 주식에서 바이러스 전파 및 저장 기술에 대해 설명합니다.

<table><tbody><tr><td>인산염 완충 식염수 (PBS)</td><td>Cellgro&nbsp;</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>혈청 병원균 무첨가 (SPF) 수정 닭 달걀&nbsp;</td><td>VALO BioMedia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>가습 계란 인큐베이터&nbsp;</td><td>FARM iNNOVATORS</td><td>모델 2100</td><td></td></tr><tr><td>자동 계란 터너</td><td>FARM iNNOVATORS</td><td>모델 3200</td><td></td></tr><tr><td>계란 캔들러</td><td>FARM iNNOVATORS</td><td>모델 3300&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>1ml 주사기</td><td>BD Bioscience</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>18G 바늘</td><td>BD Bioscience</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td>20G / 22G 바늘</td><td>BD Bioscience</td><td>305176 / 305156</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol>99.5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>459844</td> 물 접착제 총<td>을 사용하여 70%로 희석</td></tr><tr><td>"Ad tech Hi Temp 프로젝트 프로"</td><td>광고 기술, 접착 기술, Inc.</td><td>모델 1105</td><td></td></tr><tr><td>접착제 "광고 기술 MINI SIZE, Multi Temp"</td><td>광고 기술, 접착 기술, Inc.</td><td>220-34ZIP30</td><td></td></tr><tr><td>MDCK 세포</td><td>ATCC</td><td>CRL-2935</td><td></td></tr><tr><td>세척 풀링 칠면조 적혈구, 10 %</td> <td>Lampire 생물학 연구소</td><td>724908</td><td></td></tr></tbody></table>

인간 백신 닭 계란에 인플루엔자 바이러스 전파

Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs

인플루엔자 감염은 약 36,000 명이 사망하고 미국에서 20 만 명 이상의 입원 매년와 연결되어 있습니다. 돌연변이 다시 구색 인한 새로운 인플루엔자 바이러스 균주의 연속 출현 바이러스의 제어를 복잡하게하고 신규 약물과 백신의 개발을 필요로 영구. 인플루엔자의 실험실 기반의 연구는 바이러스의 전파에 대한 안정적이고 비용 효율적인 방법이 필요합니다. 여기에, 포괄적 인 프로토콜은 지속적으로 높은 역가의 바이러스 주식을 산출 비옥 한 닭 계란에 인플루엔자 바이러스 전파, 제공됩니다. 11 일 - 간단히 말해, 혈청 무균 (SPF) 수정 된 닭고기 달걀은 37 ° C와 10 55~60% 습도에서 배양된다. 이 기간 동안, 배아 발달 쉽게 알 캔 들러를 사용하여 모니터 할 수있다. 바이러스 접종은 바늘을 사용하여 공동 내로 뇨 바이러스 스톡의 주사에 의해 수행된다. 37 ° C에서 배양 2 일 후, 계란은4 ° C에서 적어도 4 시간 동안 냉장. 공기 주머니와 상기 멤브레인 융모 껍질을주의 깊게 개방하고, 바이러스를 함유 막액 수확된다. 유체를 원심 분리에 의해 먼지로부터 클리어 분주 장기 저장에 대해 -80 ° C에 전달된다. 다량 보통이 프로토콜에 의해 달성되고 높은 바이러스 역가 (바이러스 - 함유 달걀 당 유체를 5-10 ml)을 대량으로 요구하는 시험 관내 연구를 위해, 특히 바이러스 제제 우리 유리한 방법 계란의 사용량을 만들었다 바이러스의 것과 동일한 바이러스 주식의 높은 복용량이 필요하다.

여러 방법은 인플루엔자 바이러스 역가를 위해 개발되었다. 적절한 방법을 선택하는 하나의 고려 사항은 일부 가능한 비리을 평가하는 관계없이 다른 사람이 감염을 기반으로하는 반면 생존 능력 (예를 들어, 헤 마글 루티 닌 분석)의 총 입자를 결정하는 것입니다 (예를 들면, 상패 분석) 6. 여기서, 마우스 구성된 인플루엔자 바이러스 (A는 / PR / 34분의 8) 접종 닭고기 계란에서 수집 막액의 바이러스 역가는 플라크 분석 (도 1)과 혈구 응집 분석 (도 2)에 의해 결정 하였다. 인플루엔자 바이러스는 감염 세포의 단층에 플라크 형성을 초래할 세포 변성 효과 (세포 용해의 원형 영역)를 야기한다. 플라크 크리스탈 바이올렛으로 세포를 염색하여 가시화하고, 65 플라크 바이러스 희석 10-12 (도 1)와 함께 웰에 ...

수정 가능한 닭고기 달걀은 높은 수율의 바이러스를 증명하는 편리하고 비용 효율적인 시스템을 제공하기 때문에 많은 양의 인간 인플루엔자 A 바이러스를 생산하는 데 널리 사용됩니다.

Influenza infection is associated with about 36,000 deaths and more than 200,000 hospitalizations every year in the United States. The continuous ...

이 절차의 전반적인 목표는 비용 효율적인 시스템에서 고역가의 인플루엔자 바이러스를 대량으로 생산하는 것입니다. 이를 위해 우선 혈청 병원균이 없는 갓 수정된로 계란을 확보합니다. 두 번째 단계에서는 알란 낭(allantoic root) 경로를 통해 계란에 인플루엔자 바이러스를 감염시킵니다.48시간 후, 바이러스가 포함된 Alan Toic 액체를 수확하고 바이러스를 액체 질소에 급속 냉동합니다. 최종적으로, 수집된 Alan Toic 액체의 바이러스 역가에 미치는 영향을 결정하기 위해 플라크 분석 및 헤마글루티닌 분석을 수행할 수 있습니다. 수확 단계는 매우 민감하며 계란의 세심한 취급과 해부학적 구조에 대한 충분한 지식이 필요하므로, 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다.절차를 시작하기 전, 적절한 공급처로부터 혈청 병원균이 없는 신선한 수정란(avian eggs)을 확보하십시오. 도착 즉시 계란을 습도가 조절되는 부화기에 넣고, 자동 전란기를 사용하여 37°C의 온도와 55~60%의 습도에서 10~11일 동안 정기적으로 회전시키며 부화시킵니다. 7~8일간의 부화 후, 70% ethanol로 소독한 장갑을 착용하십시오.에탄올로 검란기를 닦고 배양기에서 달걀을 꺼내 빈 달걀 판으로 옮깁니다. 그런 다음 조명을 끄고 달걀의 뭉툭한 끝부분을 하나씩 검란기에 갖다 댑니다. 수정란인 경우, 강낭콩 모양의 배아로 이어지는 가느다란 혈관이 분명하게 보여야 합니다.난자가 수정되지 않은 경우, 가시적인 난황과 함께 작은 혈반이 관찰됩니다. 이때 수정되지 않은 난자는 폐기하고, 생존 가능한 난자만 인큐베이터로 되돌립니다. 난자의 상태를 확인할 수 없는 경우, 수정 후 10일 또는 11일째에 추후 관찰할 수 있도록 표시해 둡니다. 사용 직전에, sterile PBS에 HEPES를 보충한 용액을 사용하여 인플루엔자 A 바이러스 스톡을 1 × 10³ ~ 10⁴ PFU/mL 농도로 희석하여 얼음에 둡니다.그런 다음 각 알을 다시 검란하여 움직임이 없는 죽은 배아를 제거합니다. 다음으로 배양기에서 알 세 개를 꺼내 별도의 홀더에 배치합니다. 기낭이 위로 향하게 한 상태에서 유성펜으로 알의 기실 부분을 표시합니다.그런 다음 기실 상부 영역을 70% ethanol로 세척하고, BSL 2 생물안전 작업대 내에서 알을 기실이 위로 향하게 하여 계란판으로 옮깁니다. 이제 멸균된 18 gauge 바늘을 사용하여 각 알의 기실 위쪽 껍질에 작은 구멍을 뚫습니다. 이때 배아나 노른자를 찌르지 않도록 바늘을 너무 깊게 삽입하지 않도록 주의하십시오.그 다음, 희석된 인플루엔자 바이러스를 멸균된 1 mL 주사기에 흡입합니다. 22 gauge 바늘을 장착하고, 첫 번째 계란의 Allantoic cavity에 바늘을 45도 각도로 조심스럽게 삽입합니다. 희석된 바이러스 0.2 mL를 계란에 주입하고, 나머지 두 개의 계란에도 동일하게 주입한 후 주사기와 바늘을 폐기합니다. 각 주입 구멍은 글루건의 접착제 한 방울로 밀봉합니다.접착제가 달걀 내부로 새어 들어가지 않도록 주의한 다음, 달걀을 다시 배양기에 넣습니다. 모든 달걀의 접종이 완료되면, 인플루엔자 바이러스 유형에 따른 최적 배양 시간 동안 37°C, 습도 60% 조건에서 전란 없이 감염된 달걀을 배양합니다.배양 기간이 끝나면, 배아를 사멸시키고 혈관을 수축시키기 위해 알을 4 °C에서 최소 4시간 동안 냉각합니다. 알이 충분히 냉각되면, 생물안전 작업대(biosafety hood)와 고정 홀더로 옮긴 후 알 표면을 70% ethanol로 세척합니다.그 다음, 멸균 가위로 첫 번째 알의 기낭 위쪽 껍질을 엽니다. 기낭 주변의 껍질을 제거하되, 융모막(chorioallantoic membrane)이 손상되지 않도록 주의하십시오.그 다음, 멸균된 둔탁한 핀셋을 사용하여 요막(chorioallantoic membrane)을 절개하고, 작은 스패튤라나 스푼을 이용해 배아와 난황낭을 조심스럽게 옆으로 밀어내되 난황이 터지지 않도록 주의하십시오. 이어서 1 mL 피펫을 사용하여 요막액을 조심스럽게 수집하며, 필요한 경우 알을 옆으로 기울여 가능한 한 많은 액체를 수집하십시오. 알 하나를 수확할 때마다 5~10 mL의 약간 황색을 띠는 액체가 수집되어야 합니다.Allantoic fluid를 얼음 위에 놓인 50 milliliter 플라스틱 원심 분리관(conical tube)에 모읍니다. 모든 액체를 수집한 후, 원심 분리를 통해 바이러스를 가라앉히고 맑은 상층액을 얼음 위에 놓인 새로운 50 milliliter 튜브로 옮깁니다. 마지막으로, 유정란은 BSL 2 폐기물 용기에 버리고 정제된 allantoic fluid를 즉시 보관합니다.그런 다음 바이러스를 액체 질소로 급속 동결한 후, 동결된 스톡을 -80 °C 냉동고에 보관합니다. 장기 보관을 위해, 인플루엔자 바이러스 감염은 세포 단층에 그물 모양의 세포 구역 또는 플라크(plaque)가 형성되는 세포병변효과(cytopathic effect)를 유발합니다. 본 실험에서는 크리스탈 바이올렛으로 세포를 염색하여 플라크를 시각화하였으며, 500 µL의 희석된 바이러스 스톡을 세포에 배양한 결과 1 × 10⁻¹² 희석 배율의 웰에서 65개의 플라크가 계수되었습니다.본 실험에서 최종 역가는 1.3 × 10¹⁴ PFU/mL였습니다. 헤마글루티닌 억제 시험(Hemagglutination assay)은 적혈구 표면에 부착하는 바이러스의 능력을 기반으로 인플루엔자 바이러스의 역가를 측정하는 방법입니다. 관찰된 바와 같이, 바이러스 현탁액은 적혈구를 응집시켜 적혈구가 현탁액에서 가라앉는 것을 방지합니다.50 µL의 2⁻¹⁰ 희석 배수 바이러스에서 명확한 음성 결과가 관찰되었습니다. 따라서 최종 역가는 mL당 2.1 × 10⁴ HAU입니다. 이 영상을 시청한 후, 귀하는 닭 달걀에 접종하여 인플루엔자 바이러스를 증식시키고 바이러스가 포함된 Allantoic fluid를 수확하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

플라스미드 DNA의 인플루엔자 바이러스의 구조는 독감 연구자 인플루엔자 바이러스의 생물학의 여러 측면을 연구하는 재조합 바이러스를 생성하고, 잠재적인 벡터 또는 백신으로 사용할 수있는 기본적인 필수 실험 기법입니다.

플라스미드 DNA의 재조합 독감 바이러스의 생성

독감 바이러스에 동시 감염 asymptomatic 동안 침투 폐렴 구균 질환의 유도에 연루 요인 중...

사이 Synergism을 맡은 이후로 발광 생물 이미징을 사용하여 연쇄상 구균 pneumoniae</em유아 마우스에서>와 인플루엔자 바이러스

Source: Brauer, R. et al., Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the synthesis and harvest of the influenza virus in fertilized chicken eggs. The virus is inoculated into the allantoic cavity, where it replicates in epithelial cells and buds into the allantoic fluid, which is then collected and stored for downstream applications.

Propagation and Harvest of Influenza Virus from a Fertilized Chicken Egg

이 비디오는 중화 인플루엔자 바이러스 단클론 항체의 탈출 변종을 생성하는 기술을 보여줍니다. 항체 중화 바이러스 현탁액을 배아 계란에 주입하여 탈출 변이체를 선택적으로 증식시킵니다. 그 결과 주로 탈출 변이체의 바이러스 집단이 발생하며, 이는 Hemagglutination 분석을 통해 확인되었습니다.

중화 항체에 대한 인플루엔자 바이러스 탈출 변이의 생성

이 비디오는 한랭 적응 재조합 인플루엔자 바이러스를 만드는 방법을 보여줍니다. 이 연구는 인간 세포를 양방향 플라스미드로 형질주입한 후 저온 배양에서 배양하여 백신 생산에 적합한 바이러스를 생성하며, 따뜻한 조건에서 복제가 감소하는 것이 특징입니다.

백신을 위한 재조합 생독감 인플루엔자 바이러스 생성

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인간 인플루엔자 바이러스 감염의 Zebrafish의 모델을 사용하여 항 바이러스 약품을 화면 및 호스트 면역 세포 반응의 특성을

여기서, 우리는 포자조이트 또는 2세대 메로조이트에 의한 닭에이메리아 기생충의 안정적인 형질변환을 달성할 수 있는 방법을 제공했다. 이종 항원 유전자를 발현하는 유전자 변형 에이메리안 기생충은 백신 전달 차량으로 사용될 수 있었다.

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오보에서 닭 배아에 혈관 내 주사

여기에서 우리는 고역가 재조합 뉴캐슬병 바이러스의 생산, 정제 및 정량화를 위한 상세한 절차를 제공한다. 이 프로토콜은 지속적으로 &gt; 6 × 10,9 플라크 형성 단위 / mL를 산출하여 생체 내 동물 연구에 적합한 바이러스 양을 제공합니다. 생체내 안전성을 보장하기 위한 추가의 품질 관리 분석법이 기재되어 있다.

Allantoic Fluid로부터의 고역가 재조합 뉴캐슬병 바이러스의 생산

이 방법은 닭 배아를 박테리아 병원균 L. monocytogenes를 생존 가능하지만 배양할 수 없는(VBNC) 상태에서 되살리고 박테리아 휴면 메커니즘에 대한 이해에 잠재적으로 더 사용할 수 있는 간단하고 비용 효율적인 생체 내 모델로 보여줍니다.

생존 가능하지만 배양할 수 없는 병원체를 되살리기 위한 생체 내 모델로서의 닭 배아

학습하세요 닭 계란을 이용한 인플루엔자 A 바이러스 대량 생산 방법을. 고역가 바이러스를 얻어 백신 개발 및 바이러스학 연구에 활용할 수 있습니다.

인간 백신 닭 계란에 인플루엔자 바이러스 전파

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