Name: Medição do volume Pressão Loops no mouse (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Aprenda a medir loops pressão-volume no coração de camundongos para avaliar função cardíaca contrátil. Este método detalhado permite caracterizar mudanças fisiológicas causadas por manipulações genéticas em modelos murinos.

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O autor gostaria de reconhecer financiamento do NHLBI (K08 HL102066 e R01 HL114832).

<ol><li>Mozaffarian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2015+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2015 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 131 (4), e29-e322 (2015).</li>
<li>Katz, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+altered+inotropy+and+lusitropy+on+ventricular+pressure-volume+loops%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Influence of altered inotropy and lusitropy on ventricular pressure-volume loops.</a> J Am Coll Cardiol. 11 (2), 438-445 (1988).</li>
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<li>Georgakopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+murine+left+ventricular+pressure-volume+relations+by+miniaturized+conductance+micromanometry%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">In vivo murine left ventricular pressure-volume relations by miniaturized conductance micromanometry.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 274 (4 Pt 2), H1416-H1422 (1998).</li>
<li>Kass, D. A., Hare, J. M., Georgakopoulos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cardiac+function%3A+a+cautionary+tail%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Murine cardiac function: a cautionary tail.</a> Circ Res. 82 (4), 519-522 (1998).</li>
<li>Feldman, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+a+mouse+conductance+system+to+determine+LV+volume%3A+comparison+to+echocardiography+and+crystals%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Validation of a mouse conductance system to determine LV volume: comparison to echocardiography and crystals.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 279 (4), H1698-H1707 (2000).</li>
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<li>Kutty, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+admittance+computed+left+ventricular+volumes+against+real-time+three-dimensional+echocardiography+in+the+porcine+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Validation of admittance computed left ventricular volumes against real-time three-dimensional echocardiography in the porcine heart.</a> Exp Physiol. 98 (6), 1092-1101 (2013).</li>
<li>Kottam, A., Dubois, J., McElligott, A., Henderson, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approach+to+admittance+to+volume+conversion+for+ventricular+volume+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22Conf+Proc+IEEE+Eng+Med+Biol+Soc%22%5BJournal%5D)">Novel approach to admittance to volume conversion for ventricular volume measurement.</a> Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 2514-2517 (2011).</li>
<li>Meyers, T. A., Townsend, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+right+ventricular+fibrosis+and+reduction+in+biventricular+cardiac+reserve+in+the+dystrophin-deficient+mdx+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Early right ventricular fibrosis and reduction in biventricular cardiac reserve in the dystrophin-deficient mdx heart.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 308 (4), H303-H315 (2015).</li>
<li>Townsend, D., Yasuda, S., Li, S., Chamberlain, J. S., Metzger, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergent+dilated+cardiomyopathy+caused+by+targeted+repair+of+dystrophic+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Emergent dilated cardiomyopathy caused by targeted repair of dystrophic skeletal muscle.</a> Mol Ther. 16 (5), 832-835 (2008).</li>
<li>Townsend, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+administration+of+micro-dystrophin+restores+cardiac+geometry+and+prevents+dobutamine-induced+cardiac+pump+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic administration of micro-dystrophin restores cardiac geometry and prevents dobutamine-induced cardiac pump failure.</a> Mol Ther. 15 (6), 1086-1092 (2007).</li>
<li>Strakova, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrobrevin+increases+dystrophin%27s+binding+to+the+dystrophin-glycoprotein+complex+and+provides+protection+during+cardiac+stress%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Dystrobrevin increases dystrophin's binding to the dystrophin-glycoprotein complex and provides protection during cardiac stress.</a> J Mol Cell Cardiol. 76, 106-115 (2014).</li>
<li>Yasuda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophic+heart+failure+blocked+by+membrane+sealant+poloxamer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Dystrophic heart failure blocked by membrane sealant poloxamer.</a> Nature. 436 (7053), 1025-1029 (2005).</li>
<li>Townsend, D., Daly, M., Chamberlain, J. S., Metzger, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+dystrophin+loss+and+genetic+reconstitution+establish+a+molecular+link+between+dystrophin+and+heart+performance+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Age-dependent dystrophin loss and genetic reconstitution establish a molecular link between dystrophin and heart performance during aging.</a> Mol Ther. 19 (10), 1821-1825 (2011).</li>
<li>Townsend, D., Yasuda, S., McNally, E., Metzger, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+pathophysiological+mechanisms+of+cardiomyopathy+in+hearts+lacking+dystrophin+or+the+sarcoglycan+complex%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Distinct pathophysiological mechanisms of cardiomyopathy in hearts lacking dystrophin or the sarcoglycan complex.</a> FASEB J. 25 (9), 3106-3114 (2011).</li>
<li>Pacher, P., Nagayama, T., Mukhopadhyay, P., Bátkai, S., Kass, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cardiac+function+using+pressure-volume+conductance+catheter+technique+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Measurement of cardiac function using pressure-volume conductance catheter technique in mice and rats.</a> Nat Protoc. 3 (9), 1422-1434 (2008).</li>
<li>Zhang, B., Davis, J. P., Ziolo, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+Catheterization+in+Mice+to+Measure+the+Pressure+Volume+Relationship%3A+Investigating+the+Bowditch+Effect%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect.</a> J Vis Exp. (100), e52618-e52618 (2015).</li>
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<li>Palpant, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+disease+in+mucopolysaccharidosis+type+I+attributed+to+catecholaminergic+and+hemodynamic+deficiencies%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiac disease in mucopolysaccharidosis type I attributed to catecholaminergic and hemodynamic deficiencies.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 300 (1), H356-H365 (2011).</li>
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<li>Schmähl, D., Port, R., Wahrendorf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dose-response+study+on+urethane+carcinogenesis+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">A dose-response study on urethane carcinogenesis in rats and mice.</a> Int J Cancer. 19 (1), 77-80 (1977).</li>
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<li>Segers, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conductance+catheter-based+assessment+of+arterial+input+impedance%2C+arterial+function%2C+and+ventricular-vascular+interaction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Conductance catheter-based assessment of arterial input impedance, arterial function, and ventricular-vascular interaction in mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 288 (3), H1157-H1164 (2005).</li>
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<li>Sato, T., Shishido, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ESPVR+of+in+situ+rat+left+ventricle+shows+contractility-dependent+curvilinearity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">ESPVR of in situ rat left ventricle shows contractility-dependent curvilinearity.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 274 (5 Pt 2), H1429-H1434 (1998).</li>
<li>Sunagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+coronary+arterial+pressure+on+left+ventricular+end-systolic+pressure-volume+relation+of+isolated+canine+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of coronary arterial pressure on left ventricular end-systolic pressure-volume relation of isolated canine heart.</a> Circ Res. 50 (5), 727-734 (1982).</li>
<li>Cingolani, H. E., Pérez, N. G., Cingolani, O. H., Ennis, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Anrep+effect%3A+100+years+later%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Anrep effect: 100 years later.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 304 (2), H175-H182 (2013).</li>
<li>Baan, J., van der Velde, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+of+left+ventricular+end-systolic+pressure-volume+relation+to+type+of+loading+intervention+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Sensitivity of left ventricular end-systolic pressure-volume relation to type of loading intervention in dogs.</a> Circ Res. 62 (6), 1247-1258 (1988).</li>
<li>Rankin, J. S., Olsen, C. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+airway+pressure+on+cardiac+function+in+intact+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">The effects of airway pressure on cardiac function in intact dogs.</a> Circulation. 66 (1), 108-120 (1982).</li>
</ol>

O autor não tem nada a divulgar.

Existem três passos críticos neste processo: 1) a colocação do tubo endotraqueal e ventilação adequado, 2) a colocação do cateter IV jugular, e 3) a colocação correcta do cateter PV no ventrículo esquerdo. Determinação da taxa respiratória apropriada é uma parte importante do fornecimento de suporte ventilatório. ratinhos conscientes geralmente manter a ventilação alveolar com respirações superficiais rápidas. Em geral, os ratinhos ventilados terá volumes correntes muito maiores. Assim, é necessária uma taxa mais lenta ...

A doença cardiovascular continua a ser uma causa significativa de morbilidade e mortalidade em todo o mundo 1. Doenças do coração apresentar desafios particularmente difíceis no desenvolvimento de novas terapias. Os avanços no campo da genética para proporcionar a possibilidade de identificar uma grande variedade de potenciais contribuintes genética para o desenvolvimento de doença cardíaca. A natureza integradora do sistema cardiovascular exige que esses alvos genéticos ser validados em modelos animais intactos. Os custos de flexibilidade e baixa habitação genéticas do rato tê-lo trazido para o primeiro plano para a avaliação do papel fisiológico de um determinado gene. O pequeno tamanho do mouse apresenta alguns desafios únicos para a avaliação da função cardíaca. Existem várias modalidades que podem fornecer informações sobre a função cardíaca, mas apenas a medição simultânea da pressão ventricular e o volume permite pressão-volume (PV) análise do lacete da função ventricular. PV laços tudoOW função cardíaca a ser analisada independente da sua conexão com a vasculatura; um factor importante na determinação do papel funcional de um elemento genético particular. A avaliação de loops de pressão-volume tem sido utilizada tanto experimentalmente e clinicamente por muitos anos e extensa literatura existe sobre a análise desses conjuntos de dados 2,3. A adaptação da tecnologia de ciclo PV para o rato tem sido um importante avanço para a compreensão da fisiologia cardíaca murino 4-6. Cateter de tecnologias baseadas na ansa PV acoplar um transdutor de pressão e a utilização de condutância para estimar o volume do ventrículo. O volume ventricular é determinado por análise de alterações em um campo eléctrico gerado pelo cateter. Este método modelos do ventrículo como um cilindro, cuja altura é definida pela distância entre os eléctrodos no cateter e o raio é calculado a partir da condução de um campo eléctrico através do sangue emventrículo 7-9. O sinal de condutância medida pelo cateter tem duas componentes. A primeira é a condução através do sangue; esta varia com o volume do ventrículo e constitui o sinal primário usado para determinar o volume do ventrículo. O segundo componente resultante da condução através e ao longo da parede do ventrículo. Isto é chamado de condutância paralela e deve ser removido, a fim de determinar o volume do ventrículo absoluto. Há dois sistemas disponíveis comercialmente para a recolha de dados de pressão-volume no laboratório de pesquisa e o método utilizado para calcular e remover a condutância paralela é a principal diferença entre eles 6,10,11. cateteres condutância exigem a injecção de uma solução salina hipertónica para o cálculo da condutância paralelo. Esta injecção transitoriamente muda a condutividade do sangue no ventrículo, enquanto que a condutividade da parede mantém-se constante. A partir destes dados, é possível determinar acomponente do sinal de condutância que se origina a partir do sangue e o que vem a partir da parede do ventrículo. Esta abordagem assume que a condutância paralelo não varia durante o ciclo cardíaco. O método baseia-se na admissão mudanças de fase no campo eléctrico para avaliar a contribuição da parede ventricular para o sinal total de volume. Este método baseia-se uma variedade de constantes predeterminadas para a condutividade do sangue e do miocárdio para determinar o volume final, mas torna medidas contínuas de condutância paralela durante o ciclo cardíaco. Ambos estes sistemas fornecem boas estimativas do volume ventricular esquerdo e as diferenças entre eles não são susceptíveis de ser f isiologicamente significativa. O modelo cilíndrico do ventrículo e outras premissas tornar estas abordagens baseadas em cateter não tão precisos quanto outras modalidades, mas esses dados são fornecidos numa base de batimento a batimento que é essencial para a avaliação das medidas independentes de carga da função cardíaca. O procedimento aqui descrito é utilizado no meu laboratório e apresentou dados de um grande número de estudos que examinam os mecanismos patofisiológicos básicos de distrófica cardiomiopatia 12-18. O procedimento descrito abaixo é um dos dois que pode ser usado para obter dados de espira PV. Embora muitos dos princípios são aplicáveis ​​para qualquer abordagem, este protocolo vai se concentrar em uma abordagem apical de tórax aberto; um protocolo de tórax fechado foi detalhado em outros lugares 19,20. Enquanto o processo será descrito em pormenor, os princípios gerais são importantes para expor o coração com danos mínimos para quer o coração ou os pulmões. Durante todo o protocolo é importante lembrar que este é um procedimento não-sobrevivência e que tendo uma boa exposição do coração é criticamente importante para a colocação correcta do cateter.

<table><tbody><tr><td>Dumont 5/45 (2)</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>11251-33</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps de Dilatação de Vasos</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>18153-11</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Mola Micro de Dissecação Castroviejo</td><td>Roboz Instruments</td><td>RS-5668</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps Octogon - Serrilhado/Curvo</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>11041-08</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps Octógono - Serrilhado/Reto</td><td>Fino Ferramentas de Ciência</td><td>11040-08</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Dissector - Lâmina Pesada</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>14082-09</td><td></td></tr><tr><td>Transpore Fita Cirúrgica</td><td>3M</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>3-0 Sutura de Seda</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>18020-30</td><td></td></tr><tr><td>TOPO Ventilador</td><td>Kent Scientific</td><td>TOPO</td><td></td></tr><tr><td>Martin ME 102 Unidade Eletrocirúrgica</td><td>Harvard Aparelho</td><td>PY2 72-2484</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de Seringa</td> Estereomicroscópio <td>GenieTouch</td><td></td>da <td>Lucca Technologies</td></tr><tr><td>com suporte de lança</td><td>Termômetro de</td> termopar Nikon <td>SMZ-800N</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Cole Parmer</td><td>EW-91100-40</td><td></td></tr><tr><td>T / Bomba Recirculador de Água Quente</td><td>Kent Scientific</td><td>TP-700</td><td></td></tr><tr><td>ADVantage Sistema de Pressão-Volume</td><td>Transônico</td><td>ADV500</td><td></td></tr><tr><td>Aquisição e Análise de Dados</td><td>DSI</td><td>Ponemah ACQ-16</td><td></td></tr></tbody></table>

medição do volume pressão loops no mouse

Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse

Compreender as causas e progressão da doença cardíaca apresenta um desafio significativo para a comunidade biomédica. A flexibilidade genética do mouse oferece um grande potencial para explorar a função cardíaca no nível molecular. O tamanho reduzido do rato apresenta alguns desafios no que diz respeito à realização de fenotipagem cardíaco detalhado. Miniaturização e outros avanços na tecnologia fizeram muitos métodos de avaliação cardíaca possível no mouse. Destes, a coleta simultânea de dados de pressão e volume fornece uma imagem detalhada da função cardíaca que não está disponível através de qualquer outra modalidade. Aqui, um procedimento detalhado para a recolha de dados de loop pressão-volume é descrito. Incluído é uma discussão sobre os princípios subjacentes às medições e as potenciais fontes de erro. manejo anestésico e abordagens cirúrgicas são discutidos em grande detalhe como ambos são cruciais para a obtenção de medida hemodinâmica de alta qualidades. Os princípios do desenvolvimento protocolo de hemodinâmica e aspectos relevantes da análise dos dados também são abordados.

Por convenção, o volume é representada graficamente no eixo X e a pressão sobre o eixo dos Y como na Figura 1. As malhas de pressão-volume decorrentes traçando pressão contra o volume deve assemelhar a um rectângulo, os bordos verticais que representam as alterações isovolumétrica de pressão (isto é, quando ambos valvas mitral e aórtica estão fechados). A horizontal inferior representa enchimento ventricular através da válvula mitral e a parte horizontal superio...

Este manuscrito descreve um protocolo detalhado para a recolha de dados de pressão-volume do mouse.

Medição do volume Pressão Loops no mouse

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the ...

O objetivo geral da medição de loops de pressão-volume no camundongo é obter uma avaliação detalhada da função cardíaca. Este método é útil para a caracterização fisiológica de camundongos que possuem manipulações genéticas específicas, o que por sua vez pode gerar insights sobre o papel de proteínas específicas na função cardíaca. A principal vantagem desta técnica é que ela fornece uma avaliação detalhada da função contrátil que não está disponível por meio de outras metodologias.Uma vez que o camundongo esteja preparado para a cirurgia, comece fazendo uma incisão na incisura esternal, estendendo-se de cerca de cinco milímetros à direita da linha média até cerca de cinco milímetros à esquerda da linha média. Faça uma segunda incisão estendendo-se ao longo da borda direita da primeira, em direção rostral, até cerca de dois milímetros abaixo da extremidade da mandíbula. Em seguida, faça uma terceira incisão estendendo-se da extremidade rostral da segunda incisão até cerca de cinco milímetros à direita da linha média.E retrair o retalho cutâneo resultante para a direita para expor os tecidos subjacentes. Em seguida, sob um microscópio estereoscópico, realizar a dissecação romba das glândulas salivares parótida e submandibular na linha média para expor a musculatura subjacente que recobre a traqueia. Então, separar rombamente os músculos esternohioideos direito e esquerdo.Quando a traqueia estiver visível, passe um pedaço de dez centímetros de fio de seda 3-0 sob o tecido da garganta, tomando cuidado para não incluir o esôfago. Usando uma agulha de calibre 20, faça uma incisão ampla na região logo abaixo da laringe, antes do primeiro anel traqueal. Em seguida, remova imediatamente a máscara de anestesia do animal e insira cuidadosamente o tubo endotraqueal na traqueia.Uma vez que o tubo tenha sido fixado, estenda a borda esquerda da incisão cutânea original até o processo xifoide e através da linha média até cerca de um ponto cinco centímetros à direita da linha média. Em seguida, use dissecação romba para retrair lateralmente o retalho de pele, expondo a musculatura subjacente. E use pinças dilatadoras de vasos para isolar a inserção do músculo peitoral maior no lado direito, próximo ao aspecto costal do esterno.Caute-rizar e cortar o músculo. Em seguida, cortar o peitoral maior ao longo de sua inserção no esterno. E dissecar o latíssimo do dorso no mesmo lado.Retraia a extremidade cortada cranialmente para expor as costelas. E use um par de pin&ccedil;as afiadas para dissecar cuidadosamente atrav&eacute;s das camadas musculares intercostais e acessar a cavidade tor&aacute;cica. Uma vez que o espa&ccedil;o pleural tenha sido aberto, insira cuidadosamente os dilatadores de vasos com ponta romba e levante a parede tor&aacute;cica com uma for&ccedil;a suave para cima.Agora, corte lateralmente ao longo dos músculos intercostais tomando cuidado para não cortar o lobo pulmonar e estenda a incisão medialmente, mantendo de três a quatro milímetros laterais à linha média para evitar a artéria mamária interna que corre paralela ao esterno. Em seguida, insira um pequeno aplicador de algodão umedecido com soro fisiológico pela incisão em direção à linha média e realize uma leve tração para cima para afastar a parede torácica das estruturas subjacentes. Use cuidadosamente um bisturi elétrico para cortar a parede torácica começando na borda medial da incisão e terminando cerca de um centímetro lateral à linha média no lado esquerdo.Uma vez que o tecido tenha sido completamente cauterizado, use uma tesoura para cortar cuidadosamente o esterno. O ápice do coração deve estar claramente visível. Em seguida, utilizando dissecação romba, rompa o pericárdio e identifique a veia cava caudal.Para posicionar o cateter na veia jugular, oriente um cateter com agulha de 30 gauge acoplado a uma seringa contendo albúmina a dez por cento de modo que a agulha repouse sobre a veia jugular por conta própria, com o bisel voltado para cima. Para visualizar a veia jugular, segure a agulha com pinça em uma das mãos e retrai a glândula salivar com pinça de tecido na outra mão. Aplique tração suave ao tecido ao redor da veia jugular para criar tensão na parede do vaso.Em seguida, utilizando um ângulo de abordagem raso, insira cuidadosamente a agulha na veia e avance a ponta três a quatro milímetros para dentro do vaso. Quando o cateter estiver posicionado, fixe a agulha nas glândulas salivares subjacentes usando cola cirúrgica e inicie a infusão da solução de albumina. Para posicionar o cateter de pressão-volume, primeiro, coloque uma seringa contendo solução salina equilibrada e o cateter de pressão-volume ao lado do camundongo, com a ponta do cateter aproximadamente na mesma altura do coração, e zere a leitura de pressão.Em seguida, utilizando um pequeno aplicador de algodão embebido em solução salina, posicione o coração para visualizar o ápice e use uma agulha de 25 gauge para fazer uma incisão perfurante o mais próximo possível do centro do ápice. Após a remoção da agulha, insira rapidamente, mas com cuidado, o cateter através da incisão. Os laços de pressão-volume ventricular podem então ser medidos.Após a colocação do cateter, reduza a anestesia para evidenciar os efeitos cardio-depressores que a anestesia possa estar causando. Se houver perda sanguínea excessiva durante o procedimento, você pode simplesmente aumentar o volume de albúmina infundida. Por convenção, o volume é plotado no eixo X e a pressão no eixo Y.Os laços de pressão-volume resultantes da plotagem da pressão em função do volume devem assemelhar-se a um retângulo, com as bordas verticais representando as alterações isovolumétricas na pressão. O lado horizontal inferior representa o enchimento ventricular através da válvula mitral e o lado horizontal superior representa o esvaziamento ventricular através da válvula aórtica. Em um camundongo saudável do tipo selvagem, espera-se pressões no ventrículo esquerdo entre 90 e 110 milímetros de mercúrio, com uma taxa máxima da derivada máxima da pressão entre 8000 e 12000 milímetros de mercúrio por segundo.Além disso, um dos artefatos de medição mais comuns que podem complicar a análise de dados de pressão-volume é o aprisionamento do cateter, evidente como um pico de pressão no final da sístole, provavelmente resultante da compressão direta do transdutor de pressão por um músculo papilar ou outra estrutura dinâmica dentro do ventrículo. Durante a realização deste procedimento, é importante lembrar-se de monitorar continuamente o camundongo para garantir uma profundidade anestésica adequada. Uma vez dominada, esta técnica pode ser concluída em cerca de uma hora, dependendo do protocolo utilizado após a colocação do cateter.Após a conclusão deste procedimento, infusões de compostos experimentais podem ser utilizadas para avaliar seus efeitos na função cardíaca. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como posicionar cirurgicamente um cateter de pressão-volume no ventrículo esquerdo do camundongo e obter loops de pressão-volume de alta qualidade para análise cardíaca.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

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