Name: ポリジメチルシロキサン薄膜を用いた自動化された脂質二重膜の形成 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: 学ぶ自動化された脂質二重膜形成法。ポリジメチルシロキサン薄膜を用いて、1時間以内に80%以上の成功率で再現性のある膜を作製できます。膜タンパク質相互作用の研究やナノバイオセンサー開発に有用です。

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この研究は、韓国国立研究財団のパイオニア研究センタープログラム（NRF-2012-0009575）および国立研究財団助成金））(NRF-2012R1A1B4002413, NRF-2014R1A1A2059341)によって支援されました。この研究は、仁荷大学研究助成金によっても部分的に支援されました。

1.溶液の調製<ol><li>緩衝液の調製： <ol><li>緩衝液を処方するために、蒸留水で1 MのKCl（塩化カリウム）、10mMのトリス-HCl（トリス - 塩酸塩）、及び1mMのEDTA（エチレンジアミン四酢酸）を溶解し、pHを8.0に調整します。 </li><li> 0.20μmのフィルターを使用してソリューションをフィルタリングします。滅菌するために、15分間121℃で溶液をオートクレーブ。 </li></ol></li><li>プレ塗装のための脂質溶液の調製： <ol><li> 8 のn -デカン及びヘキサデカン（V：2の混合物中：プレ絵画、3％を溶解DPhPC（1,2- diphytanoyl- のsn -glycero -3-ホスファチジルコリン）脂質（V w）のための脂質溶液を策定するために、 V）。回転子を使用して、一晩撹拌しました。 </li></ol></li><li>膜形成のための脂質溶液の調製： <ol><li>膜形成のための脂質溶液を調合するために、DPhPC 0.1％を溶解させ（1、2-diphytanoyl- SN -glycero -3-ホスファチジルコリン）（W：V）脂質：8 SQ 2の混合物でualene及びヘキサデカン（V：V）。回転子を使用して、一晩撹拌しました。 </li></ol></li></ol> PDMS薄膜の2形成<ol><li> PDMSプレポリマーを形成するために、混合カップ1（w / w）の比：9にPDMSと硬化剤を混合します。 （ - 厚さ250μm200）PDMS薄膜を形成するためのペトリ皿にPDMSプレポリマーの5グラムを追加します。薄膜を形成するために10秒間800rpmでスピンコーターを用いて、PDMSプレポリマーを広げます。 </li><li>気泡を除去するために2時間100ミリトールの圧力で真空デシケーターにペトリ皿を置きます。プレポリマー薄膜、70℃で5時間、オーブンで焼くを重合させます。 </li><li>正方形PDMS薄膜を作るために、2×2 cm 2の正方形に重合PDMS薄膜を切りました。 PDMS薄膜の中央に開口部を作るために500μmのマイクロパンチを使用してください。 8 のn-デカン、ヘキサデカン：2で混合し、3％DPhPCの脂質溶液による前ペイント開口。 </li></ol> 3.チャンバーの作製とASSEmbly <ol><li> BLM室を製造するために、4センチメートルのx 1.5センチメートル×1センチ、X 1.3センチメートルのx 0.8センチメートル17 1.5センチメートルの内側のウェルの寸法の外形寸法と3D描画ソフトウェアを使用して、チャンバの設計2対称ブロック。 </li><li> CNCマシンとPTFEブロックを用いてチャンバを作ると、製造元の指示に従ってください。 </li></ol> 4.商工会議総会<ol><li>室を組み立てるために、2つのPTFEブロック間塗装済み-PDMS薄膜を配置するPDMS薄膜上に開口部がチャンバーの穴と一致するように。 </li><li> （光学観察を容易にする）グリースでカバーガラスを用いてチャンバの外縁をシール。ナットとボルトを使用して組み立てられたチャンバーを固定化します。 メモ：液漏れがないように、チャンバは、よく密封されていることを確認します。 </li></ol>速め自己組織形成と膜前駆体の5形成（MPES） <ol><li>ピペットを使用して、0.5を堆積8 のn -デカン：2で混合し、0.1％DPhPC脂質μlの室で組み立てPDMS薄膜の開口部の上にヘキサデカン。 </li><li>使用前に、冷凍庫または10℃以下の冷蔵庫にチャンバを格納します。 </li></ol> 6.膜形成と検証<ol><li> MPESとBLMを形成するためには、冷蔵庫からチャンバーを撤回し、チャンバーの各側面に緩衝液2mlを一時停止します。凍結した膜前駆体が解凍されるまで、&lt;10分間脇室を設定します。 </li><li>正確には、光源と顕微鏡に対する仰角を制御するためにマイクロマニピュレーターの上室を置きます。 BLM形成プロセスの光学観察用PDMS薄膜の開口部を明るくするためにハロゲン光ファイバ照明装置を用いた光源として、チャンバの一方の側を照明します。 </li><li>他の側では、（20によって拡大BLMの形成を観察するために、光源に対して垂直にデジタル顕微鏡を配置0X）。 </li><li> BLMの形成を確認するために、色が弁輪よりも明るくなる開口部の中心を観察します。 </li></ol> 7.電気的記録<ol><li>電気的測定のために、&gt; 1分間の次亜塩素酸ナトリウムで208ミクロンの厚さの銀線や漂白剤を使用したAg / CL電極を準備します。十分な深室の各側面に銀/ CL電極を配置するには、緩衝液中に浸漬されます。 </li><li>微小電極増幅器に電極を接続します。電気生理学ソフトウェアを使用して、方形波を取得するために膜を横切って±10 mVの三角波形を適用します。 V_clamp（MV）に示されている矢印をクリックすることで、電圧を印加することに設定します。 </li><li>録音ボタン（赤い点のアイコン）をクリックすることにより、膜の電気的特性を記録します。均一な方形波が観察されるまで記録を続行します。黒い四角いアイコンをクリックして録音を終了します。 </li></ol> 8.イオンチャネル設立 NOTE：GAは脂質溶液に直接添加されているようグラミシジンA（GA）の取り込みは、BLMの形成時に自然に起こります。 <ol><li>ジョージアチャネル活動を観察するために、膜の保持電位を測定するために、5 kHzでのサンプルレートで膜を横切って100 mVのに適用します。 V_clamp（MV）に示されている矢印をクリックすることで、電圧を印加することに設定します。 </li><li>録音ボタン（赤い点のアイコン）をクリックしてのGA取り込みの電気的特性を記録します。現在のジャンプが観察されるまで記録を続行します。黒い四角いアイコンをクリックして録音を終了します。 </li><li>電気的データ収集の後、電気生理学ソフトウェアを使用して100Hzでローパスベッセルフィルタでデータをフィルタリングします。 </li><li>フィルタリング潜在的なデータを保持するには、現在のジャンプを観察したGaの取り込みを確認するために（〜0.15 NS、それぞれ現在のジャンプを、Gaイオンチャネルの二量体化を表します）。 </li></ol>

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</ol>

著者らは開示するものは何もない。

当社のBLM形成技術は、産業用途の可能性が限られている従来の技術とは対照的に、細胞膜およびイオンチャネル研究のための強力なツールを提供します。PDMS薄膜を用いた膜前駆体を開発し、迅速な自己組織化を有する凍結膜前駆体を考案しました。
膜形成が膜と脂質溶液の間の表面相互作用によってのみ起こる疎水性フィルムによる従来の膜形成法とは対照的に、20 PDMSフィルムの膜薄化は、PDMS膜による表面相互作用と溶媒抽出によって起こります。PDMSの細孔への溶媒の吸収、およびPDMS薄膜の表面に沿った溶媒の濡れにより、脂質二重層の迅速かつ一貫した形成が促進されました。また、粘度の高いスクアレンと凝固点の高いヘキサデカンを配合することで、膜形成時間を制御することができました。このシステムにより、BLM形成の成功率(<80%)を高めると同時に、膜形成時間(<40分)を短縮することができました。凝固点の高い溶媒を使用したため、膜前駆体の保管と輸送が可能でした。さらに、緩衝液を添加すると膜形成が自動的に促進されるため、高度な訓練を受けた専門知識を必要とする複雑な膜形成プロセスを排除...

人工脂質二重膜、または黒色脂質膜（BLM）、細胞膜、およびイオンチャネルのメカニズムを解明するため、ならびにイオンチャネル及びイオン/分子間の相互作用を理解するための重要なツールである。パッチクランプ法が、1-7多くの場合、細胞膜の研究のためのゴールドスタンダードとみなされ、それは面倒であり、イオンチャネル測定のための高度に熟練したオペレータを必要とする。8人工的に再構成された脂質二分子膜は、イオンチャネルの研究のための代替的なツールとして浮上してきたが、9,10、それらも面倒に関連付けられていますプロセスおよび特定の専門知識。さらに、膜は機械的な摂動の影響を受けやすいです。したがって、これまでに導入された脂質二重層の技術は、実際の用途が限られている。11 脂質二重膜の堅牢性と寿命を向上させるために、コステロら 12、およびIDEと柳田<suP&gt; 13は、ヒドロゲルでサポートされている自立型脂質二重層を考案しました。しかし、強化された長寿にもかかわらず（&lt;24時間）、二層堅牢性が改善されませんでした。チョンら 14は、（数日まで）強化された寿命で、その結果、親密なヒドロゲル脂質二重層の接触でハイドロゲルカプセル化された膜（HEM）を考案しました。さらにHEMの寿命を向上させるために、Malmstadtとチョンらは、ヒドロゲル脂質が両方のシステムではその場で共有結合（cgHEM）。15を介して結合を持つハイドロゲルカプセル化膜を作成し、膜の寿命が大幅に増加した（&gt; 10日） 。しかし、膜形成システムが十分に強固ではなかった、と脂質二重層の使用のための専門知識を解放するために必要な場合保存したり、配信することができませんでした。 脂質二重層プラットフォームの開発は、主に増加堅牢性とBLMsの寿命を中心に展開しています。 BLMsの寿命は、suコマンドであったがbstantially最近強化され、そのアプリケーションが原因で輸送及び保存性の欠如に限られていました。これらの問題を克服するために、チョンら貯蔵可能な膜システムを作成し、MPを構築するために、膜前駆体（MP）16を導入し 、それらを3％DPhPC（1,2- diphytanoyl-を含むN-デカン、ヘキサデカンの混合物を調製し錫 -glycero -3-ホスファチジルコリン）は、〜14℃（室温下、典型的な冷蔵温度以上）で凍結なるように、脂質溶液の凝固点を制御します。この実験では、MPは、ポリテトラフルオロエチレン（PTFE）膜の小さな開口部に広がるし、続いて4℃で冷蔵庫に凍結しました。 MPを室温にしたときに、MPを解凍し、脂質二重層を自動的に形成し、典型的には膜形成に関連する専門知識を排除します。しかし、MPから作られたBLMの成功率は、〜27％と低く、膜構成体nは時間がその実用的なアプリケーションを制限する、（24時間まで30分）矛盾していました。 以前にリュによって報告されたように、本研究では、ポリジメチルシロキサン（PDMS）薄膜の代わりに（A）コントロール製造時間及び（b）BLM形成の成功率を高めるために、従来の疎水性薄膜（PTFE、ポリオキシメチレン、ポリスチレン）で使用されら 17ここで、膜形成は、PDMSの多孔性の性質に起因する溶媒抽出によって促進された、膜形成に要する時間が正常にこの研究で制御しました。脂質溶液は、PDMS薄膜中に吸収されたように、このシステムでは、一貫性のある膜形成時間が達成されました。また、膜の寿命はPDMS薄膜、脂質溶液のスクアレンの加算結果に起因する溶媒の遅い吸収を延長しました。我々は、この技術を用いて形成された膜は私に適していることを確認するために光学的及び電気的測定を実施しましたチャネルの研究に関する。

<table><tbody><tr><td>塩化カリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td>緩衝液用</td></tr><tr><td>トリス塩酸塩</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1185-53-1</td><td>緩衝液用</td></tr><tr><td>エチレンジアミン四酢酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60-00-4</td><td>緩衝液用</td></tr><tr><td>n-decane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>44074-U</td><td>脂質溶液用</td></tr><tr><td>ヘキサデカン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>544-76-3</td><td>脂質溶液用</td></tr><tr><td>スクワレン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3626</td><td>脂質溶液</td></tr><tr><td>用 グラミシジンA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11029-61-1</td><td>膜タンパク質</td></tr><tr><td>1,2-ジフィタノイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン</td><td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td><td>850356</td><td>membrae形成用</td></tr><tr><td>シルガード184aおよび184bエラストロマーキット</td><td>ダウコーニングアジア</td><td></td><td>PDMS薄膜</td></tr><tr><td>0.2 &mu;m フィルター</td><td>Satorius stedim</td><td>16534----------K</td><td>濾過用緩衝液</td></tr><tr><td>Rotator</td><td>FinePCR</td><td>AG</td><td>脂質を均一に溶解する</td></tr><tr><td>オートクレーブ</td><td>バイオフリー</td><td>BF-60AC</td><td>緩衝液を滅菌する</td></tr><tr><td>スピンコーター</td><td>Shinu Mst</td><td>SP-60P</td><td>PDMSプレポリマーを広げる</td></tr><tr><td>真空デシケーター</td><td>ウェルチ</td><td>2042-22</td><td>気泡を除去するPDMSプレ</td></tr><tr><td>ポリマー500 &mu;m&nbsp;パンチ</td><td>ハリス ユニコア</td><td>0.5</td><td>PDMS薄膜CNCマシンに開口部を作るには</td></tr><tr><td></td><td>SME取引 SME</td><td>2518</td><td>膜形成チャンバーを製造するには</td></tr><tr><td>ハロゲン光ファイバーイルミネーター</td><td>Motic</td><td>MLC-150C</td><td>光学観察用PDMS薄膜の開口部を照らすには</td></tr><tr><td>デジタル顕微鏡</td><td>デジタルブルー</td><td>QX-5</td><td>脂質二重膜を光学的に観察するには形成</td></tr><tr><td>電極</td><td>AMシステム</td><td></td><td>膜形成を電気的に観察する</td></tr><tr><td>微小電極増幅器(Axopatch amplifier)</td><td>Axon Instruments</td><td>Axopatch 200B Amplifier</td><td>膜の静電容量を測定するため(原稿では微小電極増幅器として記載されています)</td></tr></tbody></table>

ポリジメチルシロキサン薄膜を用いた自動化された脂質二重膜の形成

Automated Lipid Bilayer Membrane Formation Using a Polydimethylsiloxane Thin Film

人工脂質二重層、または黒色脂質膜（BLM）は、イオンチャネルおよびタンパク質相互作用を研究するため、ならびにバイオセンサー用途のための強力なツールです。しかし、従来のBLM形成技術は、いくつかの欠点を持っており、彼らはしばしば、特定の専門知識と手間のかかるプロセスを必要とします。具体的には、従来のBLMsは低形成の成功率と一貫性のない膜形成時間に苦しみます。ここでは、ポリジメチルシロキサン（PDMS）に、従来から使用されるフ​​ィルム（ポリテトラフルオロエチレン、ポリオキシメチレン、ポリスチレン）を交換することによって制御間引き時間と強化されたBLM形成速度で貯蔵可能と搬型BLM形成システムを実証します。この実験では、このようなPDMS薄膜として多孔構造ポリマーが使用されます。また、低粘度で、従来から使用される溶媒とは対照的に、スクアレンの使用は、膜の寿命を延長する、PDMSによって遅く溶媒吸収を介して制御間引き時間を可能にしました。広告でditionは、スクアレン及びヘキサデカンの混合物を使用して、脂質溶液の凝固点は、無期限に保存され、容易に輸送することができ、膜前駆体を作製した。加えて、（〜16℃）に上昇させました。これらの膜前駆体は、&lt;1時間のBLM形成時間を減少させ、〜80％のBLM形成速度を達成しています。また、グラミシジンAとイオンチャンネル実験は、膜システムの実現可能性を実証しました。

MPES液組成の最適化 脂質および溶媒の異なる組成が正常MPESの脂質二重膜を再構成するために試験しました。 DPhPC 14 3％を含有するN-デカン、ヘキサデカンの混合物MPシステムは、膜形成（〜27％）の低い成功率を示しました。 PDMS膜を連続的に脂質溶液を抽出したように加えて、無傷の脂質二重膜を維持するために、溶媒組成を最適化する必要がありました。従って、20℃、18で12センチポイズの粘度を有するスクアレンは、代わりに20℃で0.92センチポイズの粘度を有するN-デカン、を使用した。19スクアレンが原因に増加し、安定性と寿命の両方を用いた場合PDMSによる溶媒吸収の減少率。 表1は、間引き時間、寿命、および異なる溶媒組成を有する膜の成功率を比較します。 <e...

私たちは、保存可能な、可搬型の脂質二重層形成システムを実証します。凍結した膜前駆体を周囲温度にしたときに脂質二重膜は、80％以上の成功率で1時間以内に形成することができます。このシステムは、イオンチャンネルに関連した面倒なプロセスと専門知識を軽減します。

An artificial lipid bilayer, or black lipid membrane (BLM), is a powerful tool for studying ion channels and protein interactions, as well as for ...

本手順の全体的な目的は、ポリジメチルシロキサン薄膜を用いて自動脂質二分子層形成を研究するための方法を記述することです。この手法は、膜タンパク質相互作用に関するナノバイオセンサー分野の重要な疑問を解決するのに役立ちます。この技術の主な利点は、脂質二分子層の形成が自動化されており、再現性が高いことです。まず、塩化カリウム、トリス塩酸塩、およびEDTAを蒸留水に溶解して緩衝液を調製します。次に、溶液のpHを8.0に調整します。続いて、0.2 micronフィルターを用いて溶液をろ過し、121 °Cで15分間オートクレーブ滅菌します。次に、体積比でウンデカン2部とヘキサデカン8部の混合液に、脂質を3%の濃度で溶解させ、プレペイント用の脂質溶液を調製します。ローテーターを用いて、この溶液を一晩攪拌します。また、同様に体積比でウンデカン2部とヘキサデカン8部の混合液に、脂質を0.1%の濃度で溶解させ、膜形成用の脂質溶液を調製します。この溶液についても、ローテーターを用いて一晩攪拌します。PDMS薄膜を調製するために、調製用カップ内でプレポリマー9部と硬化剤1部を混合します。この混合物を5 gペトリ皿に入れ、800 rpmで10秒間スピンコートし、厚さ200～250 µmの膜を形成します。次に、ペトリ皿を真空デシケーターに入れ、100 millitorrの真空状態で2時間保持し、残留気泡を除去します。その後、オーブンを用いて70 degrees celsiusで5時間加熱し、PDMSを重合させます。冷却後、重合した薄膜を2 cm × 2 cmの正方形に切り出し、直径500 micronのパンチを用いて正方形の中心に小さな開口部を作製します。次に、マイクロピペットを使用して、1 µLの3%脂質溶液でアパーチャを予備塗装します。ブラックリピッド膜チャンバーを作成するために、3D作図ソフトウェアを用いて、チャンバー用の2つの対称的なブロックを設計します。その後、PTFEブロックとCNC工作機械を使用してチャンバーを製作します。チャンバーを組み立てるには、あらかじめ塗装したPDMS薄膜を2つのPTFEブロックの間に配置し、PDMS薄膜の開口部がチャンバーの穴の中心にくるようにします。カバーガラスと真空グリスを使用して、チャンバーの外縁を密封してください。密封後、ナットとボルトを用いて組み立てたチャンバーを固定します。液漏れがないよう、チャンバーが十分に密封されていることを確認することが重要です。ピペットを使用して、0.1%脂質溶液 0.5 µLを、チャンバーに組み込まれたPDMS薄膜の開口部に滴下します。その後、チャンバーを10 °C以下の冷却環境に置き、使用時まで保存します。迅速に自己組織化するブラックリピッドメンブレンを形成するため、チャンバーを冷蔵庫から取り出し、チャンバーの両側にバッファー溶液を2 mLずつ加えます。凍結したメンブレン前駆体が解凍されるまで、チャンバーを10分間放置します。その後、光源および顕微鏡に対する高さを精密に制御するため、チャンバーをマイクロマニピュレーターに設置します。ハロゲン光ファイバー照明装置を使用して、チャンバーの片側から照射し、PDMS薄膜のアパーチャを明るくします。反対側には、アパーチャと直線上に20倍の対物レンズを配置し、中心部が環状部分よりも明るくなる箇所を観察します。電気的測定を行うには、厚さ208 µmの銀線を次亜塩素酸ナトリウム溶液に1分間以上浸し、塩化銀電極を準備します。次に、電極をマイクロ電極アンプに接続します。続いて、塩化銀電極をチャンバーの両側に配置し、緩衝液に浸します。電気生理学ソフトウェアを使用して、膜に10 millivoltの三角波を印加し、矩形波を取得します。録画ボタンをクリックして、膜の電気的特性を記録します。均一な方形波が観察されるまで記録を続けてください。その後、黒い正方形のアイコンをクリックして記録を終了します。グラミシジンAを脂質二重層に組み込むには、2つの方法を用いることができます。1つ目は、PDMS薄膜の開口部に脂質溶液を展延させる前に、グラミシジンAを脂質溶液に直接添加する方法です。2つ目は、脂質二重層が形成された後に、グラミシジンA溶液をチャンバーに添加する方法です。グラミシジンAチャネル活性を観察するため、5 kHzのサンプリングレートで膜に100 mVを印加し、膜の保持電位を測定します。これまでと同様に、録画ボタンをクリックして電気的特性を記録します。イオンチャネル活性が表示されたら、イオンチャネルの組み込みを確認するために、さまざまな電流ジャンプが観察されるまで記録を継続します。確認後、黒い正方形のアイコンをクリックして録画を終了します。録画が完了したら、電気生理学ソフトウェアを用いて、100 hertzの低域通過ベッセルフィルターでデータをフィルタリングします。フィルタリング後の保持電位データにおける電流ジャンプを観察してください。これらのジャンプは、グラミシジンAイオンチャネルの二量体化を表しています。凍結させた膜前駆体を室温に戻して融解させると、疎水性溶媒がPDMS薄膜へと抽出されるため、脂質二重層の形成が促進されます。この一連の画像は、凍結状態から加温した際に自己組織化する脂質二重層の形成過程を示しています。ここでは、電気伝導度によってグラミシジンAの組み込みと二量体化が示されています。二量体化すると、グラミシジンAはイオンチャネルを形成し、伝導度は28 picosiemensまで跳ね上がります。これは先行研究の結果と一致しており、この抗生物質が脂質二重層に即座に組み込まれたことを示しています。本研究の膜形成手法は、実用的応用の可能性が限られている従来の手法とは対照的に、細胞膜およびナノチャネル研究のための強力なツールとなります。本システムは、膜形成およびイオンチャネルの組み込みに専門的な技術を必要としないため、薬剤スクリーニングやバイオセンシングへの応用に非常に適しています。

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

サポートされている脂質二重層と天然膜粒子は、細胞膜の特性を近似することができると分析種々の戦略に組み込むことが好都合システムである。ここでは、サポートされている脂質二分子膜でコーティングされたSiO 2ビーズ、リン脂質小胞または天然の膜粒子からなるマイクロアレイを調製するための方法を実証する。...

スキージベースアセンブリ法による生体膜マイクロアレイの形成

液滴界面の脂質二重層に対するマイクロ流体噴射は、膜の非対称性、膜貫通タンパク質の取り込み、および材料のカプセル化を制御して小胞を生成するための信頼できる方法を提供します。この技術は、区画化された生体分子が所望される生体系の様々な研究に適用することができる。...

マイクロ流体ジェッティングを使用して、脂質二重層小胞の生成

私たちは、脂質小胞を使用せずに、固体基板上にサポートされている脂質二重層を形成するための実験プロトコルを提示します。我々は、様々な生物学的用途のためのコレステロールに富むドメインと脂質二酸化ケイ素と金の二重層と同様に支持された膜を形成するために、一段階法を示しています。...

溶剤アシスト脂質二重（SALB）法による生体膜の作製

マイクロ流体ダブルエマルジョンの生成には、通常、パターン化された濡れ性を持つデバイスやカスタムメイドのガラス部品が含まれます。ここでは、表面処理や複雑な製造プロセスを必要とせず、14μmまでのダブルエマルジョンを製造できるオールポリジメチルシロキサン(PDMS)ダブルエマルジョンジェネレーターの製作と試験について説明します。...

ポリジメチルシロキサン（PDMS）同軸フローフォーカス・デバイスを使用したダブルエマルションの生成

我々 は開いた区域の脂質の心と私の自己組織化アッセイの in vitroのプロトコルを提供します。さらに、我々 は反応閉じ込めによる生体内での条件を模倣する脂質被覆 PDMS microcompartments...

体外自己組織化人工脂質膜上のタンパク質パターンの再構成

固相担、タンパク質-無料、ダブル リン脂質二重膜 (DLBM) 複雑で動的な脂質ナノチューブ ネットワークに変換することができます、小胞体の 2 D のボトムアップ...

自発的な形成と小胞体のボトムアップ モデル人工脂質ナノチューブ ネットワークの転位

我々は、脂質二重層を銅(II)2,9,16,23-テトラ-tert-ブチル-29H,31H-フタロシアニン(CuPc)分子でドーピングすることにより、水/空気界でハイブリッド脂質膜を産生するためのプロトコルを報告する。得られたハイブリッド脂質膜は、脂質/CuPc/脂質サンドイッチ構造を有する。このプロトコルは、他の機能性ナノ材料の形成にも適用することができる。...

水/空気界面で疎水性有機分子をドープしたハイブリッド脂質膜の自己集合

このプロトコルは、ユニ脂質および多脂質小胞、支持脂質二重層、および懸濁された脂質二重層を模倣する細胞の形成を記述する。これらの in vitro モデルは、様々な脂質タイプを組み込むために適応することができ、様々な分子および高分子相互作用を調査するために使用することができる。...

分子相互作用研究のための細胞模倣支援及び懸濁脂質二重層モデルの組み立て

ここでは、単一分子全反射蛍光(smTIRF)顕微鏡を使用して、人工混雑した脂質膜上の単一分子の結合、移動度、および組み立てを実行および分析するためのプロトコルが提示されます。...

高分子密集脂質膜上での1分子拡散と集合

ここでは、ナノバー支持脂質二重層システムが開発され、 in...

in vitroでの膜曲率感知タンパク質の研究のためのナノバー支持脂質二重層システム

本プロトコルは、生体適合性リポソームを生成するためのマイクロ流体技術であるオクタノール支援リポソームアセンブリ(OLA)を記載する。OLAは、効率的なカプセル化を備えた単分散のミクロンサイズのリポソームを生成し、即時のオンチップ実験を可能にします。このプロトコルは、合成生物学および合成細胞研究に特に適していると期待されています。...

バイオエンジニアリングのためのオンチップオクタノール支援リポソームアセンブリ

学ぶ自動化された脂質二重膜形成法。ポリジメチルシロキサン薄膜を用いて、1時間以内に80%以上の成功率で再現性のある膜を作製できます。膜タンパク質相互作用の研究やナノバイオセンサー開発に有用です。

ポリジメチルシロキサン薄膜を用いた自動化された脂質二重膜の形成

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