Name: Citometria a flusso basato su test per il monitoraggio delle funzioni delle cellule NK (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Scopri un saggio di citometria a flusso per analizzare le funzioni delle cellule NK, ottimizzato per campioni di piccole dimensioni. Questo metodo è ideale per pazienti pediatrici e immunodeficienti.

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Gli autori sono stati supportati dal German Cancer Aid (Max Eder Nachwuchsgruppe, Deutsche Krebshilfe; UE), il Centro LOEWE per la terapia cellulare e genica di Francoforte (UE, ST) finanziato dal Ministero dell'Istruzione Superiore, della Ricerca e delle Arti dell'Assia, Germania (III L 4- 518/17.004) e dalla "Alfred- und Angelika Gutermuth-Stiftung", Francoforte, Germania (UE). BJ è stato finanziato da una borsa di studio post-dottorato Mildred Scheel della Dr. Mildred Scheel Foundation for Cancer Research. ST è stata fondata da una borsa di studio post-dottorato GO-IN (PCOFUND-GA-2011-291776). Gli autori ringraziano Becton Dickinson (BD) per aver fornito gli analizzatori di citometria a flusso FACSCanto II e Canto10c utilizzati in questo studio.

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<li>Theorell, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+and+viable+quantification+of+inside-out+signals+for+LFA-1+activation+in+human+cytotoxic+lymphocytes+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Sensitive and viable quantification of inside-out signals for LFA-1 activation in human cytotoxic lymphocytes by flow cytometry.</a> J Immunol Methods. 366 (1-2), 106-118 (2011).</li>
<li>Brander, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+human+NK+cell-mediated+cytotoxicity+by+exposure+to+ammonium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Inhibition of human NK cell-mediated cytotoxicity by exposure to ammonium chloride.</a> J Immunol Methods. 252 (1-2), 1-14 (2001).</li>
<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+of+NK+cells+from+human+blood+with+the+RosetteSep+kit+from+StemCell+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Enrichment of NK cells from human blood with the RosetteSep kit from StemCell technologies.</a> J Vis Exp. (8), e326(2007).</li>
<li>Lamoreaux, L., Roederer, M., Koup, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+cytokine+optimization+and+standard+operating+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Intracellular cytokine optimization and standard operating procedure.</a> Nat. Protoc. 1 (3), 1507-1516 (2006).</li>
<li>Baginska, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granzyme+B+degradation+by+autophagy+decreases+tumor+cell+susceptibility+to+natural+killer-mediated+lysis+under+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Granzyme B degradation by autophagy decreases tumor cell susceptibility to natural killer-mediated lysis under hypoxia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (43), 17450-17455 (2013).</li>
<li>He, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+flow+cytometry-based+cytotoxic+T-lymphocyte+assay+through+detection+of+cleaved+caspase+3+in+target+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">A sensitive flow cytometry-based cytotoxic T-lymphocyte assay through detection of cleaved caspase 3 in target cells.</a> J Immunol Methods. 304 (1-2), 43-59 (2005).</li>
<li>Sutton, V. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serglycin+determines+secretory+granule+repertoire+and+regulates+NK+cell+and+CTL+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Serglycin determines secretory granule repertoire and regulates NK cell and CTL cytotoxicity.</a> FEBS J. 283 (5), 947-961 (2016).</li>
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<li>Salih, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+BCR%2FABL-inhibitors+imatinib%2C+nilotinib+and+dasatinib+differentially+affect+NK+cell+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">The BCR/ABL-inhibitors imatinib, nilotinib and dasatinib differentially affect NK cell reactivity.</a> Int J Cancer. 127 (9), 2119-2128 (2010).</li>
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<li>Vey, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+1+trial+of+the+anti-inhibitory+KIR+mAb+IPH2101+for+AML+in+complete+remission%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A phase 1 trial of the anti-inhibitory KIR mAb IPH2101 for AML in complete remission.</a> Blood. 120 (22), 4317-4323 (2012).</li>
<li>Terme, M., Ullrich, E., Delahaye, N. F., Chaput, N., Zitvogel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+killer+cell-directed+therapies%3A+moving+from+unexpected+results+to+successful+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Natural killer cell-directed therapies: moving from unexpected results to successful strategies.</a> Nat Immunol. 9 (5), 486-494 (2008).</li>
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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il metodo descritto è un metodo facile, veloce e affidabile per studiare le funzioni delle cellule NK da campioni di sangue intero di donatori sani o pazienti. Questo metodo offre il grande vantaggio di purificare direttamente le cellule NK da sangue intero, evitando il tempo centrifugazione in gradiente di densità, che è obbligatorio per molti altri metodi di purificazione 15. Inoltre, si richiede una dimensione campione più piccolo rispetto ai metodi &quot;classici&quot; di isolamento delle cellule NK / arr...

Come parte del natural killer del sistema immunitario innato (NK), le cellule contribuiscono alla prima linea di difesa contro le cellule infettate da virus o malignamente trasformati. Un sistema di recettori inibitori e attivatori consente loro di distinguere tra cellule sane e trasformate senza alcun priming antigene rispetto alle cellule T. Al momento dell&#39;incontro delle cellule bersaglio cellule NK rilasciare il contenuto dei loro granuli citotossici (ad esempio, perforina, il granzimi) nella sinapsi immunitario per uccidere il loro obiettivo. Inoltre, le cellule NK producono e secernono diversi tipi di citochine (ad esempio, gamma interferone: IFN-γ; fattore di necrosi tumorale-α: TNF-α) e chemochine (ad esempio, macrofagi infiammatori proteina-1β: MIP-1b) su cellule bersaglio interazione o citochina stimolazione 1. funzioni delle cellule NK sufficienti come la citotossicità, chemochine e la produzione di citochine hanno un impatto importante sulla sorte di diversi disfacilita. Pazienti affetti da leucemia mostrano un aumento tassi di recidiva se presentano un profilo delle cellule NK difettose al momento della diagnosi consiste di produzione di IFN-γ ridotta e ridotta espressione di attivare i recettori delle cellule NK 2. Un recupero precoce del numero di cellule NK e le funzioni, tra cui la produzione di citochine in seguito all&#39;interazione cellula bersaglio è associato ad una ricaduta ridotta e il tasso di sopravvivenza migliore nei pazienti trattati con trapianto di cellule staminali allogeniche 3. Inoltre, dopo l&#39;inizio della terapia con interferone nei pazienti con infezione da virus dell&#39;epatite C la capacità degranulazione delle cellule NK periferiche è più forte nei primi responder rispetto ai non-responder 4. Il numero di cellule NK (&gt; 80 / ml) al giorno 15 dopo il trapianto autologo di cellule staminali (trapianto autologo) in pazienti affetti da linfoma o mieloma multiplo sono predittivi per una migliore libera da progressione e la sopravvivenza globale 5. Nei pazienti affetti da melanoma l&#39;espressione della cellule T immunoglobuline e mucina-domain-contenentg molecola-3 (TIM-3), una proteina immuno-normativo sulle cellule NK, correla con stadio di malattia e la prognosi 6. Gli scienziati hanno monitorato le funzioni delle cellule NK nel corso degli ultimi decenni. L&#39;analisi iniziale di citotossicità delle cellule NK contro le cellule tumorali senza obbligo di adescamento è stato affrontato con un saggio di 51 Cr-release 7. Più recentemente, gli scienziati hanno sviluppato un metodo non radioattivo per valutare la citotossicità delle cellule NK espanse 8. Citochine e chemochine è stato spesso valutata utilizzando test immunoenzimatico (ELISA) tecniche enzyme-linked 9,10. Nel corso degli ultimi decenni, questi metodi sono stati integrati da analisi di flusso citometria-based. L&#39;uso di inibitori della proteina di trasporto (ad esempio, brefeldina A e monensin) e metodi di permeabilizzazione delle cellule in combinazione con protocolli di colorazione della superficie convenzionale ha permesso agli scienziati di studiare chemochine e la produzione di citochine in diversi linfa specificosottoinsiemi ocyte (ad esempio, T, B o cellule NK) 11. Inoltre, le analisi di citometria a base di diversi flussi sono stati sviluppati per monitorare T e NK citotossicità delle cellule. Nel 2004 Alter et al. Descrive l&#39;espressione di superficie della proteina lisosomi associata CD107a (Lamp1) sulle cellule NK su incontro cellula bersaglio come marker per la degranulazione dei granuli citotossici 12. Dal momento che una vasta gamma di differenti fluorocromi e multicanale citometri a flusso sono disponibili ai nostri giorni, è diventato possibile monitorare contemporaneamente diverse funzioni delle cellule NK (citotossicità, citochine e chemochine produzione) in diverse sottopopolazioni di cellule NK. Questo diventa particolarmente importante in situazioni in cui la dimensione del campione è limitato, ad esempio, in biopsie o campioni di sangue di pazienti affetti da leucopenia. Per provare le funzioni delle cellule NK globali, i saggi di citometria a base di diversa portata può essere efficacemente combinati. Theorell et al. Cellule NK stimolate da headonatori lthy con la linea di cellule tumorali K562 e analizzato la produzione di degranulazione, segnale dentro-fuori e chemochine NK tramite citometria di flusso 13. Recentemente sottogruppi di cellule NK, fenotipi e funzioni in pazienti con tumore durante trapianto autologo sono stati analizzati utilizzando flusso saggi citometria-based. E &#39;stato dimostrato che le cellule NK sono stati in grado di degranulano e produrre citochine / chemochine su riconoscimento delle cellule tumorali in momenti molto precoce dopo trapianto autologo 11. Qui un protocollo è descritto per valutare le funzioni delle cellule NK mediante interazione con le cellule tumorali compresa la capacità di degranulazione, chemochine e produzione di citochine mediante un flusso assay citometria-based che consente di controllare le funzioni delle cellule NK in diversi sottoinsiemi simultaneamente.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 + glutammina</td><td>Invitrogen</td><td>6187-044</td><td></td></tr><tr><td>penicilina/streptomicina</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>BD Falcon Round Bottom Tube</td><td>BD</td><td>352008</td><td></td></tr><tr><td>siero fetale di vitello</td><td>Invitrogen</td><td>10270-106</td><td>inattivato a caldo prima dell'uso</td></tr><tr><td>T-flask</td><td>Greiner Bio-One</td><td>690195</td><td></td></tr><tr><td>tumore K562 linea cellulare</td><td>DSMZ GmbH</td><td>ACC 10</td><td></td></tr><tr><td>tampone di lisi ammonio-cloruro-potassio (ACK)</td><td>prodotto in casa</td><td>/</td><td>componenti sono elencati nel testo</td></tr><tr><td>Acqua distillata: Ampuwa Sp&uuml; ll&ouml; cantato 1.000 ml Plastipur</td><td>Fresenius Kabi</td><td>1088813</td><td></td></tr><tr><td>Megafuge 40R Centrifuga</td><td>Heraeus</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>EDTA provette per il prelievo di sangue</td><td>Sarstedt</td><td>386453</td><td>S-Monovette 7,5 ml, K3EDTA</td></tr><tr><td>UltraPure 0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Life Technologies</td><td>15575-020</td><td></td></tr><tr><td>Terreni ematopoietici (XVIVO)</td><td>Lonza Group Ltd</td><td>BE04-743Q</td><td></td></tr><tr><td>siero umano</td><td>DRK Blutspendedienst, Francoforte/M&nbsp;</td><td>/</td><td>donatori sani con gruppo sanguigno AB; inattivato a caldo prima dell'uso</td></tr><tr><td>Camera di conteggio migliorata Neubauer, linea luminosa</td><td>Marienfeld superior/ LO-Laboroptik Ltd.</td><td>0640030/ 1110000</td><td></td></tr><tr><td>soluzione di blu di tripano (0,4%)</td><td>Invitrogen</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>acido acetico al 3% con blu di metilene</td><td>Stemcell Technologies&nbsp;</td><td>07060</td><td></td></tr><tr><td>Corning 96 Micropiastre trattate TC con fondo a V trasparente</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3894</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 96 Well Fondo Tondo Non Trattato Micropiastre Corning</td><td>&nbsp;</td><td></td><td></td>351177</tr><tr><td>DPBS (Ca2+- e Mg2+-free)</td><td>Gibco Invitrogen</td><td>14190-169</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2153-100G</td><td></td></tr><tr><td>NaN3</td><td>Sigma Aldrich</td><td>08591-1ML-F</td><td></td></tr><tr><td>forbolo 12-miristato 13-acetato (PMA)&nbsp;</td><td>Merck</td><td>524400-1MG</td><td></td></tr><tr><td>ionomicina</td><td>PromoKine</td><td>PK-CA577-1566-5</td><td></td></tr><tr><td>interleuchina 15 (IL-15)</td><td>PeproTech</td><td>200-15</td><td></td></tr><tr><td>Proleuchina S (IL-2)&nbsp;</td><td>Novartis Pharma</td><td>730523</td><td></td></tr><tr><td>Golgi Stop, inibitore del trasporto proteico (contenente Monensina)</td><td>BD Biosciences</td><td>554724</td><td>Questo prodotto può essere utilizzato in combinazione o al posto di Golgi Plug. Deve essere testata la migliore combinazione per l'impostazione sperimentale desiderata.</td></tr><tr><td>Tappo di Golgi, inibitore del trasporto delle proteine (contenente Brefeldina A)</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td></td></tr><tr><td>paraformaldeide</td><td>AppliChem</td><td>UN2209</td><td></td></tr><tr><td>saponina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>citometro a flusso: Canto10C</td><td>BD Biosciences</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo</td><td>TreeStar Inc.</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Graph Pad</td><td>Graph Pad Inc.</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Separatore MACSxpress</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-098-308</td><td></td></tr><tr><td>Kit di isolamento MACSxpress NK</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-098-185</td><td></td></tr><tr><td>Kit per la deplezione degli eritrociti MACSxpress,</td><td>Miltenyi Biotec</td> umano<td>130-098-196</td><td></td></tr><tr><td>Rotatore per tubi MACSmix&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-090-753</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano CD3 APC</td><td>Biolegend</td><td>300412</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano CD3 V450</td><td>BD Biosciences</td><td>560366</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano CD14 PerCP</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-094-969</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano CD14 V450</td><td>BD Biosciences</td><td>560349</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano CD16 PE</td><td>Biolegend</td><td>302008</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano CD16 PerCP</td><td>Biolegend</td><td>302029</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano CD19 PE-Cy7</td><td>Biolegend</td><td>302216</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano CD19 V450</td><td>BD Biosciences</td><td>560353</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano CD45 BV510</td><td>BD Biosciences</td><td>563204</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano CD56 FITC</td><td>Biolegend</td><td>345811</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano CD107a PE Biolegend</td><td></td><td>328608</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano IFN-&gamma; AF-647</td><td>BD Biosciences</td><td>557729</td><td></td></tr><tr><td>anti-umano MIP-1&beta; APC-H7</td><td>BD Biosciences</td><td>561280</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Biolegend</td><td>422801</td><td></td></tr><tr><td>Kit di vitalità riparabile Zombie Violet</td><td>Biolegend</td><td>423113</td><td>marcatore di cellule morte riparabile</td></tr></tbody></table>

citometria a flusso basato su test per il monitoraggio delle funzioni delle cellule nk

Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions

Le cellule natural killer (NK) sono una parte importante del sistema di sorveglianza immunitaria dei tumori umani. Le cellule NK sono in grado di distinguere tra cellule sane e cellule infettate da virus o trasformate in modo maligno a causa di una serie di recettori inibitori e attivanti codificati dalla linea germinale. Al momento del riconoscimento di virus o cellule tumorali, vengono avviate una varietà di diverse funzioni delle cellule NK, tra cui la citotossicità contro la cellula bersaglio e la produzione di citochine e chemochine, che portano all'attivazione di altre cellule immunitarie. È stato dimostrato che le funzioni accurate delle cellule NK sono cruciali per l'esito del trattamento di diverse infezioni virali e malattie maligne. Qui viene descritto un metodo semplice e affidabile per analizzare diverse funzioni delle cellule NK utilizzando un test basato sulla citometria a flusso. Le funzioni delle cellule NK possono essere valutate non solo per l'intera popolazione di cellule NK, ma anche per diversi sottoinsiemi di cellule NK. Questa tecnica consente agli scienziati di studiare facilmente le funzioni delle cellule NK in donatori o pazienti sani al fine di rivelare il loro impatto su diversi tumori maligni e di scoprire ulteriormente nuove strategie terapeutiche.

<html> La strategia di gating per analizzare la degranulazione, citochine e chemochine di tutta la popolazione di cellule NK e tre differenti sottopopolazioni di cellule NK sono illustrati in Figura 1. Risultati rappresentativi di un donatore sano sono illustrati nella Figura 2. Cellule NK senza alcuno stimolo prodotte né IFN-γ né MIP-1β e non hanno espresso CD107a sulla loro superficie <strong...

Un metodo semplice ed affidabile è descritto qui di analizzare un insieme di funzioni delle cellule NK come degranulazione, citochine e chemochine ai differenti sottopopolazioni di cellule NK.

Citometria a flusso basato su test per il monitoraggio delle funzioni delle cellule NK

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and ...

L'obiettivo generale di questa procedura è monitorare le funzioni delle cellule NK mediante un saggio basato sulla citometria a flusso. Le cellule natural killer sono fondamentali per l'esito di varie infezioni virali e malattie maligne. Per monitorare meglio le funzioni delle cellule NK, il nostro laboratorio ha ulteriormente sviluppato un saggio basato sulla citometria a flusso che può essere utilizzato sia nella ricerca scientifica che nelle valutazioni cliniche.Abbiamo ottimizzato il protocollo per consentire l'analisi di piccoli campioni di cellule NK, condizione essenziale per l'utilizzo in pediatria e nei pazienti immunodepressi. Un ulteriore vantaggio di questa tecnica è la possibilità di misurare le funzioni delle cellule NK non solo all'interno dell'intera popolazione di cellule NK, ma anche in diversi sottoinsiemi di cellule NK. Per isolare le cellule NK, iniziare mescolando il volume appropriato di soluzione del cocktail per l'isolamento delle cellule NK con sei-dieci millilitri di sangue periferico intero con EDTA prelevato da un paziente, mediante diverse inversioni.Successivamente, proseguire con l'omogeneizzazione del campione su un rotatore per provette per cinque

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Immunologia e Infezioni

Questo video dimostra l'attività litica delle cellule natural killer contro le cellule bersaglio colorate in modo fluorescente. Il metodo consente la misurazione della citotossicità indotta dalle cellule NK colorando le cellule morte e utilizzando un citometro a flusso per quantificare le cellule bersaglio vive e morte.

Preparazione del campione per il saggio di citotossicità cellulo-mediata Natural Killer per l'analisi citofluorimetrica

Questo video mostra una tecnica basata sulla citometria a flusso che utilizza due fluorocromi per identificare le cellule T CD4+ e CD8+, le cellule T γδ, le cellule B, le cellule natural killer (NK) e i monociti nelle cellule mononucleate del sangue periferico umano (PBMC). Dopo l'incubazione delle cellule con anticorpi coniugati con fluorocromo contro i marcatori di superficie, i sottogruppi cellulari vengono identificati utilizzando una strategia di gating citofluorimetrico ottimale.

Un test di citometria a flusso per identificare sottogruppi di cellule immunitarie nelle cellule mononucleate del sangue periferico

Questo protocollo descrive un sensibile test di citotossicità basato su cellule. Enumerando la diminuzione della frequenza delle cellule T CD4+ bersaglio vive in presenza di un numero crescente di cellule T CD8+ effettrici, questo test consente la valutazione diretta dell'attività citolitica delle cellule T CD8+ antigene-specifiche.

Saggio di citometria a flusso cellulare per misurare l'attività citotossica

Questo lavoro descrive un flusso di lavoro avanzato per la determinazione accurata e rapida della conta delle cellule NK (Natural Killer) e della citotossicità delle cellule NK in campioni di sangue umano.

Flusso analisi di citometria di Natural Killer cellulare Lytic attività nel Sangue umano intero

Un metodo di basato su citometria di flusso per determinare quantitativamente l'attività citotossica delle cellule natural killer di umane è mostrato qui.

Un'analisi di citotossicità di base di citometria a flusso per la valutazione dell'attività delle cellule NK umane

Qui, presentiamo un protocollo di cytometric di flusso per identificare CD4+ e CD8+ T cellule, γδ T, cellule B, cellule NK e monociti nel sangue periferico umano utilizzando solo due fluorocromi anziché sette. Con questo approccio, cinque ulteriori marcatori possono essere registrati sulla maggior parte dei citometri a flusso.

Discriminazione dei sette sottoinsiemi delle cellule immuni di due-fluorocromo flusso Cytometry

L'evasione dell'eradicazione mediata da cellule naturali (NK) da parte delle cellule tumorali è importante per l'inizio e la progressione del cancro. Qui, presentiamo due protocolli non basati sulla radioattività per valutare la citotossicità mediata dalla cellula NK verso le cellule tumorali epatiche. Inoltre, viene presentato un terzo protocollo per analizzare la migrazione delle celle NK.

Misurazione della citotossicità e della migrazione mediata da cellule Killer naturali nel contesto delle cellule tumorali epatiche

Un protocollo per lo studio di eventi guidati da FcγRIIIa da anticorpi terapeutici in cellule natural killer umane è descritto qui. Questa piattaforma di stimolazione artificiale consente l'interrogazione delle funzioni emozionali a valle come la degranulazione, la produzione di chemochine / citochine e le vie di segnalazione mediate dalle porzioni FcγRIIIa e Fc degli anticorpi coinvolti nel legame.

Valutazione degli eventi delle cellule natural killer umane guidati dall'impegno di FcγRIIIa nella presenza di anticorpi terapeutici

Presentiamo due diversi protocolli di colorazione per il rilevamento del ligando NKG2D (NKG2DL) nei campioni di leucemia mieloide acuta primaria umana (AML). Il primo approccio si basa su una proteina di fusione, in grado di riconoscere tutti i ligandi noti e potenzialmente ancora sconosciuti, mentre il secondo protocollo si basa sull'aggiunta di anticorpi anti-NKG2DL multipli.

Due approcci citometrici a flusso del rilevamento della superficie del ligando NKG2D per distinguere le cellule staminali dalle sottopopolazioni di massa nella leucemia mieloide acuta

Questo protocollo fornisce un flusso di lavoro in vitro standardizzato per la misurazione coerente della citotossicità naturale, mediata dai recettori degli antigeni chimerici e dipendente dagli anticorpi delle cellule naturali umane, utilizzando imaging a cellule vive e citometria di flusso.

Quantificazione della citotossicità delle cellule NK potenziata dai recettori antigenici chimerici e dagli anticorpi terapeutici tramite imaging a cellule vive e citometria a flusso

Scopri un saggio di citometria a flusso per analizzare le funzioni delle cellule NK, ottimizzato per campioni di piccole dimensioni. Questo metodo è ideale per pazienti pediatrici e immunodeficienti.

Citometria a flusso basato su test per il monitoraggio delle funzioni delle cellule NK

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