Name: פולשנית רוחבי אבי העורקים התכווצות עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: למד שיטת MTAC להשגת היפרטרופיה של החדר השמאלי בעכברים ללא הנשמה מלאכותית. טכניקה פולשנית מינימלית זו מאפשרת מחקרי תפוקה גבוהה בקרדיולוגיה ובחנת שינויים מיוקרדיאליים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להכיר במתקן למחקר באוניברסיטת במדעי החיים (ULS) של האוניברסיטה הפוליטכנית של הונג קונג למתן מערכת אולטרסאונד Vevo 2100. תודה מיוחדת לד&quot;ר Chunyi וון מאגף הבינתחומי להנדסה ביו-רפואית, אוניברסיטת פוליטכניק הונג קונג, לאימונים ואת ההנחיה. עבודה זו נתמכה על ידי הממשלה HK RGC גרנט GRF 17127215, 764,812 ו HKU6 / CRF / 11G לבילי KC צ&#39;או.

<html> הפרוטוקול פועל בהתאם להנחיות של ועדת על ושימוש בחיות חיה הוראה ומחקר (CULATR) באוניברסיטת הונג קונג. 1. הכנה מבצע באתר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את אתר פעולה עם אלכוהול איזופרופיל 75%. התאם את כרית חימום בטמפרטורה עד 37 מעלות צלזיוס, כדי למנוע שינויי לב ושיעורי נשימה של חית הנושא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מכשירי ניתוח עיקור מעקר עקירה הכביד ב 121 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות או על ידי שיטות מתאימות אחרות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח 2 - 4 30-מד מחטים עקומה אותם עם בעל מחט, כפי שניתן לראות באיור 1, כדי להפוך את כלי להפרדת קשירה ורקמות לשימוש מפשק. הר מחט חברה-מעוקל על מוליך כותנה לשימוש בניתוחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בלאנט מחט 27-מד עקום 90º עם בעל המחט. להחליק את הקצה על ידי שפשוף משטח קשה לעשות spacer 0.4 מ&quot;מ בשלב קשירה. </li></ol>התחת = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. הכנת בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכבר 2 בן חודש, זכר, 22-25 גרם C57BL / 6N עם תערובת קטמין ו xylazine מתאים ביחס למשקל גוף: 100 מ&quot;ג / קילו + 10 מ&quot;ג / קילו ip אשר את ההרדמה עם רפלקס זנב הקמצוץ השלילי . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת שיער על הצוואר והחזה הקדמי עם יישום 2 עד 3 דקות של קרם מקריח. הסר את השמנת עם מים חמים מוליך כותנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחת עיניים או ג&#39;ל לעיניים של החיה כדי למנוע התייבשות של הקרנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את החיה על כרית חימום במצב שכיבה ולנהל מעקב תוך ניתוח, ויש להקפיד לשמור תיעוד מתאים בכל מרווח של 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש קלטת נייר כירורגית כדי להבטיח את הגפיים אל כרית חימום כדי לשמור על בעלי החיים במקום הנכון בזמן הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את העור לסירוגין עם אלכוהול פתרון povidone- יוד שלוש פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש dr סטריליקוף עם שדה פעולה חשוף על מנת למנוע זיהום. יש להשתמש בכפפות סטריליות חדשות עבור כל עכבר ולפי צורך. </li></ol> 3. נוהל קשירה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את העור של העכבר במיקום קו האמצע של הצוואר והחזה עם אזמל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את בלוטת התריס לכיוון הראש ידי הפרדת רקמות חיבור בעדינות במספריים קהים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את שכבת השריר על קנה הנשימה על קו האמצע לעבר שני הצדדים עם המחטים המעוקלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת המספריים הבוטים, לחתוך את החזה ועד הצלע השנייה (כ 5 מ&quot;מ). פתח את החתך עם מפשק או מלקחיים מעוקלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את האונות התימוס ופועלים כל אחד בתחומו קיר החזה התחתון על ידי הפרדת רקמות חיבור עם מחט המעוקל; הקשת הרוחבית אב העורקים ושני עורקי ראש תהיינה גלויות בבירור בנקודה זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את המחט המעוקלת מתחת לקשת ולנקב בין בדפנות כלי הדם ורקמות חיבור בצד השני על ידי מוגלההינג הראש העקום החוצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מחט מעוקל, ומשוך תפר monofilament 6-0 מתחת לקשת אבי העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את spacer בלולאה ולתקן תפר במקום עם א-בקשר כפול. הסר את spacer בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אשר התכווצות מוצלחת עם עמדת הקשר ו לחתוך את הקצוות של התפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את בית החזה באמצעות 6/0 תפר משי מעוטר בדגם תפר קטע פשוט. סגור את העור עם תפר monofilament 6/0 בתבנית תפר מתמשכת. </li></ol> טיפוח 4. לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל פתרון povidone- יוד לאתר תפר והמקום חיה בכלוב מחומם מראש להתאוששות וניטור שלאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק עצירות (0.05 - 0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג SC כל 12 שעות) לאחר החיה שב להכרתו כדי להקל על הכאב ולספק את העכבר עם מזון רך המתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוחזר לבעליו אור 12-h / חדר חושך מחזור לאחר החלמה מלאה. </li></ol> 5.אקו: אישור של קשירה ומדידות מוצלחות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שבוע, להרדים את העכבר בעבר התאגד עם 3 - 5% isoflurane, לזירוז, ו 1 - 1.5%, לצורך תחזוקה, עם קצב זרימת חמצן 1 ליטר / דקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת שיער החזה באמצעות קרם מקריח. ביסודיות להסיר את השמנת עם מים חמים מוליך כותנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את העכבר במצב שכיבה על פלטפורמת טיפול בבעלי חיים, שמרו על 37 מעלות צלזיוס. החל ג&#39;ל האלקטרודה הכפות ואת קלטת אותם לרפד עם אלקטרודות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ג&#39;ל אולטרסאונד לחזה העכבר. עם בדיקה של 40 מגה-רץ MS550D ומערכת אולטרסאונד בתדירות גבוהה, לבצע דופלר צבע וסריקת דופלר פעם-גל משמאל עורקי תרדמה תקינים, כמו גם על קשת אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש-מצב B, לאתר את החדר השמאלי. שימוש M-Mode, סיסטולי ודיאסטולי עובי דופן ניתן למדוד. השתמש Cine חנות חנות מסגרת להציל נתונים ותמונות כנדרש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> UB-Mode לשיר, לאתר את העורק הראשי משותף שמאל לפני נקודת הסתעפות. השתמש גל פעמו דופלר צבע להעריך את הזרימה. חזור עם העורק הראשי הנכון בנקודה דומה. שמור את התמונות ב Cine חנות מצבי חנות מסגרת לנתח מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הטה את פלטפורמת בעלי חיים טיפול לקצה השמאלי כך העכבר נמצא במצב משכוב שמאל. מניחים את החללית על העכבר, 30 ° לקזז מתוך עמדה במקביל ראש במיקום parasternal, ולטפל X ו- Y כדי למצוא את קשת אבי העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את ההתכווצות. השתמש במצב דופלר צבע כדי להפוך את האתר של מועקה יותר לעין, כפי דם יהיה זורם דרך ערוץ צר בין הנקודה שבה שני עורקי הראש להסתעף מן קשת אבי העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש גל פעמו דופלר צבע למדידת מהירות זרימת השיא. השתמש Cine חנות חנות מסגרת להציל נתונים ותמונות כנדרש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר החיה להתאושש על כרית חימום במצב המועדים.מחזירים את החיה לכלוב המקורי בחדר מחזור 12 שעות אור / חושך לאחר שהוא התאושש לחלוטין מן ההרדמה. </li></ol>

<ol><li>Rockman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88 (18), 8277-8281 (1991).</li>
<li>de Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20410870">Transverse aortic constriction in mice.</a> J Vis Exp. (38), (2010).</li>
<li>Hu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+aortic+banding+in+mice%3A+effects+of+altered+cardiomyocyte+insulin+signaling+during+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 285 (3), H1261-H1269 (2003).</li>
<li>Shimizu, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excessive+cardiac+insulin+signaling+exacerbates+systolic+dysfunction+induced+by+pressure+overload+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Excessive cardiac insulin signaling exacerbates systolic dysfunction induced by pressure overload in rodents.</a> J Clin Invest. 120 (5), 1506-1514 (2010).</li>
<li>Tarnavski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+surgical+models+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse surgical models in cardiovascular research.</a> Methods Mol Biol. 573, 115-137 (2009).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+murine+model+for+the+study+of+reverse+cardiac+remodelling%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Cardiol%22%5BJournal%5D)">A modified murine model for the study of reverse cardiac remodelling.</a> Exp Clin Cardiol. 18 (2), e115-e117 (2013).</li>
<li>Hartley, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doppler+estimation+of+reduced+coronary+flow+reserve+in+mice+with+pressure+overload+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Doppler estimation of reduced coronary flow reserve in mice with pressure overload cardiac hypertrophy.</a> Ultrasound Med Biol. 34 (6), 892-901 (2008).</li>
<li>Scherrer-Crosbie, M., Thibault, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiography+in+translational+research%3A+of+mice+and+men%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Echocardiogr%22%5BJournal%5D)">Echocardiography in translational research: of mice and men.</a> J Am Soc Echocardiogr. 21 (10), 1083-1092 (2008).</li>
<li>Faerber, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+heart+failure+by+minimally+invasive+aortic+constriction+in+mice%3A+reduced+peroxisome+proliferator-activated+receptor+gamma+coactivator+levels+and+mitochondrial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: reduced peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator levels and mitochondrial dysfunction.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 141 (2), 492-500 (2011).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+Cardiac+Morphological+and+Functional+Changes+in+Mouse+Model+of+Transverse+Aortic+Constriction+by+Echocardiographic+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assessment of Cardiac Morphological and Functional Changes in Mouse Model of Transverse Aortic Constriction by Echocardiographic Imaging.</a> J Vis Exp. (112), (2016).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

רוקמן ועמיתיו המציאו את השיטה הראשונה עבור banding אבי העורקים כשיטה ללמוד עומס הלחץ בלב. מחקר אפשר זה להתחיל לחשוף את ההשלכות התאיות ומולקולריות של כשל יתר לחץ דם ולב 1. שיטה משופרת, פולשנית התכווצות עורקים רוחבית (MTAC), מספקת שיטה מוכנה לשתף פעולה, שזמן גרמן האינדוקציה של עומס לחץ של חדר שמאל ואי ספיקת לב, ללא חסרונות של מועקת אב העורקים הרוחבית הקונבנציונלית 9. ההליך עצמו יכול להתבצע באופן משמעותי יותר בקלות עם שיעורי הישרדות גבו...

<html> המטרה הכוללת של מאמר זה היא להדגים כיצד רוחבי התכווצות עורקת (TAC) בעכברים יכולה להיות שונה כדי לייצר ניתוח פשוט יותר ויותר ומועיל. TAC הוצג לראשונה בשנת 1991 1 ואפשר ביולוגים מולקולריים ללמוד את המסלולים התאיים ומולקולריים שמובילים היפרטרופיה של החדר השמאלי ואת לאי ספיקת לב, בעיקר חיות קטנות עם הגנום מניפולציות 2, 3, 4, 5, 6. למרות יעילותה בהפקת עומס הלחץ הרצוי, הטכניקה מוגבלת בסופו של דבר על ידי הקושי בביצוע ההליך ועל ידי שיעור ההישרדות הנמוך שלה. מנתח ניצוח TAC חייב להיות מסוגל לבצע אינטובציה endotracheal, פתיחת בית החזה, ולהשתמש במערכות להנשמה מלאכותית כדי למנוע ריאות קריסת 1. תוכן &quot;&gt; לעתים קרובות, שיטה פשוטה ופחות פולשני היא רצויה. כתוצאה מכך, התכווצות עורקים רוחבית פולשנית (MTAC) תוכננה 3. למרות התוצאה (במיוחד, היפרטרופיה של חדר שמאלי) היא זהה, ההליך כרוך מנגנונים פחות משמעותי ופחות ניזק לבעל החיים. MTAC מוכיחה להיות שיטה רצויה כי יש שיעור הישרדות גבוה יותר, מעל 90%, ויש לו זמן פעולה של רק 15 עד 25 דקות. המקרים הנדירים של מוות לאחר ניתוח מוצלח יכול להיות מיוחס מדי התכווצות -tight של קשת אבי העורקים, וכתוצאה מכך העומס של החדר השמאלי אדיר והפחתת קטלנית של אספקת הדם לאיברים קריטיים כגון הכליות. לאחר שהסתיים ההליך יושלם, אקוקרדיוגרפיה ניתן להשתמש כדי להעריך את ההצלחה של פסים ואת מורפולוגיה הלב ותפקודו. מערכת אולטרסאונד בתדירות גבוהה יכולה להיות מנוצלת כדי למדוד את הקוטר וזרימת שינויי השמאל וימיןתרדמה עורקת, כדי להמחיש את התכווצות קשת אב עורקים למדידות מהירות זרימת שיא, וכדי לקבוע את עובי קיר החדר השמאלי ופרמטרים תפקודיים 7, 8. לאחר המתת חסד, האיברים ניתן לאסוף גם עבור מחקרים histopathological עם hematoxylin והכתים eosin מכתים קולגן Picrosirius, שהאחרון שימושי במיוחד עבור תצפית של סיסטיק.

<table><tbody><tr><td><חזק>1 אינץ' 30 מד מחטים</חזק></td><td>BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי 07417, ארה"ב.&nbsp;</td><td>305128</td><td>מעוקל כמו בהליך ו<חזק>איור 1</חזק></td></tr><tr><td><חזק>27 מחט מד</חזק></td><td>BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי 07417, ארה"ב.</td><td>301629</td><td>הפוך קהה וחלק למרווח</td></tr><tr><td><חזק>6/0 Dafilon</td><td>B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, גרמניה.</td><td>C0933066</td><td></td></tr><tr><td>6/0 Silkam</td><td>B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, Germany.</td><td>C0762067</td><td></td></tr><tr><td><חזק>כפפות סטריליות</חזקות></td><td>A.R. Medicom, Inc (אסיה), הונג קונג.</td><td></td><td></td></tr><tr><td><מוליך כותנה חזק></חזק></td><td>מאנינגס, מפרץ המחצבה, הונג קונג.</td><td></td><td>מרכז קניות מקומי</td></tr> <tr><td>Depilatory Cream</td><td>Veet (הונג קונג), Kwun Tong, Kowloon,</td><td>מרכז קניות מקומי</td> של הונג קונג<td></td></tr><tr><td>Lexer-Baby Scissor</td><td>FST, קולומביה הבריטית V7H 0A6, קנדה.</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מלקחיים מעוקלים של איריס מעוקל</חזק></td><td>FST, קולומביה הבריטית V7H 0A6, קנדה.</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מחזיק מחט מיקרו אולסן-הגר</חזק></td><td>WPI, סרסוטה, פלורידה 34240, ארה"ב.&nbsp;</td><td>501989</td><td></td></tr><tr><td>Stereo Micrioscope</td><td>WPI, סרסוטה, FL 34240, ארה"ב.&nbsp;</td><td>PZMIII-BS</td><td></td></tr><<tr><td>strong>GenTeal ג'ל עיניים</td><td>Novartis, מזרח הנובר, ניו ג'רזי 07936, ארה"ב.&nbsp;</td><td></td><td>בית מרקחת מקומי</td></tr><tr><td><כרית חימום חזקה>חזקה</חזקה></td><td>קנט סיינטיפיק קורפוריישן, טורינגטון, CT 06790, ארה"ב.&nbsp;</td><td>DCT-20</td><td></td></tr><tr><td><סרט כירורגי חזק></חזק></td>יחידת <td></td><td></td><td>חיות מעבדה</td></tr><tr><td><חזק>קטמין וקסילזין</חזק></td><td>יחידת</td><td></td><td></td> חיות מעבדה</tr><tr><td><חזק>בטאדין</חזק></td><td>יחידת</td><td></td><td></td> חיות מעבדה</tr><tr><td><חזק>בופרנורפין</חזק></td><td>יחידת</td><td></td> <td>חיות מעבדה</td></tr></tbody></table>

פולשנית רוחבי אבי העורקים התכווצות עכברים

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

התכווצות עורקים רוחבית פולשנית (MTAC) היא שיטה רצויה יותר עבור היצרות של אב העורקים הרוחביים בעכברים מאשר התכווצות עורקים רוחבית פתוח חזה סטנדרטי (TAC). למרות התכווצות רוחבית אב עורקים היא שיטה מאוד פונקציונלית עבור האינדוקציה של לחץ גבוה בחדר השמאלי, הוא הליך קשה יותר וממושך בשל שימושו של אוורור מלאכותי עם אינטובציה לקנה הנשימה. TAC הוא לעתים קרובות גם פחות שאפשר לחיות איתו, כשיטה החדשה, MTAC, לא מחייב החיתוך של הצלעות ושרירים צלעי ולא אינטובציה לקנה נשימה עם התקנת אוורור. בשנת MTAC, בניגוד פתיחת בית חזה כדי לגשת אל חלל החזה, קשת אב העורקים הוא הגיע דרך חתך קו אמצע בצוואר הקדמי. בלוטת התריס משוך לאחור כדי לחשוף את חריץ sternal. עצם החזה הוא לאחר מכן לחתוך עד לרמת הצלע השנייה, ואת קשת אב העורקים הוא הגיע פשוט על ידי הפרדת רקמות התימוס חיבור. מניתן לסגור שם, יכול להיות עטוף תפר סביב קשת וקשר עם spacer, ולאחר מכן לחתוך את העור sternal. MTAC היא דרך הרבה יותר מהר ופחות פולשני כדי לגרום ליתר לחץ דם חדר שמאלי ומאפשרת את האפשרות ללימודי תפוקה גבוהה. ההצלחה של המועקה ניתן לאמת באמצעות אקו בתדר גבוה טרנס-חזה, במיוחד דופלר צבע דופלר פעם-גל, כדי לקבוע את מהירויות הזרימה של קשת אב העורקים והשאירה עורקי תרדמה תקינים, הממד של כלי הדם, הפונקציה והמורפולוגיה של החדר השמאלי. התכווצות מוצלחת תהיה גם לגרום לשינויי histopathological משמעותיים, כגון היפרטרופיה תא שריר לב עם סיסטיק ביניים perivascular. כאן, ההליך של MTAC מתואר, המדגים כיצד שינויי הזרימה וכתוצאה מכך עורקי הראש ניתן לבדוק עם אקו, מורפולוגיה ברוטו, ושינויי histopathological בלב.

MTAC מאפשר אינדוקציה של יתר לחץ דם משמעותי החדר השמאלי מבעוד מועד. כפי שניתן לראות באיור 1, הכנת הכלים העיקריים עבור ההליך היא פשוט ומינימליסטי, המחייב רק 2 - 4 30-מד מחטים להיות כפופים שנערכה במקום עם צינור פוליאוריטן. ההליך הכירורגי עצמו הוא גם פחות מסובך, לעומת TAC, והוא יכול להתבצע בקלות. לאחר התריס כבר חזר בו, עצם החזה הוא לגז...

התכווצות העורקים רוחבי פולשנית (MTAC) חוסך את עיקרי התכווצות העורקים רוחבי רגיל (TAC) תוך ביטול השימוש מאוורר עם אינטובציה לקנה הנשימה. זה מוכיח להיות שיטה רצויה מאוד ללימודי תפוקה גבוהה על עומס של חדר שמאלי, בעיקר חקר תרגום.

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

המטרה הכללית של הליך זה היא להשרות היפרטרופיה של החדר השמאלי על ידי היצרות של קשת האביון הרוחבית באמצעות הליך כירורגי פשוט שאינו דורש הנשמה מלאכותית. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הקרדיולוגיה בנוגע לעיצוב מחדש של השריר הלבבי (myocardial remodeling), היפרטרופיה לבבית, אפופטוזיס ופיברוזיס, ומצבים של עומס לחץ בחדר השמאלי. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא שומרת על היסודות של היצרות רגילה של קשת האביון הרוחבית תוך ביטול הצורך במנשם ובאינטובציה של קנה הנשימה.לפני תחילת הפרוצדורה, השתמשו בתומך מחט כדי לכופף את הקצוות של שתיים עד ארבע מחטים בכילוי (gauge) 30, והרכיבו את המחטים על מקלוני צמר 개בדיים בודדים. לאחר מכן, קצצו את חודו של מחט בכילוי (gauge) 27 והשתמשו בתומך המחט כדי לכופף את הקצה בזווית של 90 מעלות. לאחר מכן, השטיחו את הקצה על משטח קשיח כדי ליצור ספייסר (spacer) ברוחב 0.4 millimeter.לאחר אישור רמת הסדציה המתאימה על ידי היעדר תגובה לכיסוץ של בהונות, מרחו משחה על עיני בעל החיים והניחו את העכבר על פד חימום המחומם ל-37 degrees Celsius במצב שכיבה על הגב. קבעו את הגפיים לפד החימום באמצעות סרט הדבקה כירורגי. לאחר מכן, חטאו את העור באמצעות שלושה ניגובים רצופים של תמיסות אלכוהול ופובידון-יוד, והניחו מעל בעל החיים כיסוי סטרילי עם שטח ניתוח חשוף.כדי להתחיל בהליך הליגציה, השתמשו בסקאלפל סטרילי כדי לפתוח את העור במיקום קו האמצע של הצוואר והחזה. לאחר מכן, תחת מיקרוסקופ דיסקציה, השתמשו במספריים קהים כדי להפריד בעדינות את רקמות החיבור ולמשוך את בלוטת התריס לכיוון הראש. באמצעות מחטים קמורות, הפרידו את שכבת השריר על הקנה בקו האמצע, לכיוון שני צדדיו של בעל החיים, והשתמשו במספריים קהים כדי לחתוך את עצם החזה בערך חמישה מילימטרים עד לדרישה השנייה.פתחו את החתך באמצעות פינצטה קמורה והשתמשו במחט קמורה כדי להפריד את אונויות התימוס ואת דופן בית החזה התחתונה. הקשת האורטלית הרוחבית ושני העורקים הקרוטידיים יהיו גלויים בבירור בשלב זה. הכניסו את המחט הקמורה מתחת לקשת והשתמשו בקצה שלה כדי ליצור פירפורציה (חור) בין דופן כלי הדם לבין הרקמה החיברית בצד השני.השתמשו במחט כדי להניח תפר מونو-פילמנט 6-0 מתחת לקשת האורטות, והניחו את הספייסר (spacer) שהוכן מראש בתוך הלולאה. קבעו את התפר במקומו באמצעות קשר כפול והסִירו בעדינות את הספייסר. לאחר וידוא של הידוק מוצלח של הקשר, גזרו את קצות התפר והשתמשו בתפר משי 6-0 כדי לסגור את דופן בית החזה בתבנית תפריים קטועים פשוטים, ולאחר מכן סגרו את העור באמצעות תפר מونو-פילמנט 6-0 בתבנית תפר רציף.לאחר מכן, מרחו תמיסת פובידון-יוד על אתר התפירה והעבירו את בעל החיים לכלוב שחומם מראש לצורך התאוששות ומעקב לאחר הניתוח. לאחר שבוע, מרחו ג'ל אלקטרודות על כפות רגליו של בעל החיים הניסויי והדביקו אותן בעזרת סרט הדבקה למשטח חימום המחומם ל-37 degrees Celsius עם אלקטרודות. לאחר מכן, מרחו ג'ל אולטרסאונד על חזה העכבר ובחרו במצב B-mode במערכת אולטרסאונד בתדר גבוה.בעזרת מתמר MS550D בתדר 40 megahertz, אתרו את החדרי השמאלי. לאחר מכן, במצב M-mode, מדדו את עובי הדופן הסיסטולית והדיאסטולית. חזרו למצב B-mode כדי לאתר את העורק הקרוטיד השמאלי המשותף לפני נקודת הפיצול, והשתמשו במיפוי דופלקס עם גל פולסי (pulsed-wave) וצבע (color doppler) כדי להעריך את הזרימה, תוך שמירת התמונות לצורך ניתוח מאוחר יותר לפי הצורך.הטה את פלטפורמת הטיפול בבעל החיים שמאלה עד הקצה, כך שהעכבר יהיה במנח שכיבה על הצד השמאלי (left decubitus), ומקם את המתמר בזווית של 30 מעלות ביחס למיקום מקביל לראש, במיקום פאראסטרנלי (parasternal). התאם את מומנטי ה-x וה-y כדי לאתר את קשת האורטה, ואתר את ההיצרות באמצעות מצב דופלר צבעוני (color doppler) כדי להפוך את מיקום ההיצרות לנראה יותר. באמצעות דופלר גל פועם (pulsed-wave) ודופלר צבעוני, מדוד את מהירות הזרימה השיא בנקודה שבה הדם זורם בין שני העורקים הקרוטידיים המת分לים מקשת האורטה.לאחר מכן, יש לאפשר לבעל החיים להתאושש על משטח חימום במצב שכיבה על הבטן תחת ניטור עד להחלמה מלאה. היצרות אורטלית רוחבית זעיר-פולשנית, או MTAC, יוצרת באופן עקבי עומס לחץ בחדר השמאלי בעכברים שקושרו, עם אבאלץה רוחבית מוצרה הנראית בבירור ומהירות שיא של זרימה מוגברת דרך אתר ההיצרות. להשוואה, בעל חיים שעבר ניתוח דמה (sham) אינו מראה היצרות ניכרת ומהירות שיא של זרימה נורמלית.כתוצאה מהליגציה, מהירות הזרימה עולה באופן משמעותי בעורק התריס הימני, ולחץ עלול להצטבר באורטה העולה ובלב, דבר המוביל להיפרטרופיה של החדר השמאלי ומפחית משמעותית את הזרימה בעורק התריס השמאלי המשותף. לעומת זאת, בעכבר שעבר ניתוח דמי (sham), נצפה זרימת דם כמעט זהה בעורקים התריס הימני והשמאלי. הפרמטרים הנובעים מההיפרטרופיה ניתנים לצפייה בקלות בלבבות המוגדלים והמעוותים באופן משמעותי של עכברים שעברו ליגציה בשיטת MTAC, וכן בנישום הכללי המופחת שלהם.שינויים אלו נצפים עוד יותר ברמה התאית, כולל גודל תאי שריר לב מוגבר ופיברוזיס בעכברי MTAC, בהשוואה לבעלי חיים שאינם קשוריים. ברגע שהטכניקה נשלטת, ניתן להשלימה בחמש עד עשר דקות, אם היא מבוצעת כראוי. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להיזהר כדי לא לפגוע בכלי הדם.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכישו הבנה טובה לגבי הדרך שבה ניתן להשרות היפרטרופיה של החדר השמאלי באמצעות היצרות רוחבית של קשת האבי העורקי, תוך שימוש בהליך כירורגי פשוט שאינו דורש הנשמה מלאכותית.

minimally-invasive-transverse-aortic-constriction-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

היצרות העורקים רוחבי (TAC) על העכבר הוא מודל ניסיוני נפוץ ללמוד המנגנונים היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב הפיתוח. כאן אנו מתארים נהלים להתכווץ אבי העורקים כדי ליצור תואר לשחזור של היפרטרופיה לב בעכברים.

אבי העורקים צמצום רוחבי של עכברים

בסרטון זה אנו מדגימים פרוטוקול ניסיוני להתכווצות זעיר פולשנית של אבי העורקים הרוחבי בעכברים כדי לבחון אי ספיקת לב הנגרמת כתוצאה מעומס יתר.

פסים רוחביים של קשת אבי העורקים במודל עכבר: טכניקה זעיר פולשנית בעכברים להשראת לחץ גבוה בחדר השמאלי

מטרת פרוטוקול זה היא להעריך לב פולשנית לשינויים מבניים ותפקודיים במודל של עכברים של מחלת לב נוצר על ידי התכווצות רוחבי אבי העורקים, באמצעות B ו- M-mode אקוקרדיוגרפיה וצבע / הדמיה דופלר גל הדופק.

שינויים הערכה לב מורפולוגי תפקודי עכבר דגם של מועקה הרוחבית אב עורקים על ידי הדמית אקו

המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד הטכניקה של פולשנית רוחבי אבי העורקים הכיווץ (טק) בעכברים. על ידי חיסול של צנרור ואוורור אשר הכרחיות עבור הליך רגיל בשימוש נפוץ, טק פולשנית ומפשט את תהליך פעיל ומפחית את הלחץ על החיה.

הטכניקה של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים עבור אינדוקציה של גדילת

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של אבי העורקים רוחבי הכיווץ (טק) באמצעות ניקור לרוחב. טכניקה זו היא הליך ניתוחי החזה פולשנית, סגור במטרה לדמות עומס ואי ספיקת לב בעכברים ניצול ההגדרות הרגילות של מעבדה טק.

דגם סגור-החזה לזירוז רוחבי. התרחבות אבי העורקים בעכברים

פרוטוקול זה מציג שיטה משופרת להשגת היפרטרופיה שריר הלב חולפת עם תפר נספג, המדמה ירידה היפרטרופיה חדרית שמאל לאחר הסרת עומס לחץ. זה יכול להיות בעל ערך עבור המחקרים על תנאי היפרטרופי שריר הלב.

הפעלת התכווצות אבי העורקים רוחבית עם תפר נספג להשגת היפרטרופיה שריר הלב ארעית

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקה שונה ופשוטה עם הליך היצרות אבי העורקים הרוחבי (TAC) זעיר פולשני באמצעות retractor מתוצרת עצמית. הליך זה יכול להתבצע ללא מכונת הנשמה או מיקרוסקופ ומציג עומס לחץ, המוביל בסופו של דבר היפרטרופיה לבבית או אי ספיקת לב.

טכניקה שונה להתכווצות רוחבית של אבי העורקים בעכברים

העכברים הטרנסגניים להיות שימושי מאוד ייחוס תפקיד פיזיולוגי ל הגנים. כמו מחקר, כגון בכלל, מחקרים תפקודיות של דרכי הנשימה, במיוחד, עברו שינוי מדהים לכיוון מודלים Murine. כאן אנו מספקים...

במדידות חוץ גופית של היצרות קנה הנשימה באמצעות עכברים

אנו מתארים הליך בשלבים ליצירת עומס יתר לחץ והיפרטרופיה של חדר שמאלי בחולדות Wistar ידי התכווצות של אב העורקים עולים באמצעות קליפ מתכתי קטן. דגם זה נעשה שימוש נרחב ללימוד שינויי שיפוץ במהלך היפרטרופיה לבבית ולזיהוי והערכה של אסטרטגיות לנסיגה של שינויים כאלה.

עולה אבי העורקים תעוקה בחולדות ליצירת עומס יתר לחץ לב היפרטרופיה הדגם

הטכניקה המבוססת לחסן xenografts orthotopic פולשנית העיקרית לסרטן שלפוחית ​​השתן דורשת laparotomy והתגייסות של שלפוחית ​​השתן. הליך זה גורם תחלואה משמעותית בעכברים, הוא מאתגר מבחינה טכנית ודורש זמן רב. לפיכך, אנו פיתחנו דיוק גבוה, בגישה מלעורית ניצול הנחיית אולטרסאונד.

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן xenografts

למד שיטת MTAC להשגת היפרטרופיה של החדר השמאלי בעכברים ללא הנשמה מלאכותית. טכניקה פולשנית מינימלית זו מאפשרת מחקרי תפוקה גבוהה בקרדיולוגיה ובחנת שינויים מיוקרדיאליים.

פולשנית רוחבי אבי העורקים התכווצות עכברים

גלה סרטונים נוספים