فيديو بروتوكول تتبع الشاشة رادع الكيميائيين لعسل النحل

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقييم الموانع الكيميائية لنحل العسل. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الحشرات ، مثل المواد الكيميائية التي تتلاعب بسلوك نحل العسل بعيدا عن مصدر الغذاء. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هي أنه يوفر نهجا بسيطا لفحص الموانع الكيميائية لنحل العسل بطريقة سريعة وسهلة نسبيا.

لتحضير مكعب سكر الاغاروز لمعالجة التحكم ، اسكب محلول سكر الاغاروز شبه المبرد في قالب قارب الوزن. للمعالجة الطاردة ، أضف الكمية المطلوبة من المركب إلى محلول الاغاروز شبه المبرد. في هذا العرض التوضيحي ، يتم استخدام تركيز نهائي قدره 1٪ DEET.

قم بتدوير القارورة لخلطها في المركب ثم اسكب المحلول في قالب قارب الوزن. بعد تبريد مكعبات السكر والأغاروز ، قم بإزالة المكعبات الصلبة من قوالب قارب الوزن وضعها في وعاء بلاستيكي بمنشفة ورقية مبللة. ضع الحاويات في الثلاجة للتخزين.

في برنامج التتبع، انتقل إلى إعدادات التجربة في شريط مستكشف التجربة، الموجود على يسار الشاشة. تأكد من تحديد الكاميرا الصحيحة وأن تسجيل الفيديو يتمركز على ساحات طبق بتري. إذا كان تسجيل الفيديو بحاجة إلى التوسيط ، فانتقل إلى إعدادات الكاميرا ، ضمن عناصر التحكم في منطقة الاهتمام وحدد خيارات Center X و Center Y.

ضمن إعدادات التجربة، قم بتغيير عدد الساحات إلى 16. ضمن الميزات المتعقبة، حدد اكتشاف نقطة المركز. ثم حدد إعدادات الساحة لإعداد الساحة المطلوبة للفحص.

ضع أطباق بتري ال 16 بنمط أربعة × أربعة فوق صندوق إضاءة موجود أسفل الكاميرا. في إعدادات الساحة ، استخدم زر الإمساك بالخلفية الموجود على لوحة الأدوات على الجانب الأيمن لالتقاط صورة ل 16 طبقا من أطباق بتري. سيتم استخدام هذا كقالب لإعداد الساحة.

حدد إنشاء قطع ناقص من شريط الأدوات أعلى شاشة إعدادات الساحة وقم بإنشاء دائرة تطابق قطر أحد أطباق Petri في الصورة التي تم التقاطها. ضع الساحة علامة واحدة في الدائرة. ثم حدد مجموعة المنطقة الأولى ، الموجودة أسفل الساحة الأولى في لوحة الأدوات على الجانب الأيمن.

حدد إنشاء مستطيل من شريط الأدوات أعلى الشاشة. قم بإنشاء مربع 30 × 30 بكسل باستخدام هذه الأداة. ثم ضعها في منتصف الدائرة التي تم إنشاؤها في الخطوة السابقة.

حدد إضافة منطقة من شريط الأدوات العلوي ثم انقر في منتصف المربع. حرك المنطقة علامة واحدة بحيث تكون في المربع. بعد ذلك ، حدد الساحة واحدة في لوحة الأدوات على الجانب الأيمن ثم انقر فوق تكرار الساحة الكاملة.

من القائمة المنسدلة ، حدد جميع الساحات الأخرى ثم انقر فوق موافق. انقل إعدادات الساحة المكررة إلى أطباق بتري المتبقية في الصورة التي تم التقاطها. ثم حدد الساحة الأولى وحدد معايرة المقياس على شريط الأدوات العلوي. ارسم خط المعايرة عبر قطر الساحة طبق بتري واحد.

قم بتغيير قياس القطر إلى تسعة سنتيمترات. حدد التحقق من صحة إعدادات الساحة على لوحة الأدوات على الجانب الأيمن. بعد ذلك ، حدد إعدادات الكشف على شريط التحكم على اليسار.

حدد إعدادات الكشف واحدة ثم حدد القياس الرمادي في القائمة المنسدلة الموجودة في مربع الأدوات على الجانب الأيمن. تحت الكشف، اضبط النطاق بحيث يكون صفرا إلى 83. انقر بزر الماوس الأيمن فوق إعدادات الكشف وقم بإجراء إعداد جديد باسم إعدادات الكشف الثانية.

تأكد من استمرار تحديد القياس الرمادي ولكن لا تقم بتغيير المعلمات الأخرى. حدد قائمة الإصدار التجريبي في المستكشف التجريبي وانقر فوق إضافة متغير في شريط الأدوات العلوي. قم بتسمية المتغير المعرف من قبل المستخدم على أنه علاج.

حدد شريط القائمة المنسدلة للقيم المحددة مسبقا في عمود المعالجة المحدد من قبل المستخدم وأضف التحكم والمعالجة كقيم محددة مسبقا. انقر فوق الزر إضافة إصدارات تجريبية موجود في شريط الأدوات العلوي وأضف إصدارين تجريبيين. ثم لكل ساحة ، حدد ما إذا كانت ساحة تحكم أو ساحة علاج.

بعد ذلك، حدد ملف تعريف البيانات ضمن لوحة مستكشف التجارب. في العمود الأيسر، حدد العلاج، الموجود أسفل عنوان المتغيرات المستقلة التي يحددها المستخدم. سيؤدي هذا إلى إضافة مربع مرشح إلى المنطقة التي تحتوي على المخطط الانسيابي.

حدد C في المربع المنبثق ثم ضع عامل التصفية الذي تم إنشاؤه حديثا بين مربع البداية ومربع النتيجة واحد. يجب ضبط أسهم المخطط الانسيابي بحيث تشير من مربع البداية إلى المرشح وأخيرا إلى النتيجة. كرر هذه الخطوة، ولكن هذه المرة، حدد T لعامل التصفية ثم حدد النتيجة ضمن قسم العناصر الشائعة.

انقل المربعات التي تم إنشاؤها حديثا إلى منطقة المخطط الانسيابي وقم بتوصيل المربعات بالأسهم ، واحفظ الملف. ابدأ تشغيل برنامج التتبع المرئي وافتح الملف التجريبي المحفوظ الذي تم إنشاؤه لهذا الفحص. حدد إعدادات الكشف الثانية.

ثم ضع مكعبات التحكم في السكر والأغاروز في مراكز ثمانية من أطباق بتري ال 16. كرر هذه العملية مع مكعبات مركب السكر والأغاروز في الأطباق الثمانية المتبقية. استخدم الملقط لإزالة نحلة عسل واحدة من الصندوق البلاستيكي ووضعها في أحد أطباق بتري التحكم.

كرر هذه الخطوة مع أطباق بتري ال 15 المتبقية. ضع جميع الأطباق على صندوق الضوء. قم بإضاءة صندوق الإضاءة من الأسفل بواسطة مجموعة من مصابيح LED مضبوطة على الطيف الأحمر ووضعها بحيث تتناسب مناطق الكشف عن الساحة مع كل ساحة من ساحات أطباق بتري.

قم بإحاطة الصندوق والكاميرا بالكامل بغطاء بلاستيكي أسود للتخلص من الضوء الخارجي وتقليل الظلال داخل الساحات. بعد ضبط أطباق بتري، تأكد من أن إعدادات الكشف هي الإعداد المحدد. في هذه المرحلة ، يجب أن يلتقط برنامج التتبع المرئي نحل العسل فقط داخل ساحات أطباق بتري.

ثم حدد الاكتساب من مستكشف التجارب. اضغط على زر بدء الإصدار التجريبي الأخضر الموجود في المربع المنبثق للتحكم في الاكتساب على اليمين لبدء التسجيل. قم بتشغيل الاختبار لمدة 10 دقائق ثم انقر فوق الزر الأحمر لإيقاف الإصدار التجريبي في المربع المنبثق للتحكم في الاكتساب لإيقاف التسجيل.

هنا النتائج التمثيلية لتأثير DEET على سلوك التغذية لنحل العسل الفردي. أمضى الأفراد المعرضون لمكعبات التحكم ما معدله 343 ثانية في منطقة التغذية ، مقارنة ب 16 ثانية للأفراد المعرضين للمكعبات المصابة ب DEET. هنا يتم عرض النتائج التمثيلية لتأثيرات مركبين مختلفين على سلوك تغذية نحل العسل الفردي.

أمضى الأفراد المعرضون لمركب غير رادع ما معدله 282 ثانية في منطقة التغذية ، مقارنة بعناصر التحكم ، التي أمضت حوالي 352 ثانية هناك. يؤدي التعرض لمركب رادع إلى قضاء الأفراد وقتا أقل بكثير ، حوالي 23 ثانية ، في منطقة التغذية. مقارنة بعناصر التحكم التي أمضت في المتوسط 493 ثانية في المنطقة.

بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في 20 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تحضير كل شيء مسبقا وتجويع نحل العسل لفترة كافية من الوقت. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحديد تأثيرات المركب الذي يتم غرسه في مصدر غذائي على نحل العسل الفردي باستخدام برنامج تتبع الفيديو.

باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل فحوصات المجال القريب والميدان من أجل الإجابة على أسئلة إضافية تتعلق بتأثير المركب على مستوى المستعمرة. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال علم الحشرات لاستكشاف الكيمياء الجديدة وتأثيراتها على سلوك التغذية في نحل العسل. لا تنس أن العمل مع المركبات يمكن أن يكون خطيرا للغاية ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات ، مثل ارتداء معدات الحماية الشخصية ، أثناء تنفيذ هذا الإجراء.