Name: Vivo에서 스펙트럼-도메인 광학 일관성 단층 촬영 스캐닝 레이저 Ophthalmoscopy와 Cx3cr1gfp/gfp 기자 쥐의 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: 학습하세요 스펙트럼-도메인 광학 일관성 단층 촬영과 스캐닝 레이저 안저경을 사용하여 Cx3cr1gfp/gfp 기자 쥐의 망막 두께와 미세아교세포 분포를 비침습적으로 실시간 분석하는 방법을. 이 기법은 실험 안과학 연구에 필수적입니다.

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이 작품은 스위스 국립 과학 재단 (SNSF, #320030_156019)의 교부 금에 의해 지원 되었다. 저자는 하이델베르크 엔지니어링 GmBH, 독일에서에서 비재무 지원을 받았다.

모든 절차, BALB/c 성인 남성 및 여성 쥐 Cx3cr1의 발기인에서 gfp 익스프레스 누가 사용된 24 했다. 마우스 ARVO 성명에 따르면 안과 및 비전 연구에 있는 동물의 사용에 대 한 치료 하 고 모든 절차는 동물 복지에 스위스 연방 규정에 따르면 스위스 정부에서 승인 했다. 마우스는 medetomidine 염 산 염 (0.75 mg/kg)과 케 타 민 (45 mg/kg)의 피하 주입에 의해 취 했다. 적절 한 마 취 호흡 속도 동물을 모니터링 하 여 확인 되었다 &#39; 꼬리 핀치에 대 한 s 반응. 실험의 끝에, 쥐와 CO 2 흡입 안락사 되었다.
 참고: 이미징 각 세션 (최대 20 분) 가능한 한 빨리 수행, 백 내장 형성 이후 다음 마 취 망막 시각화 30을 방해 수 있습니다.
 1. 시스템 구성 <ol><li>컴퓨터를 켭니다.</li>
	<li>전원 공급 장치를 켭니다. 메시지 &#34; 시작 수집 모듈 &#34; 장치의 제어판 화면에 나타납니다.</li>
	<li>소프트웨어를 작동 하는 소프트웨어의 바탕 화면 바로 가기를 두 번 클릭.</li>
	<li>데이터베이스 보기에서 클릭는 &#34; 환자를 추가 &#34; 아이콘.</li>
	<li>팝업 창에서 필요한 모든 정보를 삽입 (성, 이름, 제목, 생년월일, 성별, 및 환자 ID)를 클릭 하 고 &#34; 확인 &#34;. 팝업 창에서 2 mm 각 막 곡률을 설정 하 고 &#34; 확인 &#34;.</li>
	<li>표준 30 ° 시 앞 78 D 표준 안과 콘택트 슬릿 램프 렌즈를 놓고 테이프로 안전 하 게 그것을 건다.</li>
	<li>장치의 왼쪽에 있는 필터 레버는 표시에 위치 확인 &#34; A &#34; IR + 10 월 및 ( 그림 1) 이미징 어.</li>
</ol> 2. 마우스 준비 <ol><li>0.75 mg/kg와는 케 타 민 medetomidine 염 복용량을 사용 하 여 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS, pH 7.4) 마 취 솔루션 준비에 45 mg/kg의 복용량. 따라서, 20 g 마우스에 대 한 medetomidine 염 산의 15 µ L 18 µ L의 PBS에서 50 µ L의 최종 볼륨을 마 취 제와 혼합. 솔루션 4 ° C에서 최대 1 주일까지 저장.</li>
	<li>아저씨에 의해 마우스를 파악 하 고 눈동자 팽창 시킴을 달성 하기 위해 각각의 눈에 한 방울 tropicamide 0.5% + phenylephrine 염 2.5% 적용.</li>
	<li>구속, 마우스를 유지 하 고 30 G 바늘에 연결 된 인슐린 주사기, 피하 주사 마 취 솔루션의 50 µ L. 생리대 위에 배치 된 그것의 감 금에서 다시 마우스를 넣어. 마우스 완벽 하 게 진정 될 때까지 3-5 분을 기다립니다. 마 취 깊이 평가, 마우스의 꼬리를 꼬집어. 마우스 각 막을 면봉으로 부드럽게 터치 하 여 각 막 반사를 확인 합니다. 없는 긍정적인 반사를 관찰 하는 경우는 영상 계속. 
	참고: 그것은 마 취 동안 호흡 속도 모니터링 하는 것이 중요입니다. 마우스 완벽 하 게 진정 하지 고통 스러운 자극에 따라 호흡 속도 증가 합니다.</li>
	<li>수화물 2 %hydroxypropylmethylcellulose 응용 프로그램과 함께 마우스 각 막 각 눈에 떨어진다.</li>
</ol> 3. SD-10 월 <ol><li>소자의 턱 받침대 ( 그림 1)에 연결 된 맞춤 플랫폼에 약 32 ° C의 온난 화 패치를 배치.</li>
	<li>오른쪽 눈 이미지를 플랫폼 ( 그림 1)의 왼쪽된 부분에 마우스를 놓습니다. 마우스의 오른쪽 궤도 렌즈 얼굴과 신체 거짓말 플랫폼의 왼쪽된 부분에는 경향이 확인 하십시오.</li>
	<li>오른쪽 눈에 hydroxypropylmethylcellulose의 방울을 적용 하 고 신중 하 게 그것은 + 4 디 옵 터 엄밀한 가스 침투성 콘택트 렌즈 위치 (구형 전원: +25.00 디 옵 터에-25.00). 균형 잡힌된 소금 솔루션 (BSS)에 콘택트 렌즈를 저장 합니다. 렌즈를 잡아,를 사용 하 여 플라스틱 또는 실리콘 집게 손상을 방지.</li>
	<li>수집 모듈 ( 그림 2A에 녹색 상자)을 시작 하는 컨트롤 패널 디스플레이의 오른쪽에 노란 상자를 누릅니다. 노란색 상자는 녹색 켜 집니다 고 컨트롤 패널 메뉴 화면 ( 그림 2A)에 표시 됩니다.</li>
	<li>B 검사의 인수, 컨트롤 패널 ( 그림 2A)에 IR + 10 월 옵션을 선택 합니다. 선택한 설정 컨트롤 패널에서 파란색으로 강조 표시 됩니다.</li>
	<li>선택 &#34; 망막 &#34;에서 &#34; 응용 프로그램 및 구조 &#34; 소프트웨어에 이동 마우스 눈으로 렌즈에 사용 하 여는 micromanipulator 장치 ( 그림 1). 망막에 초점을 맞추고, 전에 확인 표시 &#34; OD &#34; 스크린의 왼쪽된 하단 부분에 선택. 소프트웨어는 자동으로 왼쪽 (OS)를 식별 하 고 오른쪽 (OD) 눈은 목표의 위치에 따라. 
	참고: 목표는 플랫폼의 중간에 위치 하는 경우 화면 하단에 오류 메시지가 표시 됩니다. 이 경우, 다시 마우스를 놓고 약간 때까지 올바른 눈을 인식 하는 소프트웨어.</li>
	<li>초점 손잡이와 초점을 망막에 큰 배는 명확 하 게 컴퓨터 화면 왼쪽에 저 이미지에서 볼 때까지. 카메라는 micromanipulator 왼쪽 또는 오른쪽, 그 방향으로 카메라를 이동 또는 시계 방향 또는 시계 반대 방향으로, 최대 또는 아래로, 각각 카메라를 이동 하 여 이동. 
	참고: 플랫폼에서 마우스 위치를 변경 하거나 적외선 이미지에서 시 신경 머리의 선호 지역화를 달성 하기 위해 렌즈 위쪽으로 또는 아래쪽으로 이동.</li>
	<li>시계 반대 방향으로 줄이기 위해 또는 저 이미지의 밝기를 증가 하는 방향으로 감도 조절기를 돌립니다. 최적의 초점을 달성 하는 경우는 SD-10 월 B-스캔 화면 오른쪽에 나타납니다. 
	참고: B-스캔 초점을 조정 하 여 구상 될 수 없습니다, 경우 키보드 조합 Ctrl + Alt + Shift + O를 누릅니다. 팝업 창에서 값을 조정 하는 참조 팔의 B-스캔 화면에 나타날 때까지.</li>
	<li>화면의 오른쪽 하단에 패턴 메뉴 (한 줄 그림 2b에서)에서 단일 검색을 선택 하십시오.</li>
	<li>Micromanipulator 장치 ( 그림 1)의 왼쪽, 오른쪽, 앞으로, 또는 (그 방향으로 카메라를 설정)을 뒤로 돌려 B-스캔 위쪽과 아래쪽 사이 위치 되도록 모서리의 SD-스캔 창.</li>
	<li>적어도 9 높은 품질의 이미지를 자동 실시간 (미술) 값 설정. 
	참고: 예술 여러 연속 스캔을 평균 하 여 이미지 품질을 향상 시킵니다. 높은 &#34; 예술 &#34; 가치, 높은 신호 대 잡음 비율 그리고 이렇게 이미지 품질. 그러나, 증가 하 여는 &#34; 예술 &#34;는 획득 가치 시간 또한 증가.</li>
	<li>보도 &#34; 취득 &#34; ( 그림 2) 제어판 화면에 버튼 하 고는 이미지.</li>
	<li>왼쪽된 눈 이미지 및 반복 단계 3.2-3.12 마우스 위치.</li>
	<li>플라스틱/실리콘 집게로 콘택트 렌즈를 제거 하 고 그것은 BSS.</li>
	<li>Hydroxypropylmethylcellulose의 신선한 드롭 마우스 각 막 수 화와 티슈 페이퍼와 초과 제거.</li>
	<li>시계 반대 방향으로 회전 하 여 표준 30 ° 광 제거.</li>
	<li>55 ° 렌즈를 탑재 하 고 각 눈에 대 한 단계 3.4-3.12 반복.</li>
</ol> 4. 형광 이미징 자동 <ol><li>플랫폼에서 마우스를 이동 하지 않고 제어판에서 IR을 선택 합니다.</li>
	<li>초점 손잡이와 큰 망막 혈관에 초점.</li>
	<li>컨트롤 패널에서 AF를 선택 합니다.</li>
	<li>감도 노브를 시계 반대 방향으로 줄이기 위해 설정 또는 이미지의 밝기를 증가 하는 방향으로.</li>
	<li>감도 손잡이 누르고 설정에 &#34; 예술 &#34; 67 이상의 높은 품질을 얻으려면 이미지 값.</li>
	<li>때 세트 &#34; 아트 &#34; 값에 도달 했습니다, 눌러 &#34; 취득 &#34; 이미지를 얻으려면 제어판에서. 감도 노브를 다시 평균 중지를 누릅니다. 다른 망막 레이어를 시각화 하려면 초점 조정.</li>
	<li>55 ° 렌즈를 제거 하 고 넓은 분야 102 ° 렌즈를 탑재. 4.1 단계 &#8211; 4.6 각 마우스의 두 눈에 대 한, 모든 마우스.</li>
	<li>클릭 &#8220; 이미지 저장 &#8221; 창과 클릭의 왼쪽된 상단 테두리에 &#8220; 종료 &#8221;. 컴퓨터에 이미지를 저장 하려면 마우스 이름을 두 번 클릭 하 여 마우스 화면 오른쪽 부분에 있는 목록에서 선택 합니다. 별도로 각 이미지를 두 번 클릭 한 다음 플로피 디스크 아이콘을 클릭 합니다. .Tif,.bmp,.jpg 또는.png 원하는 폴더에로 이미지를 저장 합니다. 소프트웨어 보도 종료 하려면 &#8220; 파일 &#8221; 및 &#8220; 종료 &#8221;.</li>
</ol> 5. 마 취 반전 <ol><li>마우스 눈 hydroxypropylmethylcellulose의 한 방울을 수 화와 생리대에 마우스 반환.</li>
	<li>준비 atipamezole 솔루션 medetomidine 염 산 염의 진정 효과를 2.25 mg/kg의 복용량에. 20 g 마우스에 대 한 150 µ L PBS의 최종 볼륨을 사용 하 여 atipamezol의 9 µ L을 추가 합니다. 솔루션 4 ° C에서 최대 1 주일까지 저장.</li>
	<li>분 마 취 주입 (2.2 단계), atipamezole 솔루션의 150 µ L를 피하 주사 후.</li>
	<li>마 취에서 회복 될 때까지 마우스를 모니터링합니다. 때 마우스는 완전히 복구 (5-10 분 atipamezole 주입 후) 다시는 새 장에 넣어. 한쪽에 누워 때 그 시체를 설정 하는 동물의 능력에 의해 복구 표시 됩니다 활동, 산책 및 환경 자극에 대 한 응답에서 반응의 회복.</li>
</ol> 6. SD-10 월 이미지에서 수동 망막 두께 측정 <ol><li>OCT 검사는 동물의 이름에 더블 클릭 하 여 엽니다.</li>
	<li>B-스캔 30 ° 또는 55 ° 렌즈와 함께 얻은 열.</li>
	<li>선택 &#34; 두께 프로 파일 &#34;.</li>
	<li>보도 &#34; 레이어 세그먼트 편집 &#34; 아이콘 ( 그림 2B). 소프트웨어 자동으로 내부 제한 식별 하 고 기지 막.</li>
	<li>필요한 경우는 수동으로 해결 한다 내부 제한의 위치 그리고 막 기초. 이렇게 하려면 화면 그리고 빨간색 동그라미 옵션 ( 그림 2B)의 왼쪽에서 수정할 레이어를 선택 합니다. 이동 마우스 버튼으로 원 선 수정 누르면.</li>
	<li>올바르게 해당 레이어를 줄을 수정 합니다. 클릭 &#34; 저장 하 고 닫습니다 &#34; 창 종료. 
	참고: 맥락 막의 반사도, 인해 소프트웨어 식별할 수 있습니다 하지 기본 막 제대로. 따라서, 그것은 망막 두께 측정을 진행 하기 전에 그것을 수동으로 정의 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>선택 &#34; 망막 &#34; 아래는 &#34; 계층 &#34; 옵션. 망막 두께의 다이어그램 화면 하단에 표시 됩니다.</li>
	<li>망막 두께 (µ m에 표시 됨) 볼 B-스캔 또는 다이어그램에서 다른 위치에 선택 된 위치에 대 한 클릭 하십시오.</li>
	<li>시 신경 머리에서 원하는 거리에 망막 두께 측정 하 고 스프레드시트에 값 복사.</li>
	<li>5.1-5.9 30 °와 55 ° 렌즈 각 마우스에 대 한 단계를 반복.</li>
	<li>원하는 소프트웨어와 통계 분석을 수행.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

현재 문서에서는 망막 B-스캔의 수집과 같은 이미징 세션에서 마우스 망막에 gfp 긍정적인 microglia 분포의 이미징에 대 한 프로토콜을 보여 줍니다. SD-10 월과 SLO는 점점 사용 망막 질환의 동물 모델에서10,,1417,18,21이상 망막 변경의 정보를 제공 하. 이 프로토콜, Cx3cr1gfp/gfp 또는 Cx3cr1gfp / + 마우스 망막 비 접촉 이미지 수와 망막 두께의 정보를 얻을 수 있습니다. 이것은 질병의 심각도 시간이 지남에 변경 또는 치료 치료 테스트 때 망막 질병 실험 모델에서 매우 중요 하다입니다. 또한, 프로토콜 망막에 형광 세포의...

실험적인 안과에서 망막 병 리의 검사 일반적으로 조직학 기술을 사용 하 여 평가 합니다. 그러나, 조직학 동물 euthanization를 요구 하 고 조직의 실제 속성 변경 발생할 수 있습니다. SD-10 월과 SLO 정기적으로 사용 됩니다 임상 안과에서 진단 목적을 위해 여러 망막 질환 당뇨 황 반 부 종9, 앞쪽 허 혈 성 시 신경 병10또는 망막 화11 등의 모니터링 . SD-10 월과 SLO 추가 개입 없이 넓혀 진된 눈동자를 통해 시각화 되는 망막의 고해상도 이미지를 생성 하는 비-침략 적 기술이 있습니다. SD-10 월 SLO 입체 이미지는 망막의 생산 형광 데이터를 수집 하는 동안 망막의 단면 이미지를 만들려고 backscattering 데이터를 수집 하 여 망막 구조와 망막 두께의 정보를 제공 합니다. 요즘, 모두는 점점 작은 설치류12,13,,1415 (또는 심지어 zebrafish16,17)를 사용 하 여 실험 안과에서 사용 기술과 수 있습니다. 모두 질적 및 양적 정보12,,1718,,1920,21을 제공 합니다.
Lipofuscins 같은 내 생 fluorophores의 축적 또는 망막에 드루의 형성 자동 형광 신호 SLO에 의해 구상 될 수 있다. 이 특징은 SLO 진단 및 연령 관련 황 반 변성 등 망막 화22,23망막 질병의 모니터링을 위한 귀중 한 기술. 실험적인 안과에 자동 형광 이미징 (AF) 기자 마우스 라인에서 특정 세포 유형의 탐지에 대 한 사용할 수 있습니다. 예를 들어 마우스 Cx3cr124 의 발기인에서 gfp의 표현을 위한 heterozygous microglia/대 식 세포의 수사를 위해 정상적인 망막에 microglial 세포의 생체 내에서 시각화 한 유리는 망막 질병21역학입니다. Microglia는 조직의 항상성 및 부상1,,2526시 조직 복구에 중요 한 역할을 하는 망막의 상주 대 식 세포는. Microglia 활성화는 망막에 허 혈, 망막 부상과 변성, 망막 질병2,3,,45, 에서이 세포의 역할을 제안 보고 되었습니다. 6.
현재의 프로토콜의 목적은 망막 이미징 및 SD-10 월를 사용 하 여 망막 두께의 측정에 대 한 사용 하 여 Cx3cr1gfp/gfp 마우스 망막 gfp 긍정적인 microglia 셀의 시각화를 위한 비교적 간단한 방법 설명 하는 SLO (하이델베르크 Spectralis HRA + 10 월 시스템). 이 프로토콜은 다양 한 마우스 라인에서 건강 또는 질병 망막의 이미징 및 두께 측정을 위해 활용할 수 있습니다. 또한, 형태학 분석 식별 및 정량화 microglia 숫자 및 SLO21을 사용 하 여 망막에 microglia 활성화에 대 한 수행할 수 있습니다. Microglia 세포 망막27,,2829를 포함 하 여 중앙 신경 시스템 (CNS)에 퇴행 성 질환과 연결 됩니다. 따라서, 현재 프로토콜에서 사용 하는 두 가지 방법을 조합 하 여 microglia 유통 및 망막 변성의 상관 관계 만들 수 있는 모니터링 질병의 심각도 촉진할 수 있다 또는 vivo에서접근의 치료 효과.

<table><tbody><tr><td>Spectralis Imaging system (HRA+OCT)</td><td>Heidelberg Engineering, Germany</td><td>N/A</td><td>안과 이미징 플랫폼 시스템</td></tr><tr><td>Heidelberg Eye Explorer</td><td>Heidelberg Engineering, Germany</td><td>N/A</td><td>Version 1.9.13.0</td></tr><tr><td>78D standard ophthalmic non-contact slit lamp lens</td><td>Volk Optical Inc., Ohio, USA</td><td>V78C</td><td></td></tr><tr><td>Spectralis 광각 55°C; 렌즈</td><td>하이델베르크 Engineering, Germany</td><td>50897-002</td><td></td></tr><tr><td>ultra widefield 102&deg; lens</td><td>Heidelberg Engineering, Germany</td><td>50117-001</td><td></td></tr><tr><td>medetomidine hydrochloride 1 mg/mL (Domitor)</td><td>Provet AG, Lyssach, Switzerland</td><td>Swissmedic Nr. 50'590 - ATCvet: QN05CM91</td><td>anesthetic/analgesic</td></tr><tr><td>ketamine 50mg/ml (Ketalar)</td><td>Parke-Davis, Zurich, Switzerland</td><td>72276388</td><td>마취제</td></tr><tr><td>트로피카미드 0.5% + 페닐에프린 HCl 2.5% (Augentropfen mix)</td><td>ISPI, 베른, 스위스</td><td>N/A</td><td>동공 확장</td></tr><tr><td>Omnican Insulin-50 0.5 ml G30 0.3 x 12mm</td><td>B. Braun Mesungen AG, Carl-Braun-Stra&szlig; e, 독일</td><td>9151125</td><td></td></tr><tr><td>하이드록시프로필메틸셀룰로오스(메토셀 2%)</td><td>OmniVision, Neuhausen, 스위스</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>+4 dpt 경질 가스 투과성 콘택트 렌즈</td><td>Quantum I, Bausch + Lomb Inc., Rochester, NY</td><td>N/A</td><td>기본 곡선: 7.20 - 8.40 mm 직경: 9.00 / 9.60 / 10.20 mm 전력: -25.00 to +25.00 디옵터</td></tr><tr><td>균형 염 용액(BSS)</td><td>Inselspital, Bern, 스위스</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 펜치</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>atipamezole 5 mg/mL (Antisedan)</td><td>Provet AG, Lyssach, Switzerland</td><td>N/A</td><td>&alpha; 2 아드레날린성 수용체 길항제</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 7</td><td>GraphPad Software, Inc, San Diego, CA, USA</td><td>N/A</td><td>통계 분석 소프트웨어</td></tr></tbody></table>

vivo에서 스펙트럼-도메인 광학 일관성 단층 촬영 스캐닝 레이저 ophthalmoscopy와 cx3cr1gfp/gfp 기자 쥐의 이미징

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월) 및 스캐닝 레이저 ophthalmoscopy (SLO) 실험 안과에 광범위 하 게 사용 됩니다. 현재 프로토콜에서 마우스 표현 녹색 형광 단백질 (gfp) Cx3cr1 의 발기인에서 (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) microglia 세포에서 vivo에서 망막에 이미지를 사용 했다. Microglia 상주 세포는 망막의 고 여러 망막 질환1,2,3,4,,56에 연루 되었습니다. 이 프로토콜의 망막 B-스캔, SD-10 월과 SLO에서 vivo에서,와 함께 Cx3cr1gfp/gfp 마우스 microglia 셀 배포판의 이미징 안과 이미징 플랫폼 시스템을 사용 하는 세대에 대 한 상세한 접근을 제공 합니다. 프로토콜은 여러 기자 마우스 라인에서 사용할 수 있습니다. 그러나, 여기에 제시 된 프로토콜 몇 가지 제한이 있습니다. 첫째, SLO 및 SD-10 월, 고해상도 모드에서 사용 될 때 높은 축 해상도 측면 해상도와 데이터 수집 낮습니다 (3.5 µ m와 6 µ m, 각각). 또한, SLO에 초점 및 채도 수준을 높은 매개 변수 선택 및 눈의 올바른 정렬에 의존 합니다. 또한, 인간의 눈;에 비해 쥐에서 인간 환자는 마우스 눈의 더 높은 총 광학 힘 인 도전 위해 고안 된 장치를 사용 하 여 이 또한 다른 사람의 사이에서 마우스 렌즈에 의해 확대에 따라 확대 부정확7, 측면을 발생할 수 있습니다. 그러나, 축 검사 위치에 불구 하 고 측면 배율에 따라 달라 집니다, 그리고 축 SD 10 월 측정은 정확 하 게8.

여기에 제시 된 프로토콜을 사용 하 여, SD-10 월 스캔 하 고 SLO 이미지 같은 이미징 세션에 Cx3cr1gfp/gfp 마우스에서 입수 했다. 그림 3 에 대표 SD-10 월 단일 검사는 30 °와 55 ° 렌즈 (그림 3A) 또는 대표 SLO 이미지 얻은 gfp 긍정적인 microglia 셀 시각화는 55 ° 또는 102 ° 렌즈와 함께 얻은 포함 되어 있습니다. 맥락 막의 높은 반사도 SD 10 월에서 관찰 검사 30 ° 55 ° 렌즈에 비해 얻은. 그러나, 망막 건축 30 °와 55 ° 이미지 (그림 3, 오른쪽 확대 이미지)에서 분명 하다. 망막 경계 수동 수정 후 (내부 제한 막 기반), 시 신경 머리 ( 에서에서 같은 거...

이 프로토콜 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 등 어떻게 고해상도 이미징 기술을 설명 하 고 스캐닝 레이저 ophthalmoscopy에 정보를 얻기 위해 안과 이미징 플랫폼 시스템을 사용 하 여 작은 설치류에 이용 될 수 있다 망막 두께 microglial 각각 유통, 셀.

Vivo에서 스펙트럼-도메인 광학 일관성 단층 촬영 스캐닝 레이저 Ophthalmoscopy와 Cx3cr1gfp/gfp 기자 쥐의 이미징

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

이 절차의 전반적인 목표는 스펙트럼 영역 광간섭 단층촬영과 주사 레이저 검안경을 사용하여 각각 망막 두께와 미세아교세포 분포에 관한 정보를 얻는 것입니다. 이 방법은 망막 이상과 미세아교세포 축적 사이의 상관관계에 대한 실험 안과학 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 이러한 정보를 비침습적인 방식으로 실시간으로 얻을 수 있다는 점입니다.각막 면봉 자극에 반응이 없음을 확인한 후, 플랫폼 왼쪽에 마우스의 배를 아래로 향하게 하여 눕히고 오른쪽 안와가 렌즈를 향하게 합니다. +4 디옵터의 리지드 가스 투과성 콘택트 렌즈에 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 한 방울을 떨어뜨려 오른쪽 눈에 적용하고 획득 모듈을 시작합니다. B-스캔의 경우, Application에서 Infrared plus Optical Coherence Tomography 옵션을 선택하고 Structure에서 Retina를 선택한 다음, 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 렌즈를 마우스의 눈 쪽으로 이동시킵니다.망막에 초점을 맞추기 전에 우안(oculus dexter) 표시등이 선택되었는지 확인한 다음, 모니터 화면 왼쪽의 안저 이미지에서 큰 혈관들이 명확하게 보일 때까지 초점 노브를 사용하여 망막을 확대합니다. 필요에 따라 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 카메라의 위치를 조정하고, 적절하게 감도 노브를 돌려 안저 이미지의 밝기를 줄이거나 높입니다. 패턴 메뉴에서 라인 스캔(Line Scan)을 선택하고 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 스펙트럼 영역 광간섭 단층촬영(spectral-domain optical coherence tomography, SD-OCT) 스캔 창의 상단과 하단 모서리 사이에서 B 스캔을 이동시킵니다.높은 이미지 품질을 얻기 위해 Automatic Real Time 값을 최소 9로 설정하고 Acquire를 클릭합니다. 모든 이미지를 획득한 후, 콘택트렌즈를 눈에서 제거하여 신선한 평형 염액(balanced salt solution)으로 옮기고, 신선한 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스(hydroxypropyl methylcellulose) 한 방울로 각막에 수분을 공급합니다. 왼쪽 눈의 이미징이 끝나면, 표준 30도 광학 렌즈를 반시계 방향으로 돌려 제거하고, 2차 이미징을 위해 55도 렌즈를 장착합니다.자가형광을 평가하기 위해, 마우스를 움직이지 않은 상태에서 제어 패널의 Infrared를 선

in-vivo-imaging-cx3cr1gfpgfp-reporter-mice-with-spectral-domain

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오는 감염 후 포도막염의 마우스 모델에서 안구 염증을 감지하고 정량화하기 위한 생체 내 이미징 기술을 보여줍니다. 광간섭 단층촬영(OCT)으로 알려진 이 기술은 질병 진행을 평가하기 위해 눈의 고해상도 단면 이미지를 생성합니다.

마우스 모델에서 포도막염을 평가하기 위한 광간섭 단층촬영 이미징(Optical Coherence Tomography Imaging)

출처: Bosco, A., et al. In vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma(신경 퇴행 중 망막 미세아교세포 활성화의 생체 내 역학: 마우스 녹내장의 컨포칼 안과 영상 및 세포 형태 측정).   J. Vis. 특급 (2015년) 이 비디오는 녹내장의 마우스 모델에서 망막 미세아교세포의 생체 내 이미징을 보여줍니다. 형광 단백질 발현 망막 미세아교세포를 가진 형질전환 마우스가 검안경 아래에 위치합니다. 적외선 조명은 시신경두(ONH)를 찾는 데 사용되며, 초점면은 망막 혈관을 랜드마크로 사용하여 설정됩니다. 그런 다음 형광 미세아교세포를 시각화하기 위해 형광 이미징을 사용합니다. 세포체가 커지고 분지 복잡성이 감소하는 것을 특징으로 하는 활성화된 미세아교세포를...

In Vivo Imaging of Retinal Microglia in a Mouse Model of Glaucoma

출처: Jagodzinska, J., et. al., Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo. J. Vis. 특급. (2017) &lt;br /&gt; 이 비디오에서는 SD-OCT(spectral-domain optical coherence tomography)를 사용하여 망막층을 이미지화하고 시신경병증이 있는 유전자 변형 마우스 모델의 구조적 변화를 평가하는 방법을 보여줍니다.

광간섭 단층촬영(Optical Coherence Tomography)을 사용한 마우스 망막의 In vivo 이미징

미세 아교 세포의 활성화 및 microgliosis 만성 신경 퇴행의 핵심 반응이다. 여기, 우리는 생체 내, 공 초점 검안경으로 망막 CX3CR1-GFP + 미세 아교 세포의 장기 시각화를위한 방법을 제시하고, 임계 값 및 형태 계측 학적 대한 식별과 활성화를 정량화 분석한다. 우리는 연령과 관련된 녹내장의 초기 단계 소교 변경 사항을 모니터링 할 수 있습니다.

마우스 녹내장에 공 촛점 안저 이미징 및 세포 형태 계측 : 신경 퇴행 중 망막 미세 아교 활성화의 생체 역학

이 원고는 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월)와 마우스 망막의 비보에 이미징에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 그것은 몇 가지 검색 및 측정 방법 설명 peripapillary 지역에서 망막 신경 절 세포 (RGC)에 초점을 맞추고.

광학 일관성 단층 촬영: 마우스 망막 신경 절 세포에서 Vivo에서 화상 진 찰

여기, 선물이 쥐에서 안 neovascularization 레이저 유도의 형태학 변화의 후속에서 경도 vivo에서 화상의 유용성.

Vivo에서 복합 이미징 및 마우스 레이저 유도 안 Neovascularization 모델의 분석

여기에 제시 라이브 마우스 안구 표면 이미징을위한 다광 현미경 플랫폼입니다. 형광 형질 전환 마우스는 안구 표면 내의 세포 핵, 세포 막, 신경 섬유 및 모세 혈관의 시각화를 가능하게합니다. 콜라주 구조에서 파생된 비선형 제2 고조파 생성 신호는 기질 아키텍처에 대한 라벨없는 이미징을 제공합니다.

마우스 각막과 결막의 라이브 이미징을 위한 맞춤형 다광현미경 플랫폼

여기에서는 망막 변성, 녹내장, 당뇨병 성 망막증 및 근시 모델에서 생체 내 망막 및 안구 구조를 시각화하기 위해 스펙트럼 도메인 광학 간섭 단층 촬영 (SD-OCT)을 사용하는 방법을 설명합니다.

광학 간섭 단층 촬영을 사용한 설치류 모델에서 안구 질환의 생체 내 구조 평가

생체 내 이미징은 건강 및 질병 생물학 연구를위한 강력한 도구입니다. 이 프로토콜은 표준 2 광자 현미경으로 마우스 망막의 경공 영상을 설명합니다. 또한 망막의 여러 세포 코호트를 형광으로 표지하는 다양한 생체 내 이미징 방법을 보여줍니다.

경동공 이광자 마우스 망막의 생체 내 이미징

우리는 경내 주입 후 눈에 리포좀의 스파티오 측두분포를 비침습적으로 연구하기 위해 광섬유 공초점 레이저 미세 내시경 검사(CLM)의 사용을 위한 프로토콜을 제시한다.

광섬유 공초점 레이저 미세 내시경 검사를 사용하여 안구 약물 전달 시스템의 생체 내 측두 체 이미징

본 프로토콜은 in vivo 이미지에서 관찰된 망막 신경절 세포 축삭 다발 형태를 검증하기 위한 목적으로 in vivo 가시광선 광간섭 단층 촬영 fibergraphy(vis-OCTF) 이미지를 동일한 마우스 망막의 ex vivo 공초점 이미지와 정렬하는 단계를 설명합니다.

Align of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina(가시광선 광간섭 단층 촬영 파이버그램과 동일한 마우스 망막의 컨포칼 이미지 정렬)

학습하세요 스펙트럼-도메인 광학 일관성 단층 촬영과 스캐닝 레이저 안저경을 사용하여 Cx3cr1gfp/gfp 기자 쥐의 망막 두께와 미세아교세포 분포를 비침습적으로 실시간 분석하는 방법을. 이 기법은 실험 안과학 연구에 필수적입니다.

Vivo에서 스펙트럼-도메인 광학 일관성 단층 촬영 스캐닝 레이저 Ophthalmoscopy와 Cx3cr1^gfp/gfp 기자 쥐의 이미징

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