Potentiation של נוגדנים נגד סרטן יעילות על-ידי סמים Antineoplastic: זיהוי של נוגדן תרופתיים הסינרגטיות באמצעות המשוואה אינדקס שילוב

אימונותרפיה בשילוב עם כימותרפיה מייצגת גישה חדשנית לפיתוח טיפול יעיל בסרטן. המטרות העיקריות הן להשיג סינרגטי, השפעות טיפוליות, הפחתת מינון ורעילות, כדי למזער או לעכב את אינדוקציה של עמידות לתרופות. עם זאת, מסיבות מעשיות ואתיות, לא ניתן לקבוע סינרגיה בחולים. לכן, לפני שילוב ישיר בניסויים קליניים, מחקרי שילוב Prenicaptor, במבחנה, ו / או בבעלי חיים, צריך להתבצע כדי לקבל את הרציונל למחקרים קליניים. שיטה פשוטה וחזקה לכמות סינרגיה בין תרופות מבוססת על משוואת מדד שילוב שפותחה על ידי Shouan Talale, כפי שמודגם בסרטון זה. באמצעות שיטה זו, וסימולציה ממוחשבת שלה, אנו ראיות כאן, הסינרגיה בין נוגדן חד שבטי 8B6, אשר ספציפי עבור O-אצטיל-GD2 נוירובלסטומה Ganglioside אנטיגן ואת התרופה הכימותרפית Topotecan על תאי נוירובלסטומה. בקצרה, לאחר קביעת המינון האפקטיבי 50 ערכים של כל תרכובת IMO אנושי, 5 קו תאים נוירובלסטומה, תאים אלה היו צנררים עם יחס הוגן של שתי תרכובות, ואת ערכי מדד שילוב חושבו באמצעות סימולציה ממוחשבת אוטומטית. לאחר מכן אישרנו את התוצאות האלה ב Vivo, ב IMO, 5 גידול קסנוגרף מודל. גידלנו תאי IMR-5 בבקבוק T75, ראינו אותם תחת מיקרוסקופ, כדי לבדוק את תכולת התאים. בינוני תא אספרט מן הבקבוק, לשטוף עם 5 מ"ל של PBS. הוסף 3 מ"ל של פתרון 0.05%EDTA/PBS. מחזירים את הבקבוק לאנקובטור למשך 3 דקות. בדוק את תרבות התאים תחת מיקרוסקופ עבור ניתוק תאים. מוסיפים 10 מ"ל של תא שלם בינוני לבקבוק, ומעבירים את מתלי התא לצינור חרוט סטרילי של 15 מ"ל. צנטריפוגה במשך חמש דקות ב 300 g.Count תאים באמצעות המוציטמטר. הסר והשליך את העל-טבעי. להשעות מחדש תאים ב בינוני צמיחה מלאה.להתאים את הנפח הבינוני כדי לקבל ריכוז סופי של 100, 000 תאים / mL.Seed 84 בארות, 96 צלחת תרבות היטב עם 10, 000 תאים כל אחד, שהוא 100 microliters של השעיית תא. תאי אינקובט במשך 18 שעות ב- Cell Incubator.Dilute נוגדן חד שבטי ב 500 microliters של מדיום צמיחה מלאה כדי לקבל פתרון עבודה נוגדן עם ריכוז נוגדנים חד שבטי 240 מיקרו גרם לכל mL.Perform 5 אשליות סדרתיות כפולות כפי שצוין בפרוטוקול. לדלל את התרופה ב 500 microliters של מדיום צמיחה מלאה כדי להשיג פתרון עבודה תרופה עם ריכוז סופי 120 nanomolar. בצע 5, פעמיים אשליות סדרתיות כפי שצוין בפרוטוקול. לדלל באותו אופן את התרופה בתוספת פתרונות anibodies חד אופן. כדי להגיע לריכוז הסופי, להעביר 50 microliters של כל פתרונות תרופה בארות המתאימות כפי שמוצג בפריסה ניסיונית זו. להטף את התאים במשך 72 שעות באינקובטור. הוסף 10 מיקרוליטרים של פתרון MTT reagent לתוך כל באר. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות. מוסיפים 100 מיקרוליטרים של תותב lycine לתוך כל באר באמצעות פיפטה רב ערוצית ומערבבים ביסודיות על ידי צינורות. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות בתא לח. תפטר את הספיגים ב-570 ו-620 ננומטר בעזרת ספקטרופוטומטר. חשב את הכדאיות התאית באופן הבא. חשב את הערכים המושפעים של השבר באמצעות המשוואה הבאה. הפעל את תוכנת הסימולציה, לחץ על כפתור הניסוי החדש כדי להשיג את החלון הראשי. הקלד את שם הניסוי. לחץ על תרופה אחת חדשה. הקלד את השם. הקלד את הקיצור. הקלד את יחידת ריכוז הסמים. הזן מינון נתונים 1 וערך FA. הקש Enter.Repeat על שלב זה עד להזנת כל נקודות הנתונים. לחץ על סיום.בצע את אותם שלבים כדי להזין נקודות נתונים נוגדן חד שבטי. לחץ על תרופה חדשה Combo.Select תרופות ונוגדנים חד שבטיים. בחר יחס קבוע.לחץ על אישור. הקלד את השם. הקלד את הקיצור. הקלד את יחס הנוגדנים המונוקלוני של התרופה. הזן מינון נתונים 1. הקש Enter.The התוכנית תחשב באופן אוטומטי את המינונים של נוגדן חד שבטי 8B6 ו משולבת. הזן ערך FA של נתונים 1.הקש Enter.Repeat על שלב זה עד להזנת כל נקודות הנתונים. לחץ על סיום.לאחר מכן, לחץ על צור דוח.בחר נוגדן תרופה ונוגדן חד שבטי ולאחר מכן לחץ על אישור. בחר משולב ולאחר מכן לחץ על אישור. בחר כותרת עליונה, טבלת CI וטבלת סיכום ולאחר מכן לחץ על אישור. הקלד את שם הקובץ ואת הניתוח ולחץ על שמור כדי להפיק את הדוח. הדוח נפתח באופן אוטומטי בדפדפן האינטרנט המוגדר כברירת מחדל. הדוח מכיל מקטע טבלת סיכום הכולל פרמטרים כותרת, תאריך, שם סופי, הערה תיאור, m, Dm ו- r, מינון אפקטיבי 50 עבור כל סוכן המשמש כמונותרפיה או בשילוב, וטבלת האינדקס המשולבת עבור כל שילוב במינון האפקטיבי 50, 75, 90 ו- 95.A ערך אינדקס משולב פחות מ- 1 מציין סינרגיה. ערך השווה לערך אחד מציין תוספה. ערך הגדול מ- 1 מציין אנטגוניזם. להפשיר מטריצת קרום מרתף לילה על ידי טביעה את הבקבוקון בקרח במקרר 4 מעלות צלזיוס לפני השימוש. כל בגדי התרבות, או התקשורת שבאה במגע עם מדד קרום המרתף, צריכים להיות לפני כן. לקצור את התרבות IMR5. מעבירים את התאים לצינור חרוט 15 מ"ל וצנטריפוגה ב 300 גרם במשך 5 דקות. השלך את העל-טבעי. לשטוף תאים עם 15 מ"ל קרח קר PBS פעמיים. הכן מתלה תא עבור 5 מיליון תאים לכל mL ב PBS קר כקרח. העבר את ההשעיה התא לתוך microtube 1.5 מ"ל. בקבוקון מטריצת קרום מרתף מסתובב. הוסף 1 נפח של reagent מטריצת מטריצת קרום המרתף, מעורבב על ידי צינורות כדי להשיג השעיית תא של 2.5 מיליון תאים לכל mL.Keep המתלה התא על קרח. לגלח את האגף שבו הזריקה ת ייעשה. מערבבים תאים ולצייר בזהירות את ההשעיה התא לתוך מזרק 1 מ"ל רכוב עם מחט 21 גרם. בדוק כדי לוודא שאין בועות אוויר במזרק. לחטא את אזור החיסון של העכברים עם פתרון חיטוי. לסחוט בעדינות את עור העכבר על האגף בין האצבעות באתר ההזרקה. הכנס את המחט בדיוק לתוך כיסוי העור. אין למקם את המחט עמוק לתוך הרקמה כדי לבטח הזרקה תת עורית. להזריק 100 microliters של מתלים תא IMR5 תת עורית. לסובב את המזרק כדי למנוע התפשטות נוזל ולמשוך את המחט. לפקח על עכברים עבור משקל הגוף וצמיחה הגידול. למדוד את האורך והרוחב של הגידול עם קליבר. חשב את נפח הגידול באמצעות נוסחה זו. התחל טיפול כאשר גידולים הגיעו לנפח ממוצע של 50 עד 60 מ"מ