Name: In Vivo Beeldvorming van reactieve zuurstof soorten in een RattenUitrustingen wond Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Leer hoe je reactieve zuurstofsoorten in vivo kunt beeldvormen in een muizenwondmodel met L-012 chemiluminescentie. Deze niet-invasieve methode maakt real-time meting van ROS mogelijk voor onderzoek naar weefselherstel.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij zijn dankbaar aan de preklinische Imaging Core aan de NYU School of Medicine, met speciale dank aan Orlando Aristizabal en Youssef Zaim Wadghiri. De kern is een gedeelde bron slechts gedeeltelijk ondersteund door de Laura en Isaac Perlmutter Cancer Center ondersteuning Grant NIH/NCI 5P30CA016087 en NIBIB biomedische technologie Resource Center Grant NIH P41 EB017183. Dit werk werd gesteund door de American Diabetes Association "Traject te stoppen-Diabetes" D.C. [subsidie nummer 1-16-ACE-08] en de NYU toegepast onderzoek Steunfonds aan P.R.

Alle methoden die hier worden beschreven zijn goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité van New York University School of Medicine. Alle muizen bevinden zich achter een barrière en al het personeel passende persoonlijke beschermingsmiddelen dragen.
1. dag 0: Voorbereiding van lymfkliertest Model van Excisional wondgenezing
<ol><li>Anesthetize (Leprdb/db) diabetesmuizen, leeftijd van 8-12 weken, met respiratoire Isofluraan van 2%. Bevestigen dat elke muis heeft zijn goed verdoofd met behulp van de voet pad snuifje test. Steriele oogbeschadigingen en/of smeermiddel toepassen op elk van beide ogen ter voorkoming van irritatie van droogte. Onderzoekers moeten hun institutionele veterinair personeel richtsnoeren volgen wanneer anesthetizing van dieren met behulp van Isofluraan.</li>
	<li>Weeg de muizen en opnemen van het lichaamsgewicht voor elke muis. Bevestig de diabetische status van dieren door de opname van de bloedglucose van elk dier met behulp van een glucometer.</li>
	<li>Desinfecteer procedurele werkruimte en anesthesie apparatuur. Verwijderen van de dorsale haren van de muizen met behulp van een tondeuse, gevolgd door toepassing van haar verwijdering lotion te vegen weg overtollige haren. Gebruik van alcohol doekjes voor het reinigen van de blootgestelde huid, tweemaal, en laten drogen.</li>
	<li>Maak twee 10 mm volledig-dikte wonden uitbreiden via de panniculus carnosus met behulp van steriele 10 mm biopsie stoten volgens een gevestigde excisional wond genezing techniek7,8. Steriele handschoenen gebruiken voor alle overleving chirurgie. Autoclaaf alle chirurgische instrumenten in zakken voorafgaand aan chirurgie en open alleen op het chirurgische gebied.</li>
	<li>Splint de wonden open met behulp van een 0,5 mm dikke siliconen vel met 10 mm circulaire knipsels en veilige de stents bij het gebruik van de plaats onderbroken 4-0 zijde hechtingen.</li>
	<li>Volgende chirurgie, dieren uit narcose verwijderen en plaatsen op de verwarming pad om goede herstel. Van de nota, als dierlijke lichaamstemperatuur tijdens de procedure daalt, kan het dier worden verplaatst naar de verwarming pad eerder tot een minimum beperken van warmteverlies lichaam onder verdoving. Volgen de dieren totdat ze wakker en mobiele zijn.</li>
	<li>Zodra het volledig is hersteld, terug dieren naar afzonderlijke kooien, met voedsel en water (zorgen voor dat wat te eten is op de vloer van de kooi voor postoperatieve verrijking). Verstrek papiersnippers handdoeken als extra nesten materiaal voor 2 weken. Dieren die ondergaan hebben chirurgie met andere dieren, om te voorkomen dat negatieve interacties en wijzigingen in de status van de genezende wond niet huis.</li>
	<li>Voor verlichting van postoperatieve pijn, injecteren muizen subcutaan met buprenorfine bij 0,1 mg/kg lichaamsgewicht tweemaal per dag, beginnen onmiddellijk na de procedure, voor 3 dagen.</li>
</ol>2. dag 1: Voorbereiding van Keap1 siRNA
Opmerking: Bereiden alle behandelingen binnen een kabinet bioveiligheid.
<ol><li>SiRNA verdunning door het combineren van 37,5 µL van verminderde serum medium met 12,5 µL van 20 µM Keap1 siRNA (siKeap1) (250 pmol) in een 1,5 mL microcentrifuge buis op ijs bereiden.</li>
	<li>Maak liposoom verdunning door het combineren van 25 µL van verminderde serum medium met 25 µL van liposoom mix in een tube van 1,5 mL microcentrifuge.</li>
	<li>Voeg 50 µL van siRNA verdunning met 50 µL liposoom verdunning dropwise (1:1 deel), en zachtjes meng.</li>
	<li>Incubeer gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Voeg 50 µL van 2% methylcellulose gel in water en meng zachtjes op en neer waarbij eveneens.</li>
	<li>Behandelen van elk dier kan beschikken over beide een onzin siNS (control) of siKeap1 (experimenteel). Het toepassen van de gel op de bovenkant van de wond. Wikkel de romp van het dier met doorzichtige folie dressing gel in plaats te houden, houden de ledematen vrij te houden van de mobiliteit.</li>
</ol>3. dag 3: Bereiding van L-012 oplossing
Opmerking: Bereiden alle reagentia in een kabinet bioveiligheid.
<ol><li>Bereiden in een 1,5 mL microcentrifuge buis, L-012 in 1 X PBS met een concentratie van 0,5 mg/100 mL.</li>
	<li>Handmatig vortex de microcentrifuge buis. De L-012 doet niet volledig oplossen in het PBS, maar het dient gelijkmatig in de vloeistof te worden geschorst. Van de nota, probeer niet te ontbinden L-012 in water Voorkom verontrustende fysiologische elektrolyt balans na injectie.</li>
	<li>Breng de oplossing kwantitatief over in een spuit van 1 mL met behulp van een naald 27 G. Opmerking: Zorg ervoor dat de oplossing van de L-012 beschermen tegen licht.</li>
</ol>4. dag 3: In Vivo Imaging van diabetische wonden
<ol><li>Anesthetize muizen met respiratoire Isofluraan van 2%. Onderzoekers moeten hun institutionele veterinair personeel richtsnoeren volgen wanneer anesthetizing van dieren met behulp van Isofluraan. Bevestigen dat elke muis heeft zijn goed verdoofd met behulp van de voet pad snuifje test. Steriele oogbeschadigingen en/of smeermiddel toepassen op elk van beide ogen ter voorkoming van irritatie van droogte.</li>
	<li>Zachtjes verwijderen de transparante film dressing van de muizen zonder verstoring van de wonden.</li>
	<li>De muizen in de beeldvorming kamer in hun respectieve bestellingen plaatsen. Ingesteld om te handhaven juiste O2 niveaus in de zaal, de imaging systeem-instroom en de inductie kamer O2 niveaus op 1,0 L/min.</li>
	<li>Het imago van de muizen voor bioluminescentie en foto op basislijn vóór injectie van L-012 compound.</li>
	<li>Veeg de buik met alcohol doekjes en laten drogen. Het uitvoeren van een intraperitoneale injectie van de oplossing van de L-012 met 5 mg per lichaamsgewicht van 200 g met behulp van een naald 27-gauge. Bijvoorbeeld, moet een muis met een gewicht van 20 g 0.5 mg L-012 ontvangen.</li>
	<li>Onmiddellijk na de L-012, elektronische injectie, zet de muizen weer hun respectieve plaatsen in de beeldvorming zaal. Het imago van de muizen in de loop van 60 minuten, 1 minuut met tussenpozen van 4 minuten. De 10-mm wond definiëren als de regio van belang voor het bepalen van de mate van ROS.</li>
	<li>Volgende chirurgie, dieren uit narcose verwijderen en plaatsen op de verwarming pad om goede herstel. Volgen de dieren totdat ze wakker en mobiele zijn.</li>
	<li>Zodra het volledig is hersteld, terug dieren naar afzonderlijke kooien, behoud van de zelfde post-operatieve verrijking omgeving eerder beschreven in 1.6. Dieren die ondergaan hebben chirurgie met andere dieren, om te voorkomen dat negatieve interacties en wijzigingen in de status van de genezende wond niet huis.</li>
</ol>

<ol><li>Nishinaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+sensitive+chemiluminescence+probe%2C+L-012%2C+for+measuring+the+production+of+superoxide+anion+by+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">A new sensitive chemiluminescence probe, L-012, for measuring the production of superoxide anion by cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 193 (2), 554-559 (1993).</li>
<li>Daiber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+NAD%28P%29H+oxidase-derived+superoxide+with+the+luminol+analogue+L-012%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Measurement of NAD(P)H oxidase-derived superoxide with the luminol analogue L-012.</a> Free Radical Biology and Medicine. 36 (1), 101-111 (2004).</li>
<li>Imada, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+reactive+oxygen+species+generated+by+neutrophils+using+a+chemiluminescence+probe+L-012%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Analysis of reactive oxygen species generated by neutrophils using a chemiluminescence probe L-012.</a> Analytical Biochemistry. 271 (1), 53-58 (1999).</li>
<li>Sohn, H. Y., Gloe, T., Keller, M., Schoenafinger, K., Pohl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+superoxide+detection+in+vascular+cells+by+the+new+chemiluminescence+dye+L-012%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Sensitive superoxide detection in vascular cells by the new chemiluminescence dye L-012.</a> Journal of Vascular Research. 36 (6), 456-464 (1999).</li>
<li>Fuchs, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Hypoxia+PET+Imaging+Quantifies+the+Severity+of+Arthritic+Joint+Inflammation+in+Line+with+Overexpression+of+Hypoxia-Inducible+Factor+and+Enhanced+Reactive+Oxygen+Species+Generation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo Hypoxia PET Imaging Quantifies the Severity of Arthritic Joint Inflammation in Line with Overexpression of Hypoxia-Inducible Factor and Enhanced Reactive Oxygen Species Generation.</a> The Journal of Nuclear Medicine. 58 (5), 853-860 (2017).</li>
<li>Asghar, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+murine+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammatory+Bowel+Diseases%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in murine colitis.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 20 (8), 1435-1447 (2014).</li>
<li>Galiano, R. D., Michaels, J. t, Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+and+reproducible+murine+model+of+excisional+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration. 12 (4), 485-492 (2004).</li>
<li>Soares, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+Nrf2+Signaling+Normalizes+the+Regenerative+Niche%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Restoration of Nrf2 Signaling Normalizes the Regenerative Niche.</a> Diabetes. 65 (3), 633-646 (2016).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+ROS+signaling+in+cells+and+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Imaging ROS signaling in cells and animals.</a> Journal of Molecular Medicine. 91 (8), 917-927 (2013).</li>
<li>Kielland, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+inflammation+using+the+luminescent+probe+L-012%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012.</a> Free Radical Biology and Medicine. 47 (6), 760-766 (2009).</li>
<li>Balke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+Oxidative+Cellular+Stress+Induced+by+Nanoparticles+in+the+Subcytotoxic+Range+Using+Fluorescence+Lifetime+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Visualizing Oxidative Cellular Stress Induced by Nanoparticles in the Subcytotoxic Range Using Fluorescence Lifetime Imaging.</a> Small. , (2018).</li>
<li>Zielonka, J., Lambeth, J. D., Kalyanaraman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+use+of+L-012%2C+a+luminol-based+chemiluminescent+probe%2C+for+detecting+superoxide+and+identifying+inhibitors+of+NADPH+oxidase%3A+a+reevaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">On the use of L-012, a luminol-based chemiluminescent probe, for detecting superoxide and identifying inhibitors of NADPH oxidase: a reevaluation.</a> Free Radical Biology and Medicine. 65, 1310-1314 (2013).</li>
<li>Dikalov, S. I., Harrison, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+detection+of+mitochondrial+and+cellular+reactive+oxygen+species%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants+%26+Redox+Signalling%22%5BJournal%5D)">Methods for detection of mitochondrial and cellular reactive oxygen species.</a> Antioxidants & Redox Signalling. 20 (2), 372-382 (2014).</li>
<li>Rabbani, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+Nrf2+activation+therapy+with+RTA+408+enhances+regenerative+capacity+of+diabetic+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Research+and+Clinical+Practice%22%5BJournal%5D)">Targeted Nrf2 activation therapy with RTA 408 enhances regenerative capacity of diabetic wounds.</a> Diabetes Research and Clinical Practice. 139, 11-23 (2018).</li>
<li>Rabbani, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+lipoproteoplex+delivers+Keap1+siRNA+based+gene+therapy+to+accelerate+diabetic+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Novel lipoproteoplex delivers Keap1 siRNA based gene therapy to accelerate diabetic wound healing.</a> Biomaterials. 132, 1-15 (2017).</li>
</ol>

We hebben geen onthullingen aan verslag.

Gemeenschappelijke technieken voor het meten van ROS hebben beperkt gebleven door complexe protocollen waarvoor weefsel extractie of vergelijkbare invasieve technieken. In de afgelopen jaren zijn de metingen van oxidatieve stress gemeld op basis van innovatieve beeldvormende modaliteiten, waardoor voor Spatio evaluaties9,10,11. L-012 heeft een aantal voordelen als een chemiluminescentie sonde ten opzichte van luminol, lucigenin ...

Zuurstof metabolieten gegenereerd door inflammatoire processen dragen bij aan verschillende signalering cascades evenals destructieve wijziging van cellulaire componenten1. Met behulp van gevoelige en specifieke technieken voor het meten van de ROS is essentieel voor het bestuderen van inflammatoire processen en karakteriseren van de effecten van oxidatieve stress. In vivo imaging is waardevol vanwege de mogelijkheid om dynamische ruimtelijke en temporele gegevens in levend weefsel te verstrekken. L-012 is een synthetische chemiluminescentie sonde die is zeer gevoelig voor superoxide anionen en produceert een hogere lichtintensiteit dan andere tl sondes in cellen, weefsels en bloed1,2,3, 4. het heeft met succes gewerkt voor in vivo imaging in lymfkliertest modellen te bestuderen van de verschillende ontstekingsziekten, met inbegrip van artritis en colitis5,6. Het moet nog worden ingezet in een gevestigde cutane wond genezing model. Meting van ROS gegenereerd is even relevant zijn voor het beoordelen van de voortgang van de wondgenezing onder verschillende omstandigheden. De gevoeligheid en de noninvasive aard van deze methode maakt het een veelbelovende techniek voor het bestuderen van de wondgenezing lymfkliertest modellen.
Nrf2 is een belangrijke motor van de antioxidant-respons en een transcriptionele factor met specificiteit voor de antioxidant respons-element (ARE) gemeenschappelijk aan de promotor gebieden van verschillende antioxidant enzymen8. Bij het ontbreken van oxidatieve stress, is Nrf2 afgezonderd in het cytoplasma door Keap1, waardoor vervolgens haar ubiquitination en afbraak. Onbalans van de Nrf2/Keap1-traject heeft betrokken bij ongepast redox homeostase en vertraagde wondgenezing in de omgeving van verhoogde oxidatieve stress9. Wij hebben eerder aangetoond dat de onderdrukking van de Keap1 verhoogde Nrf2 activiteit stimuleert en bevordert redding van pathologische cutane wondgenezing in diabetische wonden9.
Hier beschrijven we een protocol dat gebruikmaakt van L-012-bijgewoonde bioluminescentie imaging voor het meten van ROS niveaus in een excisional cutane wond genezing model, dat is van cruciaal belang voor het benadrukken van de associatie tussen ROS en wondgenezing. Deze techniek toont real-time wijzigingen in oxidatieve belasting binnen wonden en onmiddellijke periferie. Voorts staat deze methode voor snelle evaluatie van interventies en mechanismen die invloed redox behandeling. Hier gebruiken we een model van Keap1 knockdown voor het herstel van de redox homeostase te evalueren van de toepasbaarheid van onze strategie. Omdat onze techniek niet-invasief is en wonden ongestoord zijn, kan hetzelfde dier worden gebruikt voor verdere bevestigende analyses op basis van histologie of cel lysates.

<table><tbody><tr><td>BKS.Cg-Dock7m+/+ Leprdb/J mice</td><td>Jackson Laboratories</td><td>000642</td><td></td></tr><tr><td>13 cm x 18 cm Silicone sheet (0.6 mm)</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;</td><td>665581</td><td></td></tr><tr><td>3M Tegaderm Transparent Film Dressings</td><td>3M</td><td>88-1626W</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td>11668027</td><td></td></tr><tr><td>Keap1 Stealth siRNA</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>1299001</td><td></td></tr><tr><td>Silencer negative control&nbsp;</td><td>Thermofisher Scientific&nbsp;</td><td>AM4635</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM Reduced Serum</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11058021</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14040133</td><td></td></tr><tr><td>Methyl-cellulose&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9004-67-5</td><td></td></tr><tr><td>L-012</td><td>Wako Chemicals</td><td>120-04891</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina III XR In Vivo Imaging System&nbsp;</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo beeldvorming van reactieve zuurstof soorten in een rattenuitrustingen wond model

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

De generatie van reactieve zuurstof soorten (ROS) is een kenmerk van inflammatoire processen, maar in overmaat, oxidatieve stress is sterk betrokken bij verschillende ziektebeelden zoals kanker, atherosclerose en diabetes. Wij hebben eerder getoond dat disfunctie van de nucleaire factor (erythroid afkomstige 2)-2 (Nrf2) leuk / Kelch-achtige erythroid cel afkomstige eiwit 1 (Keap1) signalering traject leidt tot extreme ROS onbalans tijdens cutane wondgenezing bij diabetes. Aangezien ROS niveaus een belangrijke indicator voor voortgang zijn van wondgenezing, zijn specifieke en nauwkeurige kwantificering technieken waardevol. Verscheidene in vitro tests voor het meten van ROS in cellen en weefsels zijn beschreven; Zij bieden echter slechts een enkele cumulatieve meting per monster. Meer recentelijk hebben de ontwikkeling van indicatoren op basis van eiwitten en beeldvormende modaliteiten toegestaan voor unieke Spatio analyses. L-012 (C13H8ClN4NaO2) is een derivaat van luminol dat kan worden gebruikt voor zowel in vivo en in vitro chemiluminescentie detectie van ROS gegenereerd door NAPDH-oxidase. L-012 stoot een sterker signaal dan andere tl sondes en heeft aangetoond dat zowel gevoelige en betrouwbare voor het opsporen van ROS. De tijd vervallen toepasselijkheid van L-012-vergemakkelijkt imaging biedt waardevolle informatie over inflammatoire processen terwijl het verminderen van de noodzaak van offer en over het algemeen het aantal studie dieren te verminderen. Hier beschrijven we een protocol met behulp van L-012-vergemakkelijkt in vivo imaging om te kwantificeren oxidatieve stress in een model van excisional wondgenezing met behulp van diabetesmuizen met lokaal disfunctionele Nrf2/Keap1.

Drie dagen na het maken van bilaterale wonden volgens een gevestigde excisional wond model (figuur 1A), bevinden diabetesmuizen zich in de beeldvorming zaal. Een eerste foto en een zekere mate van bioluminescentie worden genomen vóór injectie van L-012 voor achtergrond signaal (figuur 1B). Na intraperitoneale injectie met de oplossing van de L-012, de muizen worden verplaatst in de kamer en bioluminescentie is gevisualiseerd in g...

Een niet-invasieve in vivo imaging protocol dat is gestroomlijnd en kosteneffectieve, beschrijven we met behulp van L-012, een chemiluminescentie luminol-analoog, om te visualiseren en te kwantificeren van reactieve zuurstof soorten (ROS) gegenereerd in een excisional wond muismodel.

In Vivo Beeldvorming van reactieve zuurstof soorten in een RattenUitrustingen wond Model

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het gebied weefselherstel en regeneratie over de associaties tussen de cytoprotectieve paden, oxidatieve stress en de wondgenezingsreactie. Het belangrijkste voordeel van deze krachtige techniek is dat u reactieve zuurstofsoorten in een wond in real-time meten om hun impact op weefselregeneratie te bepalen. Het aantonen van de procedure met mij zal Jennifer Kwong, een onderzoeksassistent in mijn laboratorium.Gebruik een glucometer om de bloedglucose van elke verdoofde acht tot 12 weken oude diabetische muis te meten. En gebruik een haartrimmer en ontharingscrème om het dorsale haar van het eerste dier te verwijderen. Gebruik alcoholdoekjes twee keer om de blootgestelde huid schoon te maken en het dier te draperen, zodat alleen het chirurgische gebied wordt blootgesteld.Wanneer de alcohol is gedroogd, gebruik steriele 10 millimeter biopsie stoten om twee, 10 millimeter volledige dikte wonden die zich uitstrekt door de panniculus carnosus volgens een gevestigde excisional wond healing techniek te creëren. Gebruik een 0,5 millimeter dikke siliconen plaat met 10 millimeter cirkelvormige uitsparingen om de wonden ope

in-vivo-imaging-of-reactive-oxygen-species-in-a-murine-wound-model

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

NADPH oxidase is de belangrijkste bron van reactieve zuurstof species (ROS) in fagocyten. Vanwege de vluchtigheid van ROS is moeilijk te meten en te controleren ROS levels in levende dieren. Een minimaal invasieve methode voor seriële kwantificering van ROS in levende muizen beschreven.

Bioluminescentie beeldvorming van NADPH-oxidase activiteit in verschillende diermodellen

Source: Hunt, A. M. A., et al. Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model. J. Vis. Exp.(2017).This video demonstrates the procedure for assessing infection clearance and healing progression in a wounded diabetic mouse using bioluminescent and microscopic images.

Bioluminescence Imaging to Track Bacterial Infection and Wound Healing in a Mouse Model

This video demonstrates in vivo imaging to study the neutrophil recruitment dynamics at an infection site in an immunocompromised, transgenic mouse with GFP-expressing neutrophils. It involves injecting luminescent bacteria to cause an infection. This leads to neutrophil recruitment to the infection site, whose tracking is done by imaging.

Monitoring Neutrophil Recruitment Dynamics and Bacterial Burden at the Infection Site in a Murine Model

This video demonstrates a technique to generate a murine model of skin wound infection. Upon infecting mice — engineered to express a fluorescent protein in neutrophils — with a genetically modified bioluminescent Staphylococcus aureus — a pathogenic bacteria. The bacterial burden at the infection site and the neutrophil recruitment dynamics can be studied using whole animal imaging.

A Murine Skin Wound Infection Model to Study the Immune Response against a Bacterial Pathogen

Een murine model van cutane wondgenezing die kunnen worden gebruikt om therapeutische samenstellingen te beoordelen fysiologische en pathofysiologische instellingen.

Muizenmodel van wondgenezing

Dit protocol beschrijft de inductie van een ischemie-reperfusie (IR) model op de muis oor huid met behulp van magneet klemmen. Met behulp van een custom-built intravitale imaging model, bestuderen we in vivo ontstekingsreacties post-reperfusie. De reden voor de ontwikkeling van deze techniek is om te begrijpen hoe leukocyten reageren op huid IR schade verlengen.

Induceren van ischemie-reperfusie schade in de Mouse Ear Skin voor intravitale Multiphoton Imaging van immuunresponsen

Hier beschrijven we een roman diabetische lymfkliertest model met behulp van haarloze muizen voor real-time, niet-invasieve, bewaking van biofilm wond infecties van bioluminescente Pseudomonas aeruginosa. Deze methode kan worden aangepast aan de infectie van andere bacteriesoorten en genetisch gemodificeerde micro-organismen, met inbegrip van meerdere soorten biofilms, evalueren en testen van de werkzaamheid van antibiofilm strategieën.

Aan de kant van licht komen: In Vivo Monitoring van Pseudomonas aeruginosa Biofilm infecties in chronische wonden in een diabetische haarloze lymfkliertest Model

Een aanpak wordt beschreven voor real-time detectie van de ingeboren immune reactie op het verwonden van cutane en Staphylococcus aureus -infectie van muizen. Door vergelijking LysM-EGFP muizen (die bezitten fluorescerende neutrofielen) met een LysM-EGFP gekruist immunodeficiëntie muis stam, we vooraf ons begrip van de infectie en de ontwikkeling van benaderingen ter bestrijding van de infectie.

Een muismodel te beoordelen ingeboren immuunreactie op Staphylococcus aureus -infectie

Het doel van dit protocol is om voorbijgaande in vivo productie van niet-dodelijke niveaus van reactieve zuurstofsoorten (ROS) in de huid van muizen te induceren, waardoor fysiologische reacties in het weefsel verder worden bevorderd.

Stimulatie van stamcelniches en weefselregeneratie in muizenhuid door schakelbare protoporfyrine IX-afhankelijke fotogeneratie van reactieve zuurstofsoorten in situ

Het doel van deze studie was om een murine model van burn wound healing te ontwikkelen. Een thermische brandwond werd veroorzaakt op de rughuid van muizen met behulp van een voorverwarmde messing sjabloon. Verbrand weefsel werd gedebrideerd en bedekt met een huidtransplantatie geoogst uit de staart van een genetisch vergelijkbare donormuis.

Een Murine Model van een burn wound gereconstrueerd met een allogene huidtransplantatie

Het huidige protocol beschrijft een methode om reactieve zuurstofsoorten (ROS) in de intestinale muriene organoïden te detecteren met behulp van kwalitatieve beeldvorming en kwantitatieve cytometrie-assays. Dit werk kan mogelijk worden uitgebreid naar andere fluorescerende sondes om het effect van geselecteerde verbindingen op ROS te testen.

Analyse van oxidatieve stress in murine intestinale organoïden met behulp van reactieve zuurstof soortgevoelige fluorogene sonde

Leer hoe je reactieve zuurstofsoorten in vivo kunt beeldvormen in een muizenwondmodel met L-012 chemiluminescentie. Deze niet-invasieve methode maakt real-time meting van ROS mogelijk voor onderzoek naar weefselherstel.

In Vivo Beeldvorming van reactieve zuurstof soorten in een RattenUitrustingen wond Model

Meer video's verkennen