Name: Antimicrobiële synergie testen door de Inkjet Printer-bijgewoonde geautomatiseerde dambord matrix en de handmatige methode van de tijd-kill (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 3 s
Description: Leer een geautomatiseerde inkjetprinter-gebaseerde dambordmatrixmethode voor antimicrobiële synergie-testen, vergeleken met handmatige time-kill assays. Deze techniek versnelt screening van antibiotica-combinaties tegen resistente bacteriën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Thea Brennan-Krohn werd gesteund door een Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health en menselijke ontwikkeling pediatrische-infectieziekten onderzoek opleiding grant (T32HD055148), een National Institute of Allergy en infectieziekten opleiding subsidie) T32AI007061), een Boston Children's Hospital Office van faculteit ontwikkeling faculteit Career Development fellowship, en een National Institute of Allergy and Infectious Diseases carrière ontwikkeling award (1K08AI132716). J.E.K. werd gesteund door de National Institute of Allergy and Infectious Diseases van de National Institutes of Health onder award nummer R33 AI119114. De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijk de officiële standpunten van de National Institutes of Health.

<ol><li>Temkin, E., Adler, A., Lerner, A., Carmeli, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbapenem-resistant+Enterobacteriaceae%3A+Biology%2C+epidemiology%2C+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae: Biology, epidemiology, and management.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1323 (1), 22-42 (2014).</li>
<li>Spellberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">The future of antibiotics.</a> Critical Care. 18 (3), (2014).</li>
<li>Spellberg, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemic+of+antibiotic-resistant+infections%3A+a+call+to+action+for+the+medical+community+from+the+Infectious+Diseases+Society+of+America%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+infectious+diseases+an+official+publication+of+the+Infectious+Diseases+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">The epidemic of antibiotic-resistant infections: a call to action for the medical community from the Infectious Diseases Society of America.</a> Clinical infectious diseases an official publication of the Infectious Diseases Society of America. 46 (2), 155-164 (2008).</li>
<li>Elemam, A., Rahimian, J., Doymaz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evaluation+of+antibiotic+synergy+for+polymyxin+B-resistant+carbapenemase-producing+Klebsiella+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">In vitro evaluation of antibiotic synergy for polymyxin B-resistant carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae.</a> Journal of Clinical Microbiology. 48 (10), 3558-3562 (2010).</li>
<li>Poirel, L., Kieffer, N., Nordmann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evaluation+of+dual+carbapenem+combinations+against+carbapenemase-producing+Enterobacteriaceae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">In vitro evaluation of dual carbapenem combinations against carbapenemase-producing Enterobacteriaceae.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 71 (1), 156-161 (2016).</li>
<li>Odds, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy%2C+antagonism%2C+and+what+the+chequerboard+puts+between+them%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Synergy, antagonism, and what the chequerboard puts between them.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 52, (2003).</li>
<li>Zusman, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review+and+meta-analysis+of+in+vitro+synergy+of+polymyxins+and+carbapenems%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Systematic review and meta-analysis of in vitro synergy of polymyxins and carbapenems.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (10), 5104-5111 (2013).</li>
<li>Clock, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+activity+of+doripenem+alone+and+in+multi-agent+combinations+against+extensively+drug-resistant+Acinetobacter+baumannii+and+Klebsiella+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+Microbiology+and+Infectious+Disease%22%5BJournal%5D)">In vitro activity of doripenem alone and in multi-agent combinations against extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii and Klebsiella pneumoniae.</a> Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 76 (3), 343-346 (2013).</li>
<li>Hirsch, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+antimicrobial+combinations+for+Klebsiella+pneumoniae+carbapenemase-producing+K.+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Assessment of antimicrobial combinations for Klebsiella pneumoniae carbapenemase-producing K. pneumoniae.</a> Journal of Infectious Diseases. 207 (5), 786-793 (2013).</li>
<li>Tängdén, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+double-+and+triple-antibiotic+combinations+for+VIM-+and+NDM-producing+klebsiella+pneumoniae+by+in+vitro+time-kill+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Evaluation of double- and triple-antibiotic combinations for VIM- and NDM-producing klebsiella pneumoniae by in vitro time-kill experiments.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58 (3), 1757-1762 (2014).</li>
<li>Tascini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+activity+of+colistin+plus+rifampin+against+colistin-resistant+kpc-producing+klebsiella+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Synergistic activity of colistin plus rifampin against colistin-resistant kpc-producing klebsiella pneumoniae.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (8), 3990-3993 (2013).</li>
<li>Paul, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+for+carbapenem-resistant+Gram-negative+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Combination therapy for carbapenem-resistant Gram-negative bacteria.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (9), 2305-2309 (2014).</li>
<li>Rafailidis, P. I., Falagas, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Options+for+treating+carbapenem-resistant+Enterobacteriaceae%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Options for treating carbapenem-resistant Enterobacteriaceae.</a> Current Opinion in Infectious Diseases. 27 (6), 479-483 (2014).</li>
<li>Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Verification+of+an+automated%2C+digital+dispensing+platform+for+at-will+broth+microdilution-based+antimicrobial+susceptibility+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Verification of an automated, digital dispensing platform for at-will broth microdilution-based antimicrobial susceptibility testing.</a> Journal of Clinical Microbiology. 54 (9), 2288-2293 (2016).</li>
<li>Brennan-Krohn, T., Truelson, K., Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+for+Synergistic+Activity+of+Antimicrobial+Combinations+Against+Carbapenem-Resistant+Enterobacteriaceae+Using+Inkjet+Printer-Based+Technology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Screening for Synergistic Activity of Antimicrobial Combinations Against Carbapenem-Resistant Enterobacteriaceae Using Inkjet Printer-Based Technology.</a> J Antimicrob Chemother. 72 (10), 2775-2781 (2017).</li>
<li>Brennan-Krohn, T., Pironti, A., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+Activity+of+Colistin-Containing+Combinations+against+Colistin-Resistant+Enterobacteriaceae%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Synergistic Activity of Colistin-Containing Combinations against Colistin-Resistant Enterobacteriaceae.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2018).</li>
<li>Falagas, M. E., Kasiakou, S. K., Saravolatz, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colistin%3A+The+Revival+of+Polymyxins+for+the+Management+of+Multidrug-Resistant+Gram-Negative+Bacterial+Infections%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Colistin: The Revival of Polymyxins for the Management of Multidrug-Resistant Gram-Negative Bacterial Infections.</a> Clinical Infectious Diseases. 40 (9), 1333-1341 (2005).</li>
<li>Nation, R. L., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colistin+in+the+21st+century%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Colistin in the 21st century.</a> Current Opinion in Infectious Diseases. 22 (6), 535-543 (2009).</li>
<li>Ah, Y. -M., Kim, A. -J., Lee, J. -Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colistin+resistance+in+Klebsiella+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Antimicrobial+Agents%22%5BJournal%5D)">Colistin resistance in Klebsiella pneumoniae.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 44 (1), 8-15 (2014).</li>
<li>Bratu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbapenemase-producing+Klebsiella+pneumoniae+in+Brooklyn%2C+NY%3A+Molecular+epidemiology+and+in+vitro+activity+of+polymyxin+B+and+other+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae in Brooklyn, NY: Molecular epidemiology and in vitro activity of polymyxin B and other agents.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 56 (1), 128-132 (2005).</li>
<li>Barth, N., Ribeiro, V. B., Zavasckid, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+activity+of+polymyxin+B+plus+imipenem%2C+meropenem%2C+or+tigecycline+against+KPC-2-producing+Enterobacteriaceae+with+high+MICs+for+these+antimicrobials%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">In vitro activity of polymyxin B plus imipenem, meropenem, or tigecycline against KPC-2-producing Enterobacteriaceae with high MICs for these antimicrobials.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (6), 3596-3597 (2015).</li>
<li>MacLowry, J., Jaqua, M., Selepak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+methodology+and+implementation+of+a+semiautomated+serial+dilution+microtechnique+for+antimicrobial+susceptibility+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detailed methodology and implementation of a semiautomated serial dilution microtechnique for antimicrobial susceptibility testing.</a> Appl Microbiol. 20 (1), 46-53 (1970).</li>
<li>Brennan-Krohn, T., Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+poisoned+well%3A+Enhancing+the+predictive+value+of+antimicrobial+susceptibility+testing+in+the+era+of+multidrug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The poisoned well: Enhancing the predictive value of antimicrobial susceptibility testing in the era of multidrug resistance.</a> Journal of Clinical Microbiology. 55 (8), 2304-2308 (2017).</li>
<li>Doern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+does+2+plus+2+equal+5%3F+A+review+of+antimicrobial+synergy+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">When does 2 plus 2 equal 5? A review of antimicrobial synergy testing.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (12), 4124-4128 (2014).</li>
<li>CLSI. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Performance+Standards+for+Antimicrobial+Susceptibility+Testing.+28th+ed.+CLSI+supplement+M100%22">Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. 28th ed. CLSI supplement M100</a>. , Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2018).</li>
<li>CLSI. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Methods+for+Dilution+Antimicrobial+Susceptibility+Tests+for+Bacteria+That+Grow+Aerobically%3B+Approved+Standard+-+Tenth+Edition.+CLSI+document+M07-A10%22">Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard - Tenth Edition. CLSI document M07-A10</a>. , (2015).</li>
<li>Clinical and Laboratory Standards Institute. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22M07%3A+Methods+for+Dilution+Antimicrobial+Susceptibility+Tests+for+Bacteria+That+Grow+Aerobically%2C+11th+Edition%22">M07: Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically, 11th Edition</a>. , Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. (2018).</li>
<li>Clinical and Laboratory Standards Institute. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Methods+for+determining+bactericidal+activity+of+antimicrobial+agents%3B+approved+guideline+M26-A%22">Methods for determining bactericidal activity of antimicrobial agents; approved guideline M26-A</a>. 19 (18), Clinical and Laboratory Standards Institute. Wayne, PA. 7(1999).</li>
<li>Naghili, H., Tajik, H., Mardani, K., Razavi Rouhani, S. M., Ehsani, A., Zare, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+drop+plate+technique+for+bacterial+enumeration+by+parametric+and+nonparametric+tests%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+research+forum%22%5BJournal%5D)">Validation of drop plate technique for bacterial enumeration by parametric and nonparametric tests.</a> Veterinary research forum. 4 (3), 179-183 (2013).</li>
<li>Chen, C. Y., Nace, G. W., Irwin, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+6x6+drop+plate+method+for+simultaneous+colony+counting+and+MPN+enumeration+of+Campylobacter+jejuni%2C+Listeria+monocytogenes%2C+and+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">A 6x6 drop plate method for simultaneous colony counting and MPN enumeration of Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, and Escherichia coli.</a> Journal of Microbiological Methods. 55 (2), 475-479 (2003).</li>
<li>Queenan, A. M., Foleno, B., Gownley, C., Wira, E., Bush, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Inoculum+and+Activity+in+AmpC-+and+Extended-Spectrum+%28ESBL%29-Producing+Escherichia+coli+and+Klebsiella+pneumoniae+Clinical+Isolates+Tested+by+Using+NCCLS+ESBL+Methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Effects of Inoculum and Activity in AmpC- and Extended-Spectrum (ESBL)-Producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae Clinical Isolates Tested by Using NCCLS ESBL Methodology.</a> Journal of Clinical Microbiology. 42 (1), 269-275 (2004).</li>
<li>Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Inoculum+Effect+in+the+Era+of+Multidrug+Resistance%3A+Minor+Differences+in+Inoculum+Have+Dramatic+Effect+on+Minimal+Inhibitory+Concentration+Determination%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">The Inoculum Effect in the Era of Multidrug Resistance: Minor Differences in Inoculum Have Dramatic Effect on Minimal Inhibitory Concentration Determination.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2018).</li>
<li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergism+Testing%3A+Broth+Microdilution+Checkerboard+and+Broth+Macrodilution+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Procedures+Handbook%2C+Fourth+Edition%22%5BJournal%5D)">Synergism Testing: Broth Microdilution Checkerboard and Broth Macrodilution Methods.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. , 5.16.1-5.16.23 (2016).</li>
<li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-Kill+Assay+for+Determining+Synergy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Procedures+Handbook%2C+Fourth+Edition%22%5BJournal%5D)">Time-Kill Assay for Determining Synergy.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. , 5.14.3.1-5.14.3.6 (2016).</li>
<li>Hindler, J. A., Humphries, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colistin+MIC+variability+by+method+for+contemporary+clinical+isolates+of+multidrug-resistant+gram-negative+bacilli%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Colistin MIC variability by method for contemporary clinical isolates of multidrug-resistant gram-negative bacilli.</a> Journal of Clinical Microbiology. 51 (6), 1678-1684 (2013).</li>
<li>Sutherland, C. A., Nicolau, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+add+or+not+to+add+Polysorbate+80%3A+Impact+on+colistin+MICs+for+clinical+strains+of+Enterobacteriaceae+and+Pseudomonas+aeruginosa+and+quality+controls%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">To add or not to add Polysorbate 80: Impact on colistin MICs for clinical strains of Enterobacteriaceae and Pseudomonas aeruginosa and quality controls.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (10), 3810(2014).</li>
<li>Fuchs, P. C., Barry, aL., Brown, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+testing+quality+control+studies+with+fosfomycin+tromethamine%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+clinical+microbiology+%26+infectious+diseases+official+publication+of+the+European+Society+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Susceptibility testing quality control studies with fosfomycin tromethamine.</a> European journal of clinical microbiology & infectious diseases official publication of the European Society of Clinical Microbiology. 16 (7), 538-540 (1997).</li>
<li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimum+Bactericidal+Concentration+Testing%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Procedures+Handbook%2C+Fourth+Edition.+5.14.1.11%22%5BJournal%5D)">Minimum Bactericidal Concentration Testing.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. 5.14.1.11. , 5.14.1.11 (2016).</li>
<li>Cai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+activity+of+polymyxin+B+in+combination+with+various+antibiotics+against+extensively+drug-resistant+Enterobacter+cloacae+with+decreased+susceptibility+to+polymyxin+B%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">In vitro activity of polymyxin B in combination with various antibiotics against extensively drug-resistant Enterobacter cloacae with decreased susceptibility to polymyxin B.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 60 (9), 5238-5246 (2016).</li>
<li>Bulman, Z. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymyxin+combinations+combat+Escherichia+coli+harboring+mcr-1+and+blaNDM-5%3A+Preparation+for+a+postantibiotic+Era%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Polymyxin combinations combat Escherichia coli harboring mcr-1 and blaNDM-5: Preparation for a postantibiotic Era.</a> mBio. 8 (4), (2017).</li>
</ol>

De D300 digitale Dispenser en bijbehorende verbruiksmaterialen werden verstrekt door Tecan (Morrisville, NC). Tecan had geen rol in de studie ontwerp, data collectie/interpretatie, manuscript voorbereiding of besluit te publiceren.

De twee methoden die hier worden beschreven bieden beide informatie over de activiteit van antimicrobiële stoffen gebruikt in combinatie ten opzichte van hun individuele activiteit. De geautomatiseerde, inkjet printer-bijgewoonde digitale toedieningseenheden methode is een aanpassing van de methode beschreven in de klinische microbiologie Procedures handboek33, terwijl de tijd-kill methode nauwer blijkens het bijbehorende protocol hetzelfde verwijst naar de34.
In de methode dambord matrix berekeningen om te bepalen van de benodigde hoeveelheid antimicrobiële voorraad toe te voegen aan elk putje en de verstrekking van deze volumes is geautomatiseerd, waardoor enkele van de belangrijkste potentiële bronnen van fout opgetreden in een handleiding Dambord matrix. Het is echter nog steeds noodzakelijk dat de onderzoeker bepaalt dat oorspronkelijke bestanden zijn gemaakt bij de voorgenomen concentratie en dat doel eindconcentraties de D300-software correct worden aangegaan. De antimicrobiële schorsing aan putjes in de plaat van een 384-well eerst kan worden uitdagend en vereist zorg toe te voegen om ervoor te zorgen dat Pipetteer tips Voer de juiste putjes en die vloeistof niet plons up gemaakt van de randen van de putten. Een geautomatiseerde vloeibare-handler kan worden gebruikt in plaats van een hand-held meerkanaalspipet te verhogen van de snelheid en nauwkeurigheid waarmee de bacteriële suspensie wordt toegevoegd aan putjes. Zoals beschreven in het protocol, vereist de D300 de toevoeging van de oppervlakteactieve stof, Polysorbaat 20 (P-20), voor de correcte afhandeling van de liquid. Een andere oppervlakteactieve stof, polysorbaat 80, met een concentratie van 0.002%, geconstateerd tot lagere colistine microfoons voor organismen met colistine microfoons van < 2 µg/mL in standaard Bouillon microdilution testen. 35 , 36 ons laboratorium eerder aangetoond dat P-20 bij concentraties tot 0.0015% had geen effect op de D300-bijgewoonde MIC resultaten in vergelijking met referentie BMD14. In het voorbeeld van assay hier gepresenteerd, is de maximale P-20 concentratie 0.0014%.
Een probleem we ondervonden met sommige dambord matrix testen was een groot aantal overgeslagen wells. Dit gebeurde in een onevenredige tempo met bepaalde antibiotica. In het bijzonder in een scherm van combinaties tegen een verzameling carbapenem-resistente Enterobacteriaceaevonden we dat terwijl 49 521 proeven (9,4%) onbruikbaar als gevolg van meerdere overgeslagen wells, werden 2 van de 12 antibiotica getest (fosfomycin en cefepime) goed voor 46 van deze proeven (94%). Dergelijke verhoogde tarieven kunnen waarschijnlijk meer in geneesmiddelen die vooral gevoelig voor de entmateriaal effect31,32,37 zijn. Van de nota adviseert CLSI niet testen van de fosfomycin in Bouillon verdunning25 als gevolg van bezorgdheid over de betrouwbaarheid van de resultaten met deze methode, wat de onbetrouwbare resultaten gezien met deze drug verklaren kan. Sommige wijzigingen kunnen worden aangebracht aan geautomatiseerde dambord methode volgens de voorkeur van de onderzoeker. Antimicrobiële stoffen kunnen achterwege worden gelaten in platen al met bacteriële suspensie, in plaats van in lege wells, als dat beter dan omwille van de werkstroom binnen het laboratorium is. Terwijl 384-Wells-platen hier gebruikt werden, kan de methode ook worden uitgevoerd in 96-wells-plaat testen met passende wijziging van goed volume. Het gebruik van een 96-wells-plaat-formaat kan helpen bij de vermindering overgeslagen putten voor antibiotica die bijzonder gevoelig voor kleine veranderingen in de entmateriaal zijn. Bij de berekening van "fic"ik, kunnen er situaties waarin de microfoon uit-schaal (d.w.z., hoger dan getest), met inbegrip van situaties waarin de geteste drug heeft geen activiteit individueel tegen het soort organisme wordt getest. In deze gevallen, kan het "fic" worden berekend op basis van uitgaande van dat de microfoon is een verdunning hoger dan de hoogste geteste concentratie. Dit is de meest conservatieve strategie, zoals wordt ervan uitgegaan de maximale mogelijke "fic" waarde voor elke verdunning waar remming wordt waargenomen dat tijdens het testen van synergie. Bijvoorbeeld, als de werkelijke MIC in plaats daarvan twee verdubbeling verdunningen bovenstaande werden de hoogste concentratie getest, dan de overeenkomstige FICs zou twee-voudige lager dan de conservatieve toewijzingen, enzovoort.
Om nauwkeurig beoordelen de bactericide activiteit van drugs in een test van de tijd-doden, is het essentieel dat culturen in logaritmische-fase groei, met name wanneer de celwand actieve antibiotica worden geteste28. Voor de snel groeiende bacteriën gebruikt in dit voorbeeld (K. pneumoniae), 3 uur incubatie met schudden was nodig om te bereiken deze groeifase, maar verschillende hoeveelheden tijd nodig kunnen zijn voor andere organismen. In het algemeen de cultuur moet worden zichtbaar maar niet zwaar troebel weergegeven. De juiste hoeveelheid tijd kan worden bepaald door de aanleg van een groeicurve met kolonie graven op38punten (bijvoorbeeld elke 30 min voor 4-6 h) seriële tijd genomen. Het beoogde begin entmateriaal in de tijd-kill studie is ook belangrijk. De concentratie van de doelgroep van de startende entmateriaal is ongeveer 5 x 105 tot en met 1 x 106 CFU/mL. De hier beschreven verdunning (100 μl van een 1.0 McFarland suspensie in 10 mL van media) genereert deze entmateriaal op Klebsiella pneumoniae en andere soorten van de Enterobacteriaceae die we hebben getest. Als de dichtheid van de startende entmateriaal in een experiment met verschillende organismen aanzienlijk hoger of lager zijn dan dit is, kan dan een andere verdunning nodig zijn. (De aangewezen verdunning die nodig zijn voor een bepaalde soort kan worden bepaald door een kiemgetal van 0,5 of 1.0 McFarland schorsing uit te voeren om te bepalen hoeveel organismen dit troebelheid vertegenwoordigt, dan het berekenen van het bedrag waarmee de eerste schorsing moet worden verdund om te bereiken van de juiste eindconcentratie.) Indien over herziening van de graven van de plaat uit de studie van de synergie, de startende entmateriaal van om het even welk van de antibiotica-bevattende buisjes wordt gevonden te zijn aanzienlijk lager dan de startende entmateriaal van het groei-besturingselement, kan dit erop wijzen beide antibiotica overdracht of zeer snelle doden van bacteriën in de korte tijd tussen de toevoeging van bacteriën aan de antibiotica-bevattende buis en verwijdering van het afgepipetteerde deel voor beplating. Als het werkelijke aantal kolonies in het onverdunde drop in een serie lager dan het aantal kolonies in latere verdunningen is, suggereert dit antibioticum overdracht effect. Verschillende opties zijn beschreven voor het voorkomen van dit effect, met inbegrip van een één aliquot verspreiding via een hele plaat38 of spinnen naar beneden van het monster, de bovendrijvende vloeistof verwijderen en opnieuw schorsen in steriele zoutoplossing voorafgaand aan39plating. Op elk tijdstip in de tijd-kill-methode is het ook cruciaal voor de onderzoeker efficiënt maar nauwkeurig verwijderen van een aliquoot deel van elke cultuur buis en seriële verdunningen uit te voeren. Vertragingen tijdens dit proces, met name tijdens de vroege tijdstippen die in nauwe opvolging optreden, kunnen leiden tot langere periodes gedurende welke culturen niet zijn geïncubeerd en geschud, overwegende dat onzorgvuldige verstrekking en seriële verdunningen tot onnauwkeurige plaat leiden kunnen graven. In vergelijking met de verspreiding plaat methode van de plaat tellen, waarin 100 μl van elke verdunning wordt gespreid over een hele agarplaat, de beschreven methode van de drop-plaat is veel meer snelle, vereist een veel kleiner aantal agar platen, en voorziet in snellere tellen, als de maximale hoeveelheid aftelbare aantal kolonies voor elke daling is 30, terwijl tot 300 kolonies kan meestal worden geteld van een plaat van de verspreiding. De methode van de plaat verspreiding is echter ook een optie als onderzoekers meer vertrouwd bent met deze techniek. Als druppels verspreid in elkaar na verstrekking met een meerkanaalspipet, kan individuele toepassing van grotere schaal verdeelde druppels met een pipet één-kanaals in plaats daarvan worden uitgevoerd. In onze ervaring leek koeling platen bij 4 ° C vóór de verstrekking van druppels om buitensporige verspreiden.
Een beperking van de hier beschreven technieken is dat de resultaten van de twee soorten synergie assay (dambord matrix en tijd-kill) niet altijd concordant zijn, en aangezien meest gepubliceerde synergie artikelen één methode of de andere plaats beide samen gebruiken, het kan moeilijk zijn om te weten hoe om gegevens uit de twee typen van tests te integreren. Omdat de geautomatiseerde dambord matrix methode die we ontwikkeld eenvoudig is en high-throughput, we hebben het gebruikt in feite als een soort scherm testcombinaties tegen een groter aantal isolaten en te bepalen welke concentratie combinaties waren synergetische. We uitgevoerd dan een kleiner aantal tijd-kill studies, combinaties en concentraties die had gewerkt in de matrix dambord te selecteren. Van de nota, omdat de dambord bepaling worden doorgaans uitgevoerd op een schaal van microbroth verdunning, terwijl de tijd-kill-bepaling maakt gebruik van grotere volumes (vergelijkbaar met een verdunning van macrobroth), vonden we dat FICs soms verschillend tussen de twee methoden waren, met hogere concentraties in het algemeen nodig in de bepaling van de tijd-doden om aan te tonen van de activiteit. Dit verschijnsel is geconstateerd eerder als macrobroth en microbroth verdunning MIC assay resultaten worden vergeleken voor gramnegatieve bacillen26 en wanneer grotere entmateriaal (zoals gebruikt in de tijd-kill studies) worden vergeleken met de standaard entmateriaal gebruikt in microbroth verdunnings- en dambord matrix testen32. Een specifieke beperking van het dambord-matrix is de inherente variabiliteit in microbroth verdunning MIC testen van22. Terwijl "fic"ik cutoffs voor synergie-account voor deze variabiliteit wiskundig6 dergelijke variabiliteit onvermijdelijk leidt tot bezorgdheid over de betrouwbaarheid en consistentie van dambord matrix resultaten.
Vanwege de beperkingen die inherent zijn aan alle in vitro synergie testmethoden (met inbegrip van de teelt van bacteriën in een kunstmatige groeimedium, statische antibiotica concentraties en een beperkte tijdsverloop), volgens deze methoden verkregen resultaten moeten worden bevestigd en verder geëvalueerd met behulp van aanvullende technieken. Dergelijke methoden omvatten in vitro farmacokinetische/farmacodynamische (PK/PD) studies (bijvoorbeeld de holle vezel infectie model40), dierlijke modellen, en, uiteindelijk, menselijke PK/PD en werkzaamheid studies. De geautomatiseerde dambord matrix methode hier beschreven, door het verstrekken van een snelle methode waarmee aan scherm combinaties voor potentiële synergetische activiteit, zorgt voor meer gerichte gebruik van deze technieken. Verdere automatisering van al deze methoden, als goed als meer systematische onderzoek naar de relatie tussen in vitro parameters en de klinische resultaten, dient bij schaal-up van het gebruik van de synergie testen en de klinische toepasbaarheid ervan verhogen.

De verspreiding van multiresistente (MDR) bacteriële pathogenen, met name MDR gramnegatieve bacteriën zoals carbapenem-resistente Enterobacteriaceae (CRE), heeft clinici verlaten met steeds beperkte opties voor succesvolle infectiebestrijdende therapie 1, een probleem verergerd door het trage tempo van de roman antibacteriële drug discovery2,3. Antimicrobiële synergie, waarin twee geneesmiddelen die gebruikt worden in combinatie een groter-dan-additief effect oefenen, biedt de mogelijkheid van berging van bestaande antibiotica voor gebruik bij behandeling van MDR bacteriën, zelfs wanneer deze bacteriën resistent zijn tegen een of beide van de antibiotica individueel. De technieken beschreven in dit document bieden twee complementaire methoden voor in vitro synergy tests die, wanneer samen gebruikt, staan onderzoekers aan efficiënt scherm antimicrobiële combinaties van belang voor het bewijs van de synergetische activiteiten (de geautomatiseerde Dambord matrix methode) en vervolgens verder evalueren de kinetiek van inhibitie en doden aangetoond door veelbelovende combinaties geïdentificeerd in het stadium van de screening (de handmatige methode-tijd-kill).
Een van de meest gebruikte methoden voor het testen van in vitro synergie is de bepaling van de matrix Dambord, een wijziging van het testen van de minimaal remmende concentratie (MIC) waarin de inhiberende activiteit van twee verschillende antibiotica tegen een bacteriële isoleren worden getest over een bereik van concentratie combinaties4,5. Als de twee drugs groter is dan de additieve activiteit uitoefenen wanneer samen gebruikt, wordt de combinatie synergetische6beschouwd. Echter omvat een dambord matrix handmatig instellen een reeks van berekeningen en verdunnen en pipetting stappen die moeizaam en kwetsbaar voor menselijke fouten zijn. Deze beperkingen hebben het effect van het beperken van het gebruik van de synergie voornamelijk aan de retrospectieve beoordeling van kleine aantallen antibiotica combinaties en bacteriële isolaten van het testen, en resultaten niet altijd hebben consistente tussen studies7, 8,9,10,11. Bovendien, de complexiteit van het testen van synergie heeft bijgedragen tot de onbeschikbaarheid in het laboratorium klinische microbiologie en de virtuele afwezigheid van in vitro synergie testgegevens van klinische studies van combinatie therapie12, 13.
Teneinde de doeltreffendheid en de doorvoer van het dambord matrix methode, maakten we gebruik van een geautomatiseerd testen MIC-techniek met de eerder ontwikkelde in ons laboratorium die gebruikmaakt van inkjet printing technologie om precies en consequent afzien kleine volumes van antibiotica stockoplossing in putten in een microtiterplaat plaat14. Het platform ondervangt de behoefte aan complexe berekeningen en meerdere pipetting stappen. De bijbehorende software berekent en uitdeelt passende hoeveelheid antibiotica een tweedimensionale dambord-array maken als de gebruiker eenvoudig de gewenste concentratiebereik ingangen en concentratie van de stockoplossing van de antibiotica. We in eerste instantie getest deze methode tegen een verzameling van CRE isolaten15 en vervolgens hebben gericht op testen colistine-bevattende combinaties voor activiteit tegen colistine-resistente isolaten16. Colistine is een drug van laatste redmiddel doorgaans gereserveerd voor gebruik bij de behandeling van MDR gramnegatieve ziekteverwekkers17,18, en colistine weerstand maakt al MDR bacteriën bijna pan-resistente19, waardoor ze ideaal zijn kandidaten voor de ontwikkeling van nieuwe therapeutische strategieën door middel van de drugs waarnaar ze ongevoelig individueel zijn. We vonden dat de combinatie van colistine en de eiwit synthese remmer antibiotica minocycline had een zeer hoge mate van synergie, zelfs tegen stammen die resistent aan elk van deze drugs individueel, vermoedelijk waren omdat colistine een subinhibitory oefent permeabilizing effect op zelfs colistine-resistente bacteriën. Wij hebben besloten deze combinatie te gebruiken als een voorbeeld in dit document. Van de nota, kan synergie testen ook worden gebruikt om te evalueren voor verbeterde doeltreffendheid van twee geneesmiddelen die beide effectief individueel.
De geautomatiseerde dambord matrix methode vergemakkelijkt de snelle, hoge-doorvoer synergie testen. Het dambord matrix methode hoeft echter beperkingen. Als een gemodificeerde MIC assay, het levert gegevens alleen op de remming van de groei van bacteriën en niet op doden en biedt geen gegevens over antibiotica effecten na verloop van tijd. Daarentegen, handmatige prestaties van tijd-kill synergie tests is meer arbeidsintensief maar geeft informatie over zowel inhibitie en doden over een 24-uurs tijd cursus20,21. We gebruikten tijd-kill analyse op een kleiner aantal isolaten onze dambord matrix resultaten te bevestigen en om te bepalen of de synergetische combinaties die we geïdentificeerd ook bactericide waren.
Beide methoden dambord array en tijd-kill synergie waardevolle informatie verstrekt over de activiteit van de drug combinaties en zijn vooral handig bij het evalueren van potentiële nieuwe therapeutische opties voor zeer resistente bacteriële pathogenen. De methoden hebben ook inherente beperkingen. De standaard microbroth verdunning MIC-methode heeft een bekende verwachte foutbereik van 1 dubbele verdunning22, die wordt verhoogd wanneer twee geneesmiddelen samen worden getest in een dambord-matrix. De standaard definitie van synergie, die acht dat een synergetische combinatie alleen als de drugs die samen op een vierde hun respectieve MICs6, actief zijn rekening wordt gehouden met dit verwacht variabiliteit, maar dergelijke variabiliteit (die wordt verondersteld te leiden tot uit een combinatie van biologische en technische schommelingen23) onvermijdelijk genereert onzeker over de betrouwbaarheid van de resultaten van de synergie. Het gebrek aan vastgestelde normen van de kwaliteitscontrole voor het testen van synergie is ook een huidige beperking. Misschien is de belangrijkste beperking van alle methoden voor het testen van synergie is het ontbreken van gevestigde correlaties tussen in vitro resultaten en klinische resultaten wanneer combinaties worden gebruikt voor de behandeling van patiënten24. Sneller en eenvoudiger synergie testmethoden, zoals de geautomatiseerde dambord matrix methode hier beschreven, kan het vergemakkelijken van de integratie van in vitro synergie testen binnen de klinische proeven of andere evaluaties van patiëntenoutcomes om beter kenmerkend zijn voor de relatie tussen in vitro en in vivo effecten in de toekomst.
De geautomatiseerde dambord matrix methode die wij hier presenteren biedt een premieaffaire voor high-throughput screening van een aantal combinaties en zorgt voor snelle evaluatie van ongewone, "hoog risico-hoge beloning" combinaties zonder een grote investering van tijd en middelen. De tijd-kill-methode, die we vervolgens aantonen, extra ondersteunende informatie kan verschaffen over de synergetische activiteiten van de combinatie en kan helpen om te karakteriseren zijn bactericide activiteit en antibacteriële kinetiek.

<table><tbody><tr><td>Escherichia coli strain ATCC 25922</td><td>ATCC</td><td>25922</td><td>QC strain</td></tr><tr><td>0.5 mL microcentrifuge tubes</td><td>USA Scientific</td><td>1605-0000</td><td></td></tr><tr><td>1 L 0.22 &micro;m bottle-top filter</td><td>Thermo Scientific Nalgene</td><td>597-4520</td><td></td></tr><tr><td>12 mm x 75 mm borosilicate glass round bottom culture tubes</td><td>Fisherbrand</td><td>14-961-26</td><td></td></tr><tr><td>15 mL conical tubes</td><td>Phenix</td><td>SS-PH15</td><td></td></tr><tr><td>15 x 100 mm or 15 x 150 mm Mueller Hinton agar plates</td><td>Thermo Scientific</td><td>R01620 of R04050</td><td></td></tr><tr><td>25 mm stainless steel closures for 25 x 150 mm glass culture tubes</td><td>Bellco</td><td>2005-02512</td><td></td></tr><tr><td>25 x 150 mm borosilicate glass round bottom culture tubes</td><td>Bellco</td><td>2011-25150</td><td></td></tr><tr><td>348-well sterile clear, flat-bottom, untreated microplates with lids</td><td>Greiner Bio-One</td><td>781186</td><td></td></tr><tr><td>50 mL conical tubes</td><td>Phenix</td><td>SS-PH50</td><td></td></tr><tr><td>50 mL sterile reagent reservoirs</td><td>Corning</td><td>4870</td><td></td></tr><tr><td>96 deep well polypropylene microplate with 2 mL wells</td><td>Fisherbrand</td><td>12-566-612</td><td></td></tr><tr><td>96-well sterile clear, round-bottom, untreated microplates with lids</td><td>Evergreen</td><td>222-8032-01R</td><td></td></tr><tr><td>Cation adjusted Mueller Hinton broth</td><td>BD Diagnostics</td><td>212322</td><td></td></tr><tr><td>Colistin sulfate</td><td>Alfa Aesar</td><td>J60915</td><td></td></tr><tr><td>D300e Control Software</td><td>HP/Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DensiCHEK Plus McFarland reader</td><td>bioM&eacute;rieux</td><td>21250</td><td></td></tr><tr><td>Excel spreadsheet software</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Extra long SHARP 10 &micro;L Precision Barrier Tips</td><td>Denville Scientific</td><td>P1096-FR</td><td></td></tr><tr><td>HP D300 digital dispenser</td><td>HP/Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HP D300 T8+ cassettes</td><td>HP/Tecan</td><td>30097370</td><td></td></tr><tr><td>Minocycline hydrochloride</td><td>Chem-Impex</td><td>14302</td><td></td></tr><tr><td>Picus 12-channel 10-300 &micro;L pipette</td><td>Sartorius</td><td>735461</td><td></td></tr><tr><td>Polysorbate 20</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP-337</td><td>Merknaam: Tween 20</td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>Fisher Chemical</td><td>S271</td><td></td></tr><tr><td>Spectrophotometer</td><td>Tecan</td><td>Infinite M1000 PRO</td><td></td></tr><tr><td>Xplorer 12-channel 50-1200 &micro;L pipette</td><td>Eppendorf</td><td>2231000328</td><td></td></tr></tbody></table>

antimicrobiële synergie testen door de inkjet printer-bijgewoonde geautomatiseerde dambord matrix en de handmatige methode van de tijd-kill

Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method

Aangezien tarieven van multiresistente (MDR) ziekteverwekkers stijgen blijven, overtreft de ontwikkeling van nieuwe antimicrobiële stoffen, zijn nieuwe benaderingen voor de behandeling van MDR bacteriën steeds een noodzaak. Een dergelijke aanpak is combinatietherapie, in welke twee of meer antibiotica samen worden gebruikt voor de behandeling van een infectie tegen welke een of beide van de drugs kunnen ineffectief alleen. Wanneer twee geneesmiddelen, in combinatie, een grotere uitoefenen dan additief effect, worden zij beschouwd als synergetische. In vitro onderzoek van synergetische activiteit is een belangrijke eerste stap bij het beoordelen van de mogelijke werkzaamheid van drug combinaties. Twee belangrijkste synergie van in vitro-testmethoden zijn ontwikkeld: het dambord-array en de studie van de tijd-doden. In deze paper presenteren we een geautomatiseerde dambord matrix methode die gebruik maakt van inkjet printing technologie te verhogen van de efficiëntie en nauwkeurigheid van deze techniek, evenals een standaard handmatige tijd-kill synergie-methode. De geautomatiseerde dambord-array kan dienen als een high-throughput screening assay, terwijl de handmatig tijd-kill studie extra, aanvullende gegevens over synergetische activiteit en moord biedt.
De array dambord is een wijziging van de standaard minimale remmende concentratie (MIC) testen, waarin bacteriën zijn geïncubeerd met antibiotica op verschillende concentratie combinaties en geëvalueerd voor groeiremming na een incubatieperiode van de overnachting. Handmatige uitvoering van de array dambord vereist een bewerkelijke en foutgevoelige reeks berekeningen en verdunningen. In de geautomatiseerde methode hier gepresenteerd, de berekening en de verstrekking van de vereiste antibiotica stockoplossing volumes worden geautomatiseerd met behulp van inkjet printertechnologie. In de tijd-kill synergie assay, zijn bacteriën geïncubeerd met de antibiotica van belang, zowel samen als individueel, en bemonsterd met tussenpozen in de loop van de 24 h voor kwantitatieve cultuur. De resultaten kunnen bepalen of een combinatie synergetische is en of het bactericide, en verstrekken van gegevens over remming en doden van de bacteriën na verloop van tijd.

Figuur 1A presenteert een raster van een experiment van de synergie van dambord-matrix, in welke minocycline in concentraties van 0-32 μg/mL werd gecombineerd met colistine bij concentraties van 0-16 μg/mL en getest tegen E. coli stam FDA-CDC 0494. De waarden vertegenwoordigen spectrofotometrische lezingen op optische dichtheid 600 nm (OD600). Putjes met OD600 waarden onder 0.07 (die correspondeert met geen groei door visuele inspectie) zijn grijs rood, terwijl putjes met OD600 waarden 0,07 (dat overeenstemt met de groei door visuele inspectie) grijs groen. Voor elk medicijn is de minimale remmende concentratie (MIC; vette) de laagste concentratie van het geneesmiddel dat remt de groei van bacteriën. Voor minocycline, dit is 32 μg/mL en voor colistine, is 8 μg/mL. De arcering wordt bewaard in figuur 1B, maar waarden binnen de putjes waarin groei wordt geremd worden vervangen door fractionele remmende concentratie ("fic"ik) indexwaarden. Deze wordt als volgt bepaald: in elk putje, de index van de fractionele remmende concentratie ("fic") van elk medicijn wordt berekend door de concentratie van een antibioticum dat goed door van de drug MIC, en het "fic"ik wordt berekend door optelling van de twee FICs. Putjes met een "fic"ik waarde van 0,5, die wordt beschouwd als de cutoff voor synergie, worden aangegeven met een gebroken-lijnrand en de put met de laagste "fic"ik waarde (0.094) is vet. Omdat het "fic"ik minimumwaarde in de synergetische bereik is, wordt de combinatie synergetische beschouwd.
Figuur 2A en 2B van de figuur weergeven rasters analoog zijn aan die in figuur 1A en figuur 1B, maar in dit geval de combinatie niet aantoont synergie tegen het isolaat getest (K. pneumoniae isolaat BIDMC 4), omdat de minimale "fic"ik waartegen de groei wordt geremd is 1, oftewel > 0,5.
Figuur 3 toont de gemeten optische dichtheid van een dambord synergie raster waarin verschillende overgeslagen wells (Enterobacter cloacae complexe isolaat BIDMC 27) is opgetreden. Overgeslagen putten zijn putten waarin bacteriegroei wordt geremd, ondanks de aanwezigheid van de bacteriële groei in aangrenzende putten met hogere concentraties van antibiotica. Dit verschijnsel, waarvan bekend is dat het optreden in standaard MIC testen alsmede, is waarschijnlijk te wijten aan biologische variabiliteit in bacteriële groei kenmerken van goed tot goed en de gevoeligheid van sommige antibiotica tot kleine verschillen in de bacteriële entmateriaal23 , 31 , 32. als meer dan één goed heeft plaatsgevonden in een dambord-array overgeslagen, we verwijderd van de resultaten en de test herhaald.
Figuur 4 presenteert voorbeelden van tijd-kill synergie resultaten van drie combinaties getest tegen K. pneumoniae isoleren BIDMC 32. Kolonie graven zijn aangegeven in een logaritmische schaal op de y-as en tijd, in uren, op de x-as. Het verschil tussen de startende entmateriaal in de buis met de combinatie van de drug en de concentratie van bacteriën in die buis bij 24 h wordt geïllustreerd door de rode balk en het aantal, terwijl het verschil tussen de concentratie van de bacteriën op 24 h tussen de buis met de combinatie en de buis met de meest actieve enkele agent alleen wordt geïllustreerd door de blauwe balk en het aantal. Figuur 4A toont resultaten uit de combinatie van colistine en minocycline; Deze combinatie was synergetische (verschil tussen de concentraties van bacteriën blootgesteld aan combinatie en actiefste agent alleen ≥2 log10 CFU/mL in 24 h) en bactericide (daling van het starten van entmateriaal tot een concentratie op 24u ≥3 log10 CFU/mL). Figuur 4B toont de resultaten van de combinatie van colistine en clindamycine, een combinatie die was synergetische maar was niet bactericide. Deze combinatie geremd groei van de bacteriën, die noch drug deed alleen, maar heb ze niet doden. Figuur 4C toont de resultaten van de combinatie van colistine en erythromycine, die niet bactericide of synergetische was.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig1.jpg"> Figuur 1: Dambord matrix resultaten demonstrerende synergie (minocycline + colistine getest tegen E. coli FDA-CDC 0494 stam). (A) spectrofotometrische uitlezing en groei interpretatie van een dambord-array. Waarden in de cellen zijn optische dichtheid lezingen op 600 nm (OD600). Cellen met OD600 waarden onder 0.07 (overeenkomend met geen groei door visuele inspectie) zijn grijs rood, terwijl cellen met OD600 waarden 0.07 (overeenkomend met groei door visuele inspectie) grijs groen. (B) fractionele remmende concentratie index ("fic"ik) berekening. Arcering die aangeeft groei of geen groei is bewaard gebleven. Waarden voor colistine en minocycline langs de x- en y-assen, respectievelijk, nu vertegenwoordigen de fractionele remmende concentratie ("fic"), of de verhouding van de concentratie van de drug in die kolom of rij naar de (minimale remmende concentratie MIC) van dat medicijn alleen. De waarde in elke cel is het "fic"ik, of de som van de FICs van de twee drugs in dat goed. Het grote gebroken lijn-begrensd vak omsluit putjes met een "fic"ik van 0,5. Het grenst aan de dik cel geeft de put met de laagste "fic"ik in die groei wordt geremd, of het minimum "fic"ik. Omdat het minimum "fic"ik 0,5 is, wordt de combinatie synergetische beschouwd. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig2.jpg"> Figuur 2: De resultaten van de matrix van het dambord van een combinatie die niet aantoont synergie (minocycline + colistine getest tegen K. pneumoniae isoleren BIDMC 4). (A) optische dichtheid waarden op 600 nm en groei interpretatie van dambord matrix resultaten als beschreven voor het figuur 1A. (B) fractionele remmende concentratie index ("fic"ik) berekening zoals beschreven voor figuur 1A. Omdat het minimum "fic"ik > 0,5, de combinatie wordt niet beschouwd als synergetische. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig3.jpg"> Figuur 3: Dambord matrix resultaten die uninterpretable moeten zijn overgeslagen wells (minocycline + colistine getest tegen Enterobacter cloacae complexe isoleren BIDMC 27). Optische dichtheid waarden op 600 nm en groei interpretatie van dambord matrix resultaten als beschreven voor het figuur 1A. Verschillende overgeslagen wells, waarin bacteriegroei wordt geremd, ondanks de aanwezigheid van groei in aangrenzende putten met hogere concentraties van antibiotica, worden gedemonstreerd. Resultaten zijn niet interpreteerbaar en experimenteren moet worden herhaald. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig4.jpg"> Figuur 4: De resultaten van de synergie van het tijd-doden van drie combinaties getest tegen K. pneumoniae isoleren BIDMC 32. Kolonie graven zijn aangegeven in een logaritmische schaal op de y-as en tijd, in uren, op de x-as. Het verschil tussen de concentratie van bacteriën in de combinatie op 24 h en de startende entmateriaal in de buis wordt geïllustreerd door de rode balk en het aantal. Wanneer de daling van het starten van entmateriaal tot een concentratie bij 24 h ≥3 log10 CFU/mL is, wordt de combinatie bactericide. Het verschil tussen de concentratie van de bacteriën op 24 h tussen de buis met de combinatie en de buis met de meest actieve enkele agent alleen wordt geïllustreerd door de blauwe balk en het aantal; Als er ≥2 log10 CFU/mL vermindering is, als de combinatie synergetische. (A) colistine (CST) + minocycline (MIN), een combinatie die zowel synergetische en bactericide. (B) colistine + Clindamycine (CLI), een combinatie die is synergetische maar niet bactericide. (C) colistine + erytromycine (ERY), een combinatie die is niet synergetische noch bactericide. Deze resultaten werden aanvankelijk gepubliceerd als onderdeel van een studie van de synergetische activiteiten van colistine-bevattende combinaties tegen colistine-resistente Enterobacteriaceae, waarin we laten dat colistine zien was synergetische met een aantal antibiotica die actief individueel alleen zijn (bijvoorbeeld clindamycine) of hoofdzakelijk (bv. erytromycine) tegen gram-positieve bacteriën16. (Merk op dat erytromycine synergetische door dambord array tegen de spanning komt te staan was, maar niet door tijd-doden, dus het is geselecteerd als een voorbeeld van een niet-synergetische combinatie.) Wij die hypothetische colistine, die bekend staat om op te treden door de permeabilization van de gram-negatieve buitenmembraan, oefent een sub-inhibitory permeabilizing effect op colistine-resistente gram-negatieve bacteriën, waardoor de invoer van drugs zoals clindamycine die normaal gesproken binnengaan niet de gram-negatieve cel. Deelvenster (A) van deze afbeelding is gewijzigd van Brennan-Krohn, Pironti en Kirby 201816, copyright © American Society for Microbiology, antimicrobiële stoffen en chemotherapie, 62(10), 2018, pii: e00873-18, doi: 10.1128/AAC.00873-18. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>

Antimicrobiële synergie testen wordt gebruikt ter beoordeling van het effect van twee of meer antibiotica in combinatie gebruikt en worden doorgaans uitgevoerd door een van twee methoden: de dambord array of de bepaling van de tijd-doden. Hier presenteren we een geautomatiseerd, inkjet printer-bijgewoonde dambord matrix synergie techniek en een studie van de klassieke tijd-kill synergie.

Antimicrobiële synergie testen door de Inkjet Printer-bijgewoonde geautomatiseerde dambord matrix en de handmatige methode van de tijd-kill

As rates of multidrug-resistant (MDR) pathogens continue to rise, outpacing the development of new antimicrobials, novel approaches to treatment of MDR ...

Handmatige checkerboard array synergie testen is een arbeidsintensieve en foutgevoelige methode. Onze geautomatiseerde inkjetprintergebaseerde dambordmethode verbetert daarentegen de snelheid, nauwkeurigheid en doorvoer aanzienlijk. De geautomatiseerde dambordmethode maakt het mogelijk om grote aantallen geneesmiddelen te screenen op synergetische combinaties, terwijl de time-kill-methode de activiteit van deze combinaties kan bevestigen en verder kan verkennen.Nieuwe antibiotica ontdekking is niet gelijke tred houden met de verspreiding van resistentie, maar het onderzoek van synergetische combinaties biedt een mogelijkheid voor het bergen van bestaande geneesmiddelen om resistente bacteriën te behandelen. Hoewel we deze techniek met antibacteriële stoffen demonstreren, kan het ook worden gebruikt met andere klassen van antimicrobiële stoffen of zelfs voor verschillende soorten combinatiegeneevingsmiddel of samengestelde tests. In deze video demonstreren we een geautomatiseerde checkerboard array methode en een handmatige time-kill methode.We raden aan om eerst checkerboard array studies uit te voeren om veelbelovende combinaties te identificeren en deze vervolgens verder te onderzoeken met time-kill studies. Om te beginnen, maken antimicrobiële voorraad oplossingen van colistine en minocycline, en voer vervolgens kwaliteitscontrole op de voorraad oplossingen zoals beschreven in de begeleidende tekst protocol. Voeg vervolgens ongeveer een milliliter natriumchloride van 0,9% toe, zoute, tot 12-millimeter-bij-75-millimeter ronde bodemglas kweekbuizen.Selecteer een of twee kolonies uit een nachtplaat van bacteriën, en plaats ze in de cultuur buizen. Vortex de buizen voorzichtig om de bacteriën op te schorten in de oplossing. Controleer de concentratie van bacteriën met behulp van een McFarland lezer.Pas de concentratie aan door meer zout of meer bacteriën toe te voegen om een 0,5 McFarland troebelheidsmeting te bereiken. Verdun de bacteriën vervolgens één tot 300 door 100 microliter van de suspensie toe te voegen tot 30 milliliter kationaal-aangepast Mueller-Hinton-bouillon in een conische buis van 50 milliliter om een uiteindelijke celdichtheid van vijf keer 10 tot de vijfde kolonievormende eenheden per milliliter te bereiken. Bereid nu de antimicrobiële stoffen voor op afdrukken door mee te volgen in het bijbehorende tekstprotocol.Sla het protocol op en klik linksboven op de knop Uitvoeren, gevolgd door de knop Start. Laad een 384-put plaat in de plaathouder en druk geladen onder de Load Plate 1 Synergy prompt. Plaats vervolgens een T8+-cassette in de cassettesleuf en druk onder de prompt Load a T8+Cassette.Voeg desgevraagd een oplossing voor de antibioticavoorraad toe aan de aangegeven reservoirs op de cassette. Nadat elke oplossing is toegevoegd, drukt u op de knop Gevuld. Zodra de D300 Dispenser heeft toegevoegd antibioticum voorraad in de juiste volumes aan elke put en de Run Completed vak verschijnt, klik op Sluiten, verwijder de plaat, en schakel de D300.Giet vervolgens de eerder voorbereide bacteriële suspensie in een steriel reagensreservoir. Gebruik een multichannel pipet om 50 microliters van de suspensie toe te voegen aan alle putten in de checkerboard array. Voeg vervolgens 50 microliter kationen-aangepaste Mueller-Hinton bouillon zonder bacteriën toe aan een lege put.Dit zal de negatieve controle goed om steriliteit van de media te bevestigen. Incubeer in een 35-graden Celsius omgevingslucht incubator voor 16 tot 20 uur. Om de test te analyseren, volgt u het bijbehorende tekstprotocol.Voor de time-kill synergie test, opnieuw voor te bereiden op de antimicrobiële voorraad oplossingen zoals beschreven in het tekstprotocol. Maak vervolgens een 0.5 McFarland suspensie van het testorganisme in steriele zoutoplossing. Voeg 100 microliter van de 0,5 McFarland-suspensie toe aan vijf milliliter CAMHB in een glazen ronde bodemcultuurbuis van 25 bij 150 millimeter met roestvrijstalen sluiting en vortex voorzichtig te mengen.Met behulp van een steriele inentingslus, isolatie streep een druppel van de verdunde suspensie op een bloed agar plaat, en de plaat inbroed op 35 graden Celsius in de omgevingslucht om de entmateriaal zuiverheid te bevestigen. Vervang de sluiting op de buis en broed deze in een reageerbuisrek op een shaker bij 35 graden Celsius in de omgevingslucht gedurende ten minste 3 uur, totdat de groei van de logaritmische fase is bereikt. Terwijl de oorspronkelijke cultuur is uitbroeden, voeg 10 milliliter van kation-aangepaste Mueller-Hinton bouillon aan vijf autoclaved glazen cultuur buizen.Voor een time-kill synergie studie, ten minste een drug moet worden op een concentratie die niet van invloed op de groeicurve individueel. Dit kan worden bepaald door de effecten van individuele medicijnconcentraties voorafgaand aan de synergiestudie te evalueren. Voeg aan de eerste buis 10 microliter van één milligram-per-milliliter colistinevoorraad toe om een definitieve colistineconcentratie van één microgram per milliliter te verkrijgen, omdat dit een concentratie is die niet effectief is tegen de stam die in dit voorbeeld wordt gebruikt.Voeg voor de tweede buis 10 microliter van één milligram-per-milliliter minocyclinevoorraad toe om een uiteindelijke concentratie van één microgram per milliliter te verkrijgen. Deze concentratie is ook niet effectief tegen de stam die in dit voorbeeld wordt gebruikt. Voeg aan de derde buis 10 microliter van één milligram-per-milliliter minocyclinevoorraad en 10 microliter van één milligram-per-milliliter colistinevoorraad toe.Dit is dezelfde hoeveelheid colistine en minocycline gebruikt in buizen een en twee. Voeg in de vierde en vijfde buis geen antibiotica toe. Dit zal respectievelijk de groeicontrole en de negatieve controlebuizen zijn.Bereid vervolgens 96 diep-goed polypropyleen platen met twee milliliter putten voor seriële verdunningen door het toevoegen van 900 microliters van steriele zoutlijn aan rijen B door H van kolommen een tot vier met een multichannel pipet. Wanneer de cultuur zich in de logaritmische groeifase bevindt, verwijder dan de kweekbuis uit de shaker en draaikolk het voorzichtig. Breng een milliliter van de ophanging naar een 12-bij-75-millimeter glazen kweekbuis, en controleer de dichtheid met een McFarland lezer.Als de dichtheid minder dan 1.0 McFarland is, breng de buis terug naar de shaker en incubaal langer. Als het groter is dan 1.0 McFarland, voeg kation-aangepaste Mueller-Hinton bouillon aan de buis, vortex voorzichtig, en opnieuw monster totdat de schorsing is op 1.0 McFarland. Het is belangrijk dat de cultuur zich in de logaritmische groeifase bevindt bij de voorbereiding van het startenoculum.U een groeicurve construeren om te bepalen wanneer een organisme deze fase bereikt. Voeg vervolgens 100 microliters van de 1.0 McFarland-ophanging toe aan buizen één tot en met vier en draai ze voorzichtig. Onmiddellijk na het mengen en op een, twee, vier, zes, en 24 uur, verwijder een 150-microliter aliquot uit elke cultuurbuis door het kantelen van de buis, zodat alleen de steriele pipet tip komt in de buis en niet de niet-steriele pipettor schacht tijdens aliquot terugtrekking.Voeg aliquots, respectievelijk, aan opeenvolgende putten in de eerste rij van de eerder voorbereide 96 deep-well plaat. Breng buizen terug naar een reageerbuisrek op een shaker in een 35-graden Celsius omgevingslucht incubator onmiddellijk na het verwijderen van aliquots op elk moment punt. Verwijder met behulp van een multichannel pipet 100 microliters uit rij A van de plaat en voeg deze toe aan rij B, met 900 microliter zout, waardoor een één-op-10 verdunning ontstaat.Pipette de oplossing op en neer vier tot vijf keer te mengen, en vervolgens gooi de tips. Ten eerste, label Mueller-Hinton agar platen met de antibiotica voorwaarden en verdunning te verguld. Dan, plaat de verdunde monsters voor kolonie telt met behulp van de druppelplaat methode, met behulp van een multichannel pipet met extra lange tips.Verwijder 10 microliter uit elke put in kolom een, en zorgvuldig afzien in een rij op de juiste gelabelde plaat. Ga door totdat alle rijen op borden zijn uitgedeeld. Bovendien, op het 24-uurs tijdpunt, plaats een 10-microliter druppel die rechtstreeks uit de negatieve controlebuis op de voor deze plek is geplaatst om te testen op steriliteit.Dan, omkeren alle platen, en incubeer ze 's nachts op 35 graden Celsius in de omgevingslucht. Tel vervolgens het aantal kolonies op elk gebied en bereken de celdichtheid. Mark kolonies met een fine-tip permanente marker op de achterzijde van de plaat om te voorkomen dat dubbel tellen of ontbrekende kolonies.Voor elke verdunningsreeks, identificeren druppels met drie tot 30 kolonies. Tel de kolonies in deze druppels, en neem de telling samen met de verdunningsfactor. Hier is een raster van een dambord array synergie experiment waarin minocycline in concentraties van nul tot 32 microgram per milliliter werd gecombineerd met colistine bij concentraties van nul tot 16 microgram per milliliter en getest tegen een stam van E.coli.Putten met OD600-waarden onder 07 vertegenwoordigen geen groei en zijn rood in de schaduw, terwijl putten met OD600-waarden boven of gelijk aan 07 groei vertegenwoordigen en groen in de schaduw staan. Voor elk medicijn is de minimale remmende concentratie de laagste concentratie van geneesmiddelen die de bacteriële groei remt. Voor minocycline is dit 32 microgram per milliliter, en voor colistine is het acht microgram per milliliter.De arcering blijft hier behouden, maar waarden binnen de putten waarin de groei wordt geremd worden vervangen door fractionele remmende concentratie, of FIC, indexwaarden. In elke put wordt de FIC-index van elk medicijn berekend door de concentratie antibiotica in die put te delen door de minimale remmende concentratie van het medicijn. Putten met een FIC-index van minder dan of gelijk aan 0,5, die wordt beschouwd als de cutoff voor synergie, worden aangegeven met een gebroken lijn grens, en de put met de laagste FIC-index wordt vett.Omdat de minimale FIC-waarde zich in het synergetische bereik bevindt, wordt de combinatie als synergetisch beschouwd. Een voorbeeld van een geval dat geen synergie aantoont, wordt hier getoond, aangezien de minimale FIC-index waarbij de groei wordt geremd, er een is, die groter is dan 0,5. Ten slotte, in dit voorbeeld, verschillende overgeslagen putten opgetreden, die bacteriële groei die wordt geremd vertegenwoordigt, ondanks de aanwezigheid van bacteriële groei in aangrenzende putten met hogere concentraties van antibiotica.Als er meer dan één goed is overgeslagen in een checkerboardarray, moeten de resultaten worden verwijderd en wordt de test herhaald. Een voorbeeld van een grafiek die resultaten van een time-kill synergie test toont, wordt hier gepresenteerd. Zie het bijbehorende tekstprotocol voor meer informatie over de interpretatie van de synergietest van time-kill.Verdere informatie over de activiteit van synergetische combinaties kan worden verkregen door evaluaties van farmacokinetiek en farmacodynamica en door middel van in vivo studies met diermodellen. Volg altijd de juiste veiligheidsprocedures, inclusief het gebruik van persoonlijke beschermingsmiddelen, bij het werken met bacteriën. Als u aerosolen genereert of risicovolle ziekteverwekkers gebruikt, voert u al het werk uit in een bioveiligheidskast.

antimicrobial-synergy-testing-inkjet-printer-assisted-automated

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

This video demonstrates an assay for screening antimicrobial compounds that efficiently eliminate biofilms using a peg-plate. The methodology monitors the biofilm's metabolic state after treatment with antimicrobial compounds, facilitating the determination of the minimum biofilm eradication concentration.

A Peg Plate Biofilm Assay for Screening Antibacterial Agents

Er werd een doorvoer, real-time test ontwikkeld om gelijktijdig (1) eukaryotische cel-penetrante antibiotica te identificeren die zich richten op een intracellulair bacterieel pathogeen, en (2) de cytotoxiciteit van eukaryotische cellen te beoordelen. Een variatie op dezelfde technologie werd vervolgens gecombineerd met digitale doseertechnologie om gemakkelijke, hoge resolutie, dosis-respons en twee- en driedimensionale synergiestudies mogelijk te maken.

High Throughput, real-time, Dual-uitlezing Het testen van intracellulaire antimicrobiële activiteit en eukaryote cel cytotoxiciteit

Synergetische drug combinaties zijn moeilijk en tijdrovend te identificeren empirisch. Hier beschrijven we een methode voor het vaststellen en valideren van synergetische kleine moleculen.

High-throughput identificatie van synergetische Drug combinaties door de overlapping2 methode

Hier presenteren we een protocol voor het meten van de Shigellacidal activiteit van antilichamen in het serum. Serum is vermengd met bacteriën en exogene aanvulling, geïncubeerd, en het reactiemengsel is verguld op agar platen. Levensvatbare bacteriën vormen kolonies die zijn geteld, met behulp van een geautomatiseerde kolonie enumerator, en gebruikt om te bepalen van de bactericide titer.

Een High-throughput Shigella-specifieke bactericide Assay

Dit protocol beschrijft hoe alle mogelijke combinaties kunnen worden bestudeerd die kunnen worden verkregen tussen vier geneesmiddelen in één experiment. Deze methode is gebaseerd op de standaard 96-well plate micro verdunningstest en de berekening van fractionele remmende concentraties (FIC's) om de resultaten te evalueren.

Quadruple-Checkerboard: een wijziging van het driedimensionale dambord voor het bestuderen van medicijncombinaties

Hier presenteren we een protocol om de antibacteriële werkzaamheid van een antibioticum-eluterend polymeer te evalueren om profylactische klinische toepassing te simuleren met behulp van een commercieel beschikbare real-time ATP-gebaseerde luminescerende microbiële levensvatbaarheidstest. Deze methode maakt het mogelijk om de longitudinale activiteit van geneesmiddel-eluterende materialen te monitoren en kan op grote schaal worden aangepast om antimicrobiële toedieningsplatforms voor...

Een nieuwe methode om de longitudinale antibacteriële activiteit van geneesmiddel-eluterende materialen te bepalen

Hier introduceren we het principe, de structuur en de instructie van het intelligente high-throughput antimicrobiële gevoeligheidstest-/faagscreeningsysteem. De toepassing ervan wordt geïllustreerd aan de hand van Salmonella geïsoleerd uit pluimvee in Shandong, China, als voorbeeld. De Lar-index wordt berekend en de betekenis ervan bij het evalueren van antimicrobiële resistentie wordt uitgebreid besproken.

Toepassing van het intelligente high-throughput antimicrobiële gevoeligheidstest-/faagscreeningsysteem en Lar Index van antimicrobiële resistentie

Dit protocol biedt een systematisch kader om te beoordelen hoe fytochemicaliën de bactericide effecten van traditionele biociden kunnen versterken met behulp van bactericide activiteitsmodellering en combinatorische interactie-assays, die gericht zijn op het identificeren van synergetische mengsels die de microbiële controle verbeteren en het totale biocidegebruik verminderen.

In vitro Evaluatie van de versterkende effecten van plantaardige moleculen op conventionele biociden

Dit protocol beschrijft een methode voor het produceren en evalueren van de antimicrobiële activiteit en cytotoxiciteit van het kationische peptide Mel4 en het peptide-nabootser RK758. Door chemische synthese, recombinante expressie en gestandaardiseerde functionele assays te integreren, biedt het een gestroomlijnde workflow voor de productie en het testen van peptiden en kleinmolecuul-imitaties.

Productie en testen van antimicrobiële peptiden en hun nabootsers

Antimicrobiële gevoeligheid testen van Mycobacterium tuberculosis is een uitdaging, maar essentieel voor de patiëntenzorg. Dit microtiterplaat formaat biedt het testen van 12 antimycobacteriële drugs en zorgt voor minimale remmende concentratie (MIC) waarden, die zal helpen bij een passende behandeling.

Antimicrobiële gevoeligheid testen van Mycobacterium tuberculosis-complex voor de eerste en tweede lijn drugs door de bouillon verdund in een microtiterplaat Format

Leer een geautomatiseerde inkjetprinter-gebaseerde dambordmatrixmethode voor antimicrobiële synergie-testen, vergeleken met handmatige time-kill assays. Deze techniek versnelt screening van antibiotica-combinaties tegen resistente bacteriën.

Antimicrobiële synergie testen door de Inkjet Printer-bijgewoonde geautomatiseerde dambord matrix en de handmatige methode van de tijd-kill (Video) | JoVE Journal

Antimicrobiële synergie testen door de Inkjet Printer-bijgewoonde geautomatiseerde dambord matrix en de handmatige methode van de tijd-kill

Meer video's verkennen