Name: De wasmot Waxworm infectie Model voor verspreid Candidiasis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: Leer het Galleria mellonella-infectiemodel voor verspreide candidiasis. Deze methode maakt onderzoek naar Candida-virulentiefactoren mogelijk zonder ethische bezwaren van gewervelde dieren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs wil erkennen de hulp van Pamela Washington en Leah Anderson bij het verkrijgen van de wasmot voor gebruik in deze studie.

Alle methoden zijn afhankelijk van gebruik van ongewervelde gastheren en vereisen geen goedkeuring van institutionele Animal Care en gebruiken Comité (IACUC).
1. wasmot Waxworm larven
<ol><li>De larven van de volgorde van groothandels en leveranciers die geen hormonen, antibiotica of andere behandelingen om de larven invoeren en die kunnen verzenden en leveren van levende specimens.<ol>
<li>Zorg ervoor dat alle larven kopen van dezelfde leverancier in de loop van experimenten. Wees voorzichtig bij het bestellen van larven tijdens de zomermaanden, als de temperatuur meer dan 30 ° C dalen larven levensvatbaarheid.</li>
		<li>Temperaturen over de verwachte verzending route controleren en dienovereenkomstig plannen van verzending en levering of kiezen voor verzending per expresse naar het minimaliseren van hun blootstelling aan omgevingsfactoren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Wanneer de larven komen, Controleer elke container om ervoor te zorgen dat levensvatbare, gezonde larven aanwezig zijn. Gezonde larven zal volledig worden ondergedompeld onder het beddengoed, verplaatsen, en beschikken over een lichte verkleuring van geel/tan met enkele larven met zwarte vlekken of verkleuringen langs het lichaam.</li>
	<li>Bewaar larven in hun container in een geventileerde ruimte bij kamertemperatuur (25 ° C). Afhankelijk van de oorspronkelijke toestand van de larven, kunnen ze worden gebruikt voor maximaal twee weken.</li>
</ol>2. cultuur wasmot infectie voorbereiding
Opmerking: Juiste lab kledij moet gedragen worden tijdens dit gedeelte van het protocol met inbegrip van handschoenen, laboratoriumjas en veiligheidsbril.
<ol><li>Maken van Gist-pepton dextrose (YPD) vloeistof en agar platen. 1 x fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en 70% ethanol oplossingen voor te bereiden.</li>
	<li>Groeien C. albicans stammen 's nachts worden geïnjecteerd in 3 mL verse YPD in standaard cultuur buizen op een roterende trommel op middellange snelheid en 30 ° C.</li>
	<li>Spin cellen naar beneden bij 2.500 x g gedurende 5 minuten in een tafelblad centrifuge. Giet af supernatant, voorzichtig niet te verstoren, de cel-pellet.<ol>
<li>Resuspendeer de cellen volledig in 5 mL 1 x PBS door herhaalde pipetteren of vortexing. Herhaal het centrifugeren en resuspensie van cellen in PBS tweemaal meer om verwijdering van alle voedingsbodems.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Na een laatste wassen, resuspendeer de cellen in 1 mL PBS en overbrengen naar een microcentrifuge buis.</li>
	<li>Een set seriële verdunningen in PBS voor het genereren van een 1:100, 1:1, 000, voeren en 1:100,000 verdunningsreeks. Opmerking: Alternatieve verdunningen mogelijk moet bereiken van de gewenste cellen.<ol>
<li>Met behulp van een hemocytometer, de cellen uit de 1:100 of de 1:1,000-verdunning tellen. In de meeste gevallen biedt de verdunning 1:1,000 dat de gewenste cel telt voor C. albicans culturen.</li>
		<li>Bereken de totale concentratie van cellen binnen de oorspronkelijke cultuur met behulp van het raster math van de hemocytometer, aiming voor tussen 30-300 cellen worden geteld in de centrale 5 x 5 raster. Een geautomatiseerde cel teller kan worden gebruikt als een alternatief; gebruik van optische dichtheid bepalen cellen wordt afgeraden als cel morfologie (grootte, vorm, enz.) kan echter aanzienlijk beïnvloeden de juistheid ervan.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Met behulp van de graven van de gemeten cel, maak een nieuwe verdunning van 2.5x107 cellen/mL in 1 x PBS in een microcentrifuge buis. Deze verdunning zal dienen als de basis voor elke inoculatie van G. mellonella met C. albicans. Elke injectie vergt 10 µL van deze entmateriaal voor een infectieuze dosis van 250.000 C. albicans cellen.</li>
	<li>Bevestig nauwkeurigheid van de infectieuze dosis door plating de juiste omvang van de verdunning van de 1:100,000 voor 100 kolonie-vormende eenheden (CFUs) op YPD agar voor elke cultuur om te worden gebruikt in de infectie.</li>
	<li>Cel graaf platen uit stap 2.7 Incubeer gedurende 48 uur (h) bij 30 ° C en het aantal kolonies per plaat geteld. Tussen 80 en 120 kolonies vormt een acceptabel bereik liggen voor nauwkeurigheid in het entmateriaal.</li>
</ol>3. infectie van de larven van de wasmot met Candida culturen
Opmerking: Juiste lab kledij moet gedragen worden tijdens dit gedeelte van het protocol met inbegrip van handschoenen, laboratoriumjas en veiligheidsbril.
<ol><li>Voeg 1 mL 100% ethanol en 1 mL 1 x PBS twee aparte microcentrifuge buizen. De ethanol en PBS worden gebruikt voor het wassen van de injectie naald tussen infecties.</li>
	<li>Een kleine hoeveelheid waxworm beddengoed in een lege, 100 x 15 mm steriele petrischaal, die zal het huis van de larven na inoculatie voor elke onafhankelijke stam verspreid. Toevoeging van het beddengoed beperkt hechting van dode G. mellonella larven naar de oppervlakte van de petrischaal.</li>
	<li>Steriliseren een 26 G, 10 µL spuit door innemen en expunging 10 µL van 70% ethanol driemaal gevolgd door drie wast met 10 µL van 1 x PBS. Vortex de inoculatie verdunning van C. albicans en nemen 10 µL van cultuur. Ervoor zorgen dat er geen luchtbellen binnen de spuit als injectie van lucht dood bevordert en downstream analyse zal bemoeilijken.</li>
	<li>Open een container bezit de G. mellonella larven en zorgvuldig omdraaien beddengoed met een vinger te ontdekken van de larven. Selecteer de larven die in goede gezondheid zoals geïdentificeerd door actieve beweging, een lichte kleur geel/tan, en een gebrek aan zwarte pigment op het lichaam van de larven. Deze larven moeten zijn van gelijkaardige grootte over de volledige experimentele ingesteld.</li>
	<li>Halen van een enkele larven en houd van het zachtjes tussen de index/middelvinger en de duim vergelijkbaar met het houden van een potlood. De larven op haar rug rollen zodat de benen zijn naar boven. Houd de volledige lengte van het lichaam tussen de vingers en duim zodat de larven is te krullen of te trekken uit de buurt van de injectie. Opmerking: Indien gewenst, steriliseren de plaats van injectie met een wattenstaafje gedrenkt in 100% ethanol.</li>
	<li>Draaien van de spuit zodat de naald van schuine kant omhoog gezichten en langzaam Breng de tip van de naald met inbegrip van de lengte van de schuine kant in het lichaam op de kruising met de achterste linkerbeen. Ervoor zorgen dat de naald het lichaam doordringt en doet niet alleen het lichaam van de larven naar binnen duwen. Gebruik geen kracht in het lichaam doordringen, zoals de naald volledig via de larven snel doorboren kan. Voorzichtig opheffen met de naald zal passende penetratie bevestigen. Injecteer de volledige 10 µL Candida entmateriaal en uitpakken van de naald.</li>
	<li>Herhaal stap 3.3-3.5 voor elke larven. Om te voorkomen dat cel afwikkeling, vortex de Candida culturen voor inoculatie na iedere derde injectie. Als een besturingselement, een set van G. mellonella te injecteren met 10 µL van 1 X PBS.</li>
	<li>Co huis 10 larven uit de dezelfde Candida cultuur in elke 100 x 15 mm petrischaal na inoculatie geïnjecteerd. Incubeer larven bij 37 ° C gedurende acht dagen, larven elke 24 uur controleren om te controleren van de dood.<ol>
<li>Beoordelen van sterfte in eerste instantie door de donkere pigmentatie, de vorming van zwarte vlekken of organen, en een gebrek aan beweging. Om te bevestigen sterfte, gebruik pincet te zachtjes rollen stervende larven op hun rug en licht het porren van de larven de onderkant met de pincet. Niet-ontvankelijkheid zoals waargenomen door een gebrek aan zichtbare lichaam of been beweging is scoorde als dood en de larven zijn verwijderd uit de petrischaal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Record larven sterfte in de tijdsverloop. Larven die beginnen te verpoppen in vlinders en kunnen worden opgenomen in de analyse, maar moeten worden verwijderd als ze beginnen te molt. Larven verpoppen kunnen uit eindpunt analyse worden gecensureerd, zoals de virulentie verschillen tussen larven en Verpopping onduidelijk zijn.</li>
	<li>Statistische significantie, gebruik van Mantel-Cox statistische test te beoordelen.</li>
</ol>

<ol><li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+%28NIAID%29+Mycoses+Study+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li>
<li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients%3A+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li>
<li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+invasive+candidiasis%3A+a+persistent+public+health+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li>
<li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+species%3A+current+epidemiology%2C+pathogenicity%2C+biofilm+formation%2C+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, Pt 1 10-24 (2013).</li>
<li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Fungi+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li>
<li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li>
<li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+%28Sit1p%2FArn1p%29+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li>
<li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade%5BTitle%5D)+AND+%22Eukaryotic+Cell%22%5BJournal%5D)">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li>
<li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li>
<li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans%3A+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models & Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li>
<li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367(2015).</li>
<li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964(2013).</li>
<li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li>
<li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li>
<li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Research%22%5BJournal%5D)">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li>
<li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), 1007326 (2018).</li>
<li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li>
<li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Mycol%22%5BJournal%5D)">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li>
<li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunology+and+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li>
<li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li>
<li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Fungal+Biology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li>
<li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li>
<li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans%3A+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li>
<li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Candida+albicans%2C+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li>
<li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li>
<li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li>
<li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Eukaryotic+Cell%22%5BJournal%5D)">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li>
<li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length%2C+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276(2013).</li>
<li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li>
<li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes%3A+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li>
<li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+%28Greater+Wax+Moth%29%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Announcements%22%5BJournal%5D)">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li>
<li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lightning+up+the+worm%3A+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li>
<li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multidrug-resistant+Candida+auris%3A+%27new+kid+on+the+block%27+in+hospital-associated+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hospital+Infection%22%5BJournal%5D)">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li>
<li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het waxworm-model van G. mellonella staat als een effectief instrument voor de snelle en reproduceerbare analyse van C. albicans virulentie. Dit gedetailleerde protocol is gebaseerd op consistente levering van een gedefinieerde infectieuze dosis aan dezelfde site over een batch van larven. Infectieuze dosis heeft een diepgaande invloed op G. mellonella mortaliteit, terwijl gebruik van larven tussen hun eerste aankomst en tien dagen na ontvangst soortgelijke resultaten opgeleverd. Verlies van de...

Candida -soorten zijn gemeenschappelijke menselijke commensals die kunnen ontpopt zich als een opportunistische pathogenen in ernstig immuungecompromitteerde en dysbiotic patiënten. Hoewel veel Candida -soorten, leiden ziekte tot kan, is C. albicans de meest voorkomende oorzaak van gedissemineerde candidiasis1,2. Systemische ziekten voortvloeit uit C. albicans toegang tot de bloedbaan via beide rechtstreekse penetratie van eerder restrictief host belemmeringen of introductie op chirurgische sites en andere inbreuken op het lichaam3. Candida -soorten maken gebruik van een aantal pathogene processen veroorzaken systemische ziekten binnen de host met inbegrip van filamentation, vorming van biofilms, immuun cel belastingontduiking en ontsnappen, en ijzer opruiming4. In vitro methoden bestaan om te onderzoeken van individuele pathogene mechanismen, maar dierlijke modellen blijven met de beste optie om te onderzoeken van het geheel van5,6van de uitkomst van de ziekte. Eerder onderzoek heeft veel exemplaren van veelbelovende in vitro onderzoeken van virulentie bij gebreke te reproduceren in vivo7,8gedetailleerd. Dus, dierlijke modellen zijn nog steeds vereist om te beoordelen van virulentie in vivo. De meeste modellen van de ziekte, is afhankelijk van muizen om te dienen als een surrogaat voor menselijke infecties ondanks C. albicans onvermogen om te koloniseren natuurlijk lymfkliertest systemen als een commensale9. Ongewervelde modellen van gedissemineerde candidiasis omvatten de nematode Caenorhabditis elegans, de vrucht vliegen Drosophila melanogaster, en de waxworm wasmot, hoewel bezorgdheid over fundamentele verschillen in de basis fysiologie, hebben host lichaam temperaturen en blootstellingswegen belemmerd hun brede acceptatie10,11.
Recentelijk is de G. mellonella waxworm infectie model overgenomen aan model pathogeniteit van een breed scala van bacteriële en schimmelinfecties ziekteverwekkers12,13,14. Voordelen van dit model zijn relatief lage kosten, hogere doorvoer opnemen, gebruiksgemak en verminderde ethische bezwaren met betrekking tot dierlijke weldadigheid ten opzichte van lymfkliertest modellen. Voor onderzoekers vertaalt dit in meer mogelijkheden voor het testen van meerdere variabelen, sterkere betrouwbaarheidsintervallen, snellere experimenten en bypass van dierlijke protocollen. G. mellonella heeft gediend als een platform voor het snel beoordelen C. albicans virulentie na verstoring van genen die vereist is voor de biofilm vorming, filamentation en gene verordening via klinische isolaten11,15 ,16. Recente studies hebben opgenomen onderzoek van antischimmel werkzaamheid met behulp van G. mellonella te beoordelen van de farmacokinetiek van drug activiteit en weerstand onder in vivo instellingen die anders uitdagend en tijdrovend 17,18. Nog, hebben studies van C. albicans virulentie in G. mellonella is bemoeilijkt door naar verluidt hoge niveaus van variatie binnen experimenten en inconsistent protocollen tussen onderzoeksgroepen die verschillende fenotypes van virulentie produceren tussen muizen en waxworms11,13,19,20,21. Hier, schetsen we een G. mellonella protocol om te standaardiseren C. albicans infecties, verhoging van de reproduceerbaarheid in virulentie experimenten, en tonen van consistentie met eerder beschreven studie van virulentie in RattenUitrustingen modellen.
Vorige studies aangetoond dat het C. albicans type-achtige (MTL) locus op chromosoom 5 paring regelt cel identiteit en bevoegdheid vergelijkbaar met Saccharomyces cerevisiae en andere Ascomycota schimmels22paring. De meerderheid van C. albicans isolaten zijn heterozygoot op de MTL locus, codering een van elk van de MTLeen en MTLα allelen (MTLeen/α), en zijn bijgevolg steriele15, 23 , 24. verlies van één van de allelen MTL door verlies van heterozygoten (LOH) of mutatie leidt tot homozygoot MTLeen of MTLα stammen die kunnen ondergaan een fenotypische schakelaar van de steriele 'witte' staat aan de paring bevoegde 'ondoorzichtig' staat25. Vorige werk heeft benadrukt dat verlies van MTL heterozygoten vermindert ook de virulentie in lymfkliertest modellen van systemische infectie over verschillende stam achtergronden26. Hier, detail we de G. mellonella model voor gedissemineerde candidiasis met behulp van een genetisch gelijkaardige experimentele reeks verbeelden de bijdrage van MTL heterozygoten naar virulentie in G. mellonella. We laten zien dat MTL configuratie beïnvloed C. albicans pathogeniteit, waar MTLα stammen waren minder virulente met betrekking tot zowel MTLeen/α en MTLeen cellen, vergelijkbaar met de bevindingen model26binnen lymfkliertest infectie.

<table><tbody><tr><td>Galleria mellonella</td><td>Snackworms.com</td><td></td><td>Koop twee keer zoveel wormen als u denkt te zullen gebruiken</td></tr><tr><td>10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2-sering</td><td>Hamilton</td><td>80000</td><td></td></tr><tr><td>Petrischaal, 100X15 mm, verpakking van 500</td><td>Fisher</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifugebuis, 1,7 mL, verpakking van 500</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaatgebufferde zoutoplossing (Biotechnologie kwaliteit), 500 mL</td><td>VWR</td><td>97062-818</td><td></td></tr><tr><td>Absoluut ethanol, &ge;99,5% zuiver, 500 mL</td><td>Millipore Sigma</td><td>EM-EX0276-1S</td><td></td></tr><tr><td>geautoclaveerde ddH2O</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

de wasmot waxworm infectie model voor verspreid candidiasis

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Candida -soorten zijn gemeenschappelijk schimmels commensals van de mens, de huid, de mucosal oppervlakken, en de maag-darmkanaal te koloniseren. Onder bepaalde voorwaarden, kan Candida hun natuurlijke gebieden resulterend in slopende mucosal infecties als goed als levensbedreigende systemische infecties, die een belangrijk aandachtspunt van onderzoek als gevolg van hun bijbehorende hoge sterftecijfers zijn overwoekeren. Dierlijke modellen van gedissemineerde infectie bestaan voor bestuderen van progressie van de ziekte en de ontrafeling van de kenmerken van Candida pathogeniteit. Van deze biedt de wasmot waxworm infectie model een kosteneffectieve experimentele rol voor high-throughput onderzoek van systemische virulentie. Vele andere bacteriële en eukaryote infectieuze agentia zijn effectief bestudeerd in G. mellonella te begrijpen van de pathogeniteit, waardoor het een algemeen aanvaarde modelsysteem. Variatie in de methode gebruikt voor het infecteren van G. mellonella kan echter veranderen van fenotypische resultaten en interpretatie van de resultaten bemoeilijken. We schetsen hier, de voordelen en nadelen van het model van de waxworm te bestuderen van systemische Candida pathogenese en een aanpak ter verbetering van de reproduceerbaarheid in detail te beschrijven. Onze resultaten wijzen op het bereik van sterfte kinetiek in G. mellonella en beschrijven van de variabelen die deze kinetiek moduleren kunnen. Deze methode staat uiteindelijk, als een ethische, snelle en kosteneffectieve benadering bestuderen de virulentie in een model van gedissemineerde candidiasis.

Hier tonen we een reproduceerbare methode voor het gebruik van G. mellonella waxworms te onderzoeken van een gedissemineerde candidiasis model van infectie met C. albicans. De juiste opslag, onderhoud en selectie van larven voor infectie zijn kritische component reproduceerbaarheid te verzekeren in G. mellonella sterfte(Figuur 1). Gezonde larven, die actief zijn, hebben een lichte kleur geel/tan, en gebrek aan zwart...

Wasmot fungeert als een ongewervelde model voor gedissemineerde candidiasis. Hier, we detail de infectie protocol en ondersteunende gegevens verstrekken voor de effectiviteit van het model.

De wasmot Waxworm infectie Model voor verspreid Candidiasis

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het Candida-veld over stamvirulentie en de bijdragen van specifieke genen aan deze processen. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het vermijdt bezorgdheid met betrekking tot het gebruik van dieren, is robuust, snel, goedkoop, en biedt een groot aantal dieren per experiment. In het algemeen, individuen die nieuw zijn voor deze methode zal waarschijnlijk worstelen een beetje, omdat ze wat moeite met het beoordelen van worm levensvatbaarheid voorafgaand aan het begin van het experiment of ze kunnen een aantal problemen met inconsistente injectie van de wormen hebben.Bestel larven bij groothandelaren en leveranciers die geen hormonen, antibiotica of andere behandelingen aan de larven introduceren en die in staat zijn om levende specimens te verzenden en te leveren. Wanneer de larven aankomen, controleert u elke container om de gezondheid en levensvatbaarheid van de larven te bevestigen. Gezonde larven zullen volledig onder het beddengoed worden ondergedompeld, bewegen en een gele, lichte tankleuring bezitten met weinig larven die zwarte vlekken of verkleuringen langs het lichaam bevatten.De larven

the-galleria-mellonella-waxworm-infection-model-for-disseminated

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Belangrijke technieken om te worden gebruikt bij de evaluatie...

Protocollen voor Vaginale Inenting en Sample Collection in het experimenteel muismodel van Candida Vaginitis

De snelle ontwikkeling, de kleine oppervlakte en de transparantie van de zebravis zijn enorme voordelen voor de studie van aangeboren immuunsysteem controle op...

Niet-invasieve beeldvorming van gedissemineerde candidiasis in de zebravis Larven

Mondelinge en intra haemocolic infectie van larven van de grotere...

Het Insect<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Als een krachtige Infectie model te Bacteriële Pathogenese Onderzoek

De larve van de wasmot Galleria mellonella werd onlangs opgericht als een in vivo model om Legionella pneumophila infectie te bestuderen. Hier tonen we basistechnieken de pathogenese van Legionella karakteriseren de larven, zoals inoculatie meting van bacteriële virulentie en replicatie en extractie en analyse van geïnfecteerde hemocytes.

Gebruik<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Als modelorganisme om te studeren<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Infectie

In vivo ruimte-tijdelijke interacties van pathogeen en immuunafweer op het mucosale niveau zijn niet gemakkelijk in beeld te brengen in bestaande gewervelde gastheren. De hier gepresenteerde methode beschrijft een veelzijdig platform om mucosale candidiasis bij levende gewervelden te bestuderen door gebruik te maken van de zwemblaas van de juveniele zebravis als een infectieplaats.

Modelleren candidiasis van de slijmvliezen in larvale zebravis door zwemblaas Injection

Hier presenteren we de nematode Caenorhabditis elegans als een veelzijdig hostmodel aan de studie van microbiële interactie.

De Nematode Caenorhabditis Elegans - een veelzijdig In Vivo -Model om te studeren van Host-microbe interacties

Hier bieden wij een gedetailleerd protocol voor een model van de orale toediening met behulp van de larven van de wasmot en hoe te karakteriseren geïnduceerde aangeboren immuunresponsen. Met behulp van dit protocol, zal onderzoekers zonder praktische ervaring kunnen gebruiken de G. mellonella dwangvoeding methode.

Een mondelinge beheermodel voor wasmot te Study Commensal-Induced aangeboren immuunresponsen

We stellen een muismodel op van C.albicans-geassocieerde kathetergerelateerde infectie (CRI), waarbij biofilm zich vormt op de katheter, en de interactie tussen C.albicans en gastheer goed correleert met de klinische CRI. Dit model helpt bij het screenen van therapieën voor C.albicans biofilm-geassocieerde CRI, waarmee een basis wordt gelegd voor klinische transformatie.

Een kathetergerelateerd Candida albicans-infectiemodel bij muizen

Deze studie presenteert een gestandaardiseerd kader voor het optimaliseren van G. mellonella-infectiemodellen voor gebruik in preklinische antimicrobiële beoordeling. De toepassing van een G. mellonella-model als onderdeel van een preklinische pijplijn voor de ontwikkeling van antimicrobiële stoffen zou het aantal ineffectieve verbindingen dat doorgaat naar klinische proeven kunnen verminderen.

Galleria mellonella als antimicrobieel screeningsmodel

Tijdens het infectieproces, een belangrijke stap is de hechting van pathogenen met gastheercellen. In de meeste gevallen deze hechting stap gebeurt in de aanwezigheid van mechanische spanning opgewekt door stromende vloeistof. Beschrijven we een techniek die schuifspanning introduceert als een belangrijke parameter in de studie van bacteriële hechting.

Introductie van Shear Stress in de studie van bacteriële hechting

Leer het Galleria mellonella-infectiemodel voor verspreide candidiasis. Deze methode maakt onderzoek naar Candida-virulentiefactoren mogelijk zonder ethische bezwaren van gewervelde dieren.

De wasmot Waxworm infectie Model voor verspreid Candidiasis

Meer video's verkennen