Bioengineering
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Immobilisering af levende Caenorhabditis elegans enkeltpersoner ved hjælp af en ultra-tynd Polydimethylsiloxan mikrofluid Chip med væskeophobning
Chapters
Summary March 19th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
En serie af immobilisering metoder er blevet etableret til at tillade den målrettede bestråling af levende Caenorhabditis elegans enkeltpersoner ved hjælp af en nyligt udviklede ultra-tynde Polydimethylsiloxan mikrofluid chip med væskeophobning. Denne roman på chip immobilisering er også passende for imaging observationer. Detaljeret behandling og applikationseksempler chip er forklaret.
Transcript
En fordel ved denne protokol er, at ormen ark er let at håndtere. Arket har funktioner, der forhindrer tørring, gør det muligt for os at foretage mikrostrålebestråling til levende dyr, udføre flere adfærdsmæssige analyser, og langsigtet observation. De mikrofluidiske kanaler i dette ormeark er åbne, hvilket gør det nemmere at indsamle dyr.
Disse ormeark kan også bruges gentagne gange, hvilket gør dem mere økonomiske. Da vi udviklede denne teknik, ønskede vi kun at bestråle en del af dyrene med en mikrobæmme under et mikroskop. Så vi havde brug for klare, meget tynde chips i stand til at holde dyrene.
Til at begynde, placere en tynd, gennemsigtig ark på scenen til brug som en bund dække film. Placer forsigtigt et ormeark på den nederste dækfilm med flad pincet. Placer mindst tre dråber bufferopløsning på overfladen af en 6 centimeter, ikke-behandlet petriskål.
Vælg derefter flere voksne C.elegans med en platina picker fra en kulturplade. Overfør dyrene til en dråbe med platina picker og lad dyrene svømme i buffer for at fjerne eventuelle bakterier. Vask dyrene i to separate dråber og skyl dyrene i en anden dråbe.
Placer derefter en dråbe bufferløsning på overfladen af ormearket. Fjern de vaskede dyr fra bufferdråbeværktøjet, og overfør dem til en dråbe på ormearket. Brug flad pincet til at placere en PS-coverfilm over ormenarket, og tryk forsigtigt over kanalerne fra den ene ende af arket til den anden.
Eller bare drop dyr i dråbe og forsigtigt forsegle med dækslet filmen, så dråbe spreder sig mellem dækslet og ormen ark med dyrene i kanalen. Bekræft dyrene er i live ved at kontrollere for bevægelse med et mikroskop på 1-2x forstørrelse. Dyrenes positioner registreres, og nummeret på den kanal, hvori hvert dyr er lukket, og hvert dyrs position i kanalen registreres.
Til indsamling af immobiliserende dyr skal du bruge flade pincet til at fjerne dækslet fra ormearket og derefter slippe 10-15 mikroliter bufferopløsning på en af de mikrofluidiske kanaler, der omslutter dyrene. Under stereomikroskopet skal du observere dyrene, når de begynder at spinde. Brug derefter platina picker til at afhente svømning dyr og overføre dem til en analyse plade.
Efter omslutter dyrene som tidligere påvist, observere fluorescerende pletter på dyrene med en flourescence mikroskop. Så billede calcium ion bølge formering ved hjælp af video erhvervelse til at observere dynamiske aktiviteter. Placer den brugte orm ark på en seks centimeter petriskål og sted omkring 100 mikroliter af steriliseret ultra-rent vand på arket.
Brug behandskede fingre til at sprede vand på overfladen af arket og vaske eventuelle forurenende stoffer. Brug derefter engangsservietter til at fjerne fugten fra ormearket. Dispensere fem milliliter 70% ethanol i Petri-skålen og bruge behandskede fingre til at sprede ethanol over ormen ark.
Endelig, efter arket er tørt, placere arket på en steril Petri-skål og dække. Ved hjælp af denne protokol blev egnetheden af forskellige coverfilm undersøgt. Der var ingen signifikant forskel i motilitet mellem kontroldyr og dyr, der var omgivet af mikrofluidiske kanaler med PS-film.
I modsætning hertil blev motilitet signifikant reduceret i dyr, der var lukket under et dækglas. Den motilitet af dyr omgivet med et kæledyr film blev også betydeligt nedsat. Det er vigtigt at vælge coverfilm til forsegling af mikrofluidic kanaler omhyggeligt.
Ved hjælp af denne protokol evaluerede vi egnetheden af forskellige coverfilm gennem bevægelsesanalyser af dyrene tre timer efter immobilisering på chippen. Ved hjælp af denne teknik havde vi kun til hensigt at udvikle en ultratynd vådchip til bestråling af mikrostråler. Men, disse orm ark er allerede blevet brugt til billedbehandling og adfærdsmæssige analyser ud over deres oprindelige applikationer.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
