Automatische metingen van slaap en motorische activiteit in Mexicaanse Cavefish

Dit protocol kan worden gebruikt om slaap en activiteit in elke vispopulatie te kwantificeren en heeft het potentieel om het aantal modelsystemen uit te breiden dat wordt gebruikt om slaapregulatie te bestuderen. Het voordeel van deze techniek is de flexibiliteit. Vis kan bijvoorbeeld worden gevolgd in verschillende arenamaten of in afzonderlijk gehuisveste of groepsgerichte experimenten.

Een sterkte van het meten van slaap in dit systeem is de besmeniging van de methode voor hoge doorvoer drug of genetische screening. We hebben deze methode toegepast op de studie van de evolutie van de slaap in twee verschillende populaties van holvis die dramatisch verschillende slaapfenotypes aantonen. Hoewel het moeilijk kan zijn om een systeem voor gedragsbeeldvorming vast te stellen, biedt ons systeem een kosteneffectieve methode voor het bestuderen van larve en volwassen vissen.

Om het systeem te bouwen om het bewegingsgedrag nauwkeurig bij te houden voor het bestuderen van slaap- en circadiane ritmes in larve A.mexicanus, gebruikt u 0,33 centimeter dik wit teken acryl om een platform te bouwen voor het larve trackingsysteem. Plaats het opnameplatform bovenop het verlichte vierkante koellichaam waarop vishoudende arena’s zich tijdens de gedragstrackingexperimenten zullen bevinden, en plaats een tweede acryl in de doos tussen de lichten in de dierenbehuizing om het infrarood te verspreiden voor optimale verlichting en contrast. Plaats het gehele larvale volgstadium en de verlichting in een afgesloten plastic buis.

Gebruik een roterend gereedschap om de lens van een experimenteel geschikte webcam te verwijderen. Verwijder de kleine schroeven op de achterkant van de camera om de binnenbehuizing te verwijderen en verwijder de kleine schroeven in het lichaam van de camera om de rest van de lens los te maken. Gebruik een kleine schroevendraaier om alle delen van de lens behuizing die overblijven na het snijden van de lens te verwijderen.

En verwijder de blauwe lichtgevende diode op het bovenste deel van het apparaat met lading of CCD-behuizing. Vervolgens, breng de binnenbehuizing aan zijn originele richtlijn alvorens de twee buitenschroeven terug in hun originele posities te schroeven. Gebruik een kleine zaag om de binnenkant van de camera te routeren zodat de camera kan worden uitgerust met een afgeronde plastic routing bit gladstrijken van de extra plastic totdat het kan een lens adapter te begeleiden.

Installeer een infrarood pass filter in de camera zo dicht mogelijk bij de CCD mogelijk zonder direct contact met de camera, en schroef de adapter van een 35-millimeter vaste lens in de voorkant van de camera in de achterkant van de lens. Plaats vervolgens de camera en de lens in het gat geboord in het deksel aan de bovenkant van de buis die het podium en de lichten huizen, en bevestig de USB op de computer waarop de dieren zullen worden opgenomen. Om een slaapsysteem voor volwassen vissen te bouwen, snijdt u eerst infraroodstroken met tussenpozen van ongeveer 46 centimeter.

En plaats een 46 bij vijf bij 0,32 centimeter 9%licht pass wit teken acryl plaat direct voor elke infrarood lichtstrip om het infrarood licht diffuus. Plaats vervolgens alle tanks op een rek dat achtergemonteerde infraroodverlichting ondersteunt en gebruik ondoorzichtige kunststof verdelers en 10-liter glazen tanks om individuele arena’s te creëren. Om de motorische activiteit van de Mexicaanse tetra vissen plaats dag vier tot zes post-bemesting vis in individuele putten van een 24-well weefselplaat, en dagen 20 tot 30 post-bevruchting in individuele putten van een zes-well weefselplaat.

Om volwassen tetra slaap en activiteit in een sociale instelling tot vijf volwassenen per 10-liter tank met of zonder de verdelers vast te leggen. In dit representatieve experiment vertoonden larvevissen uit drie onafhankelijke grotvissenpopulaties een aanzienlijke vermindering van de slaap in vergelijking met oppervlaktevissen. Deze slaapproductie is consistent over alle leeftijden getest als slaap was ook aanzienlijk verminderd in volwassen Pachon, Molino, en Tinaja grotvissen in vergelijking met oppervlaktevissen.

Met name sociale huisvesting robuust verminderd slapen in oppervlaktevissen zonder dat de slaap in Pacho grot vissen waarschijnlijk te wijten aan een kelder effect in de grot vis populaties. Bij het opnemen van de vis moet ervoor worden gezorgd dat de cameraverlichting optimaal is om het signaal van de vis ten opzichte van de achtergrond te verbeteren. Sommige basis opdrachtregel codering is vereist voor dit protocol dat volledig is beschreven in de tekst en moet vatbaar zijn voor elke lab instelling.

Dit protocol heeft geleid tot tal van vragen over slaapevolutie en wordt momenteel gebruikt voor drugsschermen, slaapgedrag volgen en begrijpen hoe sociaal gedrag de slaap beïnvloedt.