מדידות אוטומטיות שינה ופעילות גינקולוגיות Cavefish מקסיקני

פרוטוקול זה יכול לשמש לכימות שינה ופעילות בכל אוכלוסיית דגים ויש לו פוטנציאל להרחיב את מספר מערכות המודל המשמשות לחקר ויסות השינה. היתרון של טכניקה זו הוא הגמישות שלה. לדוגמה, ניתן לעקוב אחר דגים במגוון גדלי זירה או בניסויים שוכנים בנפרד או שוכני קבוצה.

חוזק של מדידת שינה במערכת זו הוא השירות של השיטה עבור תרופה בתפוקה גבוהה או הקרנה גנטית. יישמנו שיטה זו לחקר התפתחות השינה בשתי אוכלוסיות שונות של דגי מערות המדגימות פנוטיפים שונים באופן דרמטי בשינה. למרות שזה יכול להיות קשה להקים מערכת להדמיה התנהגותית, המערכת שלנו מספקת שיטה חסכונית לחקר זחל ודגים בוגרים.

כדי לבנות את המערכת כדי לעקוב במדויק אחר התנהגות לוקומוטורית לחקר השינה והמקצבים הביולוגיים בזחל A.mexicanus, השתמש בשלט לבן בעובי 0.33 ס”מ כדי לבנות פלטפורמה למערכת המעקב אחר הזחלים. מניחים את פלטפורמת ההקלטה על גבי מפזר החום המרובע המדליק שעליו ישכוןו זירות המכילות דגים במהלך ניסויי המעקב ההתנהגותיים, ומ מניחים אקריליק שני בתוך הקופסה בין האורות במשכן החיות כדי לפזר את האינפרא-אדום לתאורה וניגודיות אופטימליים. מניחים את כל שלב המעקב והתאורה של הזחל בתוך צינור פלסטיק סגור.

השתמש בכלי סיבובי כדי להסיר את העדשה ממצלמת אינטרנט המתאימה מבחינה ניסיונית. הסר את הברגים הקטנים בגב המצלמה כדי להסיר את המאכלס הפנימי, והסר את הברגים הקטנים בתוך גוף המצלמה כדי לשחרר את שאר העדשה. השתמש במברג קטן כדי להסיר את כל החלקים של מאכלס העדשה שנותרו לאחר חיתוך העדשה.

ולהסיר את דיודה פולטת אור כחול בחלק העליון של המכשיר מזוג תשלום או דיור CCD. לאחר מכן, להחזיר את הדיור הפנימי לכיוון המקורי שלה לפני לדפוק את שני הברגים החיצוניים בחזרה למיקומים המקוריים שלהם. השתמש במסור קטן כדי לנתב את החלק הפנימי של המצלמה כדי לאפשר למצלמה להיות מצוידת עם קצת ניתוב פלסטיק מעוגל מחליק את הפלסטיק הנוסף עד שהוא יכול ללוות מתאם עדשה.

התקן מסנן מעבר אינפרא אדום בתוך המצלמה קרוב ככל האפשר ל- CCD מבלי ליצור קשר ישיר עם המצלמה, והברג את המתאם של עדשה קבועה של 35 מילימטר בחלק הקדמי של המצלמה לתוך החלק האחורי של העדשה. לאחר מכן מניחים את המצלמה והעדשה לתוך החור שנקדח לתוך המכסה בחלק העליון של הצינור המאכלס את הבמה ואת האורות, ולחבר את ה- USB למחשב שבו בעלי החיים יוקלטו. כדי לבנות מערכת שינה לדגים בוגרים, תחילה לחתוך רצועות אינפרא אדום במרווחים של כ 46 ס”מ.

והצב גיליון אקריליק של סימן לבן 46 על 5 על 0.32 ס”מ 9%light סימן לבן ישירות מול כל רצועת אור אינפרא-אדום כדי לפזר את אור האינפרא-אדום. לאחר מכן הנח את כל המיכלים על מתלה התומך בתאורה אינפרא-אדום המותקנת מאחור, ולהשתמש במפרידי פלסטיק אטומים ומיכלי זכוכית באורך 10 ליטר כדי ליצור זירות בודדות. כדי לתעד את פעילות לוקומוטור של הדג טטרה מקסיקני מקום יום ארבע עד שישה דגים לאחר ההפריה לתוך בארות בודדות של צלחת רקמה 24 בארות, וימים 20 עד 30 לאחר ההפריה בארות בודדות של צלחת רקמה שש בארות.

כדי להקליט שינה טטרה למבוגרים ופעילות בבית הגדרה חברתית עד חמישה מבוגרים לכל מיכל 10 ליטר עם או בלי מחלקים. בניסוי מייצג זה דגי זחל משלוש אוכלוסיות עצמאיות של דגי מערות הציגו ירידה משמעותית בשינה בהשוואה לדגים על פני השטח. ייצור שינה זה עקבי בכל הגילאים שנבדקו כמו שינה הופחתה באופן משמעותי גם פאצ’ון למבוגרים, מולינו, דגי מערת טינה בהשוואה לדגים פני השטח.

יש לציין כי דיור חברתי הפחית את השינה בדגים על פני השטח מבלי להשפיע על השינה בדגים במערת פאצ’ו, ככל הנראה בשל אפקט מרתף באוכלוסיות דגי המערה. בעת הקלטת הטיפול בדגים יש לנקוט כדי להבטיח כי תאורת המצלמה היא אופטימלית כדי לשפר את האות של הדג ביחס לרקע. קידוד בסיסי אחד של שורת הפקודה נדרש עבור פרוטוקול זה המתואר במלואו בטקסט ואותו אמור להיות נוח לכל הגדרת מעבדה.

פרוטוקול זה הוביל לשאלות רבות על התפתחות השינה והוא משמש כיום עבור מסכי סמים, לעקוב אחר התנהגות השינה, ולהבין כיצד התנהגות חברתית משפיעה על השינה.