5,732 Views
•
09:36 min
•
April 26, 2019
DOI:
Det lille antallet vaskulariserte kompositt allotransplanter utført klinisk nødvendiggjør en pålitelig, reproduserbar dyremodell for å studere de underliggende årsakene til graft avvisning. Klinisk relevante vev som hud, muskel, og bein er alle til stede i modellen. I tillegg tillater den ikke-funksjonelle karakteren av vår modell raskere kirurgi, mindre iskemisk tid for klaffen og lavere sykelighet sammenlignet med ortotopiske modeller av VCA.
I håndtransplantasjon mottakere, vasculopati av donor fartøy kan føre til en fullstendig nedleggelse av fartøyene, og iskemisk skade på grafted hånd. Denne modellen er et verktøy for å studere utviklingen av disse vaskopatiske hendelsene. Før du prøver denne kirurgiske modellen, bør den primære kirurgen være kjent med og dyktig i makrovaskulære kirurgiske teknikker.
Dette er en komplisert og lang prosedyre. Den visuelle demonstrasjonen vil hjelpe andre laboratorier til å forberede seg tilsvarende, og forstå trinnene i operasjonen. Til å begynne, først høste bakbenet til en donor rotte ved å lage et hud snitt i lyskehulen, utsette lårbenet.
Lag et ventralt hud snitt, noe som vil bidra til disseksjon av pedicle. Etter disarticulation av kneet og ankelen, gjør dorsal hudkutt, transect pedicle for å frigjøre pode, og transportere pode umiddelbart til mottakeren kirurgisk tabell, hvor kirurgisk sted mottaker dyret er forberedt på forhånd for å minimere pode iskemisk tid. På mottakerdyret, utsett og dissekere lårbenskarene som før, og deretter anastomose transplantatet, venen ende-til-side, arterie ende-til-ende.
Innpod pode inn i inngangslommen og orientere den opp-ned. Til slutt suturer huden. For å starte prosedyren, barber en bedøvet donor rotte, og bruk deretter hårfjerningskrem.
Injiser 30 enheter heparin subkutant i scruff-området. Plasser dyret liggende på en varmepute og produsere et sterilt kirurgisk felt ved å forberede, skrubbe og drapere det kirurgiske området, inkludert dorsal aspektet av beinet. Bruk skalpellblad nummer 15 for å gjøre et 3-centimeters hud snitt i lysken konkautrommet til donorrotte.
Bruk Iris saks til å sidevis reflektere inngangsfettputen. Bruk sløv disseksjon med en bomullspinne, utsett de vanlige lårbenskarene, og plasser deretter en trådkrok med et elastisk bånd for å trekke tilbake magemusklene. Under et dissekeringsmikroskop med opptil 40X forstørrelse, bruk mikrosaks, nummer tre rette gullsmedt tang og nummer fem 45-graders vinklede tang for å dissekere pedicleen proksimalt fra fremveksten av de vanlige lårbenskarene under inngangsleddet, og distalt til samløpet av popliteale kar inn i transplantatet.
Ved hjelp av mikroklipp og bipolare gullsmeder tang, ligate og dele de store arterielle og venøse grener for å mobilisere de viktigste lårårene. Bruk fine bipolare tang for å cauterize noen små grener. Bruk Iris saks for å gjøre et hud snitt fra midten av den forrige huden kuttet langs ventral side av bakklimat til ankelområdet.
Skjær gracilis muskelen og de andre adductor musklene under den på en vertikal måte for å eksponere og ligate medial proksimale genicular fartøy, dypt forgrening små fartøy, og isjiasnerven. På dette punktet, på et eget kirurgisk bord, bør den andre kirurgen intubere og bedøve mottakerdyret for å forberede mottakerens kirurgiske sted i tide for podeplassering, og minimere transplantatets iskemiske tid. Gjør omkrets hud snitt på nivået av kneet og ankelen, disarticulate kneet og ankelen, og fjerne overflødig muskel og vev.
Lag et vertikalt hud snitt på den dorsale siden av bakkulb for å frigjøre pode, bestående av fibula og tibia, og nå koblet bare av pedicle. Plasser små klemmer så proksimalt som mulig på lårarterien og venen og kutt pedicleen så nært som mulig til inngangsleddbåndet. Bruk en 27-gauge spyle stump kanyle for å injisere heparinisert saltvann i lårarterien for å skylle blodtransplantaten.
Pakk det isolerte transplantatet i varm saltvannsgjennomvåt gasbind og transporter det umiddelbart til bordet med mottakerdyret, med operasjonsstedet allerede forberedt på vaskulær anastomose. Intubere mottakerrotten, og dypt bedøve med 2,5 til 3% fordampet isofluran, balansert med en liter per minutt oksygen. Plasser dyret liggende på en varmepute, og skrubb og draper operasjonsstedet.
Mens den første kirurgen arbeider med å frigjøre transplantatet fra donordyret, bruk skalpellblad nummer 15 for å lage et tre centimeter langt hudsnitt i lyskekonkauset til den bedøvede mottakerrotten. Bruk Iris saks til å sidevis reflektere inngangsfettputen. Etter å ha avslørt de vanlige lårbenskarene på samme måte som med donordyret, legg en trådkrok med et elastisk bånd for å trekke tilbake magemusklene.
Deretter ligate og dele Murphy grener. Ved hjelp av 10-0 nylon avbrutt suturer, anastomose donor fartøy. Til mottakerfartøy via venøs ende-til-side teknikk.
Utfør deretter arteriell anastomose via ende-til-ende-teknikk. Etter gradvis frigjøring av klemmene, overvåk de anastomotiske stedene for blødning og legg til flere suturer om nødvendig. For å sikre effektiv graft reperfusjon, visuelt vurdere vaskulær anastomose.
Sett deretter graften inn i inngangslommen, og orienter den opp ned, med ankelleddet overlegen, og kneleddet dårligere. Bruk tucking suturer for å sikre pode til tilstøtende muskler. Til slutt, lukk huden via avbrutt horisontal hudabsorberende 4-0 suturer, og fortsett med postoperativ omsorg som beskrevet i manuskriptet.
Rotte VCA heterotopisk hindlimb osteomyocutaneous klaff modell gjør det mulig for langsiktig allograft overlevelse under immunsuppresjon. Klaffen er godt skjult i lysken området, og utgjør minimal sykelighet og ubehag for dyret. Når immunsuppresjonsbehandlingen ble stoppet, ble transplantatet avvist.
Doppler bilder av allograft viser et skifte fra minimal blod profusion umiddelbart etter VCA, til full revaskularisering av klaffen på dag 64. Hudbiopsi av en syngeneisk allograft på dag 45 viser normal morfologi av hudkomponentene, mens det er atrofi og mononukleær celleinfiltrasjon i en allogen allograft i avvisning på dag 75 behandlet daglig med en lavere dose immunsuppressiv. Muskelbiopsi av en syngeneisk allograft på dag 45 viser normal morfologi, mens muskelatrofi og mononukleær celleinfiltrasjon er tydelig i en allogen allograft i avvisning på dag 98, behandlet daglig med en lavere dose immunsuppressiv.
Femoral arteriebiopsi av en syngeneisk allograft på dag 45 viser normal morfologi i arterien, i motsetning til lårarterien i en allogen allograft i avvisning på dag 98, behandlet daglig med en lavere dose av et immunsuppressivt middel. Denne modellen gir et verktøy for å teste effekten av akutt avvisning, kronisk avvisning og miljøfaktorer som infeksjon og kirurgiske fornærmelser på utviklingen av vaskuopati. Immunsuppressive legemidler er nødvendig for langsiktig overlevelse av transplantatet.
Disse stoffene er kjemisk farlige, og bør håndteres med forsiktighet og riktig personell verneutstyr.
Vascularized kompositt allograft tilbyr liv-endre fordeler til transplantasjon mottakere, men de biologiske årsakene til pode avvisning og vasculopathy fortsatt dårlig forstått. Den gnager kirurgiske modellen som presenteres her tilbyr en reproduserbar, klinisk relevant modell for transplantasjon, slik at forskerne kan evaluere avvisning hendelser og potensielle terapeutiske strategier for å hindre deres forekomst.
Read Article
Cite this Article
Fleissig, Y., Reed, R. M., Beare, J. E., LeBlanc, A. J., Williams, S. K., Kaufman, C. L., Hoying, J. B. Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research. J. Vis. Exp. (146), e59458, doi:10.3791/59458 (2019).
Copy