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Les adipocytes existent dans des dépôts discrets et ont des rôles divers au sein de leurs microenvironnements uniques. Comme les différences régionales dans le caractère et la fonction des adipocytes sont découvertes, l'identification normalisée et l'isolement des dépôts sont cruciaux pour l'avancement du champ. Ici, nous présentons un protocole détaillé pour l'excision de divers dépôts adipeux de souris.
Une méthodologie normalisée pour identifier et disséquer les dépôts adipeux dans tout le corps est essentielle pour l’étude des différences dans le caractère et la fonction des adipocytes dans des niches anatomiques discrètes. Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’une méthode fiable et précise pour identifier et exciser les dépôts d’adipeux rongeurs communs et moins étudiés. Pour l’identification et l’isolement de la CHAUVE-SOURIS interscapulaire, utilisez des ciseaux d’iris pour couper horizontalement le long du bord inférieur du tissu sous-cutané antérieur d’une souris euthanasiée suivant la bordure naturelle du dépôt.
Faire deux incisions verticales le long des bords latériaux du dépôt en suivant les bordures naturelles du tissu. Utilisez des forceps pour retourner soigneusement le dépôt pour révéler le tissu adipeux brun interscapulaire en forme de papillon incorporé dans le tissu adipeux blanc. Puis disséquez soigneusement le BAT loin du WAT environnant.
Entreposer les tissus adipeux dans des contenants appropriés pour analyse en aval. Pour l’identification et l’isolement du WAT sous-cutané postérieur, placez la souris dans la position supine et fixez les membres de l’animal. Utilisez des forceps pour soulever la peau à la base du sternum et faire une incision cutanée d’un millimètre.
Insérez une lame des ciseaux d’iris dans la coupe et faites une incision de quatre à cinq centimètres de la peau médiane à partir de la base du sternum et montez à la base de la queue. Ensuite, faire deux incisions horizontales d’un centimètre au sommet de l’incision verticale initiale s’étendant latéralement à partir de la ligne médiane. Utilisez les forceps pour peler soigneusement la peau de la cavité péritonéale, utilisez la jambe pour localiser le WAT sous-cutané postérieur qui devrait rester associé à la peau.
Épinglez la peau tendue et excisez complètement le dépôt triangulaire inguinal wat de la base de l’aine postérieur à travers l’aine. Pour l’identification et l’isolement viscérals de dépôt de WAT, utilisez des forceps pour soulever la paroi péritonéale mince de cavité à la base du sternum et faire une incision d’un millimètre dans le tissu sous tente. Insérez une lame des ciseaux d’iris dans la coupe et faites une incision verticale descendante de quatre à cinq centimètres du haut de la cavité péritonéale au rectum.
Faire deux incisions horizontales d’un centimètre en haut et en bas de l’incision verticale s’étendant latéralement à partir de la ligne médiane et utiliser les forceps pour peler le péritoine pour exposer le contenu de la cavité abdominale. Puis épinglez le péritoine tendu à la casserole de dissection pour récolter les dépôts wat contenus dans la cavité péritonéale. Pour l’identification et l’isolement du WAT gonadal viscéral, localisez les 9ades et utilisez des forceps pour soulever le WAT gonadal associé, puis utilisez des ciseaux d’iris pour exciser soigneusement le WAT des 9ades.
Pour exciser le dépôt périnal, localisez le rein et utilisez des forceps pour soulever le tissu rénal. Tirez le rein à la ligne médiane pour voir une division claire entre les dépôts périirenal et rétroperitoneal et exciser le WAT directement associé aux reins. Retirez ensuite les glandes surrénales situées au-dessus des reins du WAT.
Pour l’identification et l’isolement rétroperitoneal de WAT, soulevez le rein à la ligne médiane encore et utilisez des ciseaux d’iris pour disséquer soigneusement le WAT rétroperitoneal de la paroi péritonéale postérieure. Pour isoler le WAT popliteal, placez la rotule contre la casserole de dissection en prenant soin que le fossa popliteal à l’arrière du genou est orienté vers le haut. Utilisez les ciseaux d’iris pour enlever soigneusement la peau de la base de l’arrière-point au pied.
Utilisez les ciseaux d’iris pour faire une coupe à la bordure inférieure des têtes médiale et latérale du muscle gastrocnemius, utilisez les forceps pour soulever le muscle pour révéler le dépôt popliteal triangulaire. Utilisez ensuite des ciseaux d’iris pour exciser le dépôt le long des bordures des tissus naturels. Ici, les emplacements anatomiques bruts des dépôts sous-cutanés, bruns, viscérals et popliteal de souris sont montrés.
Les caractéristiques histologiques des dépôts adipeux sous-cutanés, bruns, viscérals, popliteal, constitutifs et réglementés de la moelle, intramusculaires et infrapatellar peuvent être évaluées par des protocoles de coloration standard de l’hématoxyline et de l’éosine. Les tissus adipeux isolés à l’aide de ce protocole peuvent être utilisés pour une grande variété de critères d’évaluation expérimentaux, y compris l’analyse histologique, les études moléculaires et l’analyse de l’expression des gènes et des protéines. La normalisation à l’échelle du terrain de l’identification de divers dépôts adipeux nous aidera sans aucun doute à mieux comprendre leurs caractéristiques moléculaires et métaboliques et leurs contributions différentielle aux états pathologiques locaux et systématiques.
