Name: הערכת אנגיוגנזה תרפויטי במודל של מורטין של איסכמיה החוצה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: חקור מודל איסכמיה בגפיים אחוריים בעכברים להערכת טיפולים אנגיוגניים. שיטה זו מאפשרת ניתוח תפקודי, היסטולוגי ומולקולרי של סוכני אנגיוגנזה לשיפור זרימת הדם ברקמות איסכמיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לחוסה רינו ולטיאניה קרבלהו, ראשי המכון הביודמיה והמעבדה לפתולוגיה של היסטולוגיה והשוואתי של המכון המולקולרי לובו אנטז, בהתאמה. אנחנו גם מודים ויאצ Sushchyk מהמחלקה לאנטומיה של בית הספר לרפואה של נובה/Faculdade דה Ciências מדיאס, אוניברסידייד נובה דה ליסבון.
התייחסות מימון: פרויקט ממומן על ידי UID/IC/0306/2016 הדיווה הטובה ביותר. פאולה דה אוליביירה נתמכת על ידי מלגת (SFRH/BD/80483/2011) מתוך הדיווה הישנה של האגודה.

<ol><li>Becker, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+I%3A+Definitions%2C+epidemiology%2C+clinical+presentation+and+prognosis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Chapter I: Definitions, epidemiology, clinical presentation and prognosis.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 42 Suppl 2, S4-S12 (2011).</li>
<li>Fowkes, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+artery+disease%3A+epidemiology+and+global+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Peripheral artery disease: epidemiology and global perspectives.</a> Nature Reviews Cardiology. 14 (3), 156-170 (2017).</li>
<li>Abu Dabrh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+history+of+untreated+severe+or+critical+limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">The natural history of untreated severe or critical limb ischemia.</a> Journal of Vascular Surgery. 62 (6), 1642-1651 (2015).</li>
<li>Lejay, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+murine+model+of+sustainable+and+durable+chronic+critical+limb+ischemia+fairly+mimicking+human+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A new murine model of sustainable and durable chronic critical limb ischemia fairly mimicking human pathology.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 49 (2), 205-212 (2015).</li>
<li>Sprengers, R. W., Lips, D. J., Moll, F. L., Verhaar, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+cell+therapy+in+patients+with+critical+limb+ischemia+without+surgical+options%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Progenitor cell therapy in patients with critical limb ischemia without surgical options.</a> Annals of Surgery. 247 (3), 411-420 (2008).</li>
<li>Lotfi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+more+relevant+hind+limb+model+of+muscle+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Towards a more relevant hind limb model of muscle ischaemia.</a> Atherosclerosis. 227 (1), 1-8 (2013).</li>
<li>Masaki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+gene+therapy+for+experimental+critical+limb+ischemia%3A+acceleration+of+limb+loss+by+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+165+but+not+of+fibroblast+growth+factor-2%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Angiogenic gene therapy for experimental critical limb ischemia: acceleration of limb loss by overexpression of vascular endothelial growth factor 165 but not of fibroblast growth factor-2.</a> Circulation Research. 90 (9), 966-973 (2002).</li>
<li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737-1746 (2009).</li>
<li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 40 (6), 796-803 (2010).</li>
<li>Brevetti, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise-induced+hyperemia+unmasks+regional+blood+flow+deficit+in+experimental+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Exercise-induced hyperemia unmasks regional blood flow deficit in experimental hindlimb ischemia.</a> Journal of Surgical Research. 98 (1), 21-26 (2001).</li>
<li>Ministro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+ionizing+radiation+induces+therapeutic+neovascularization+in+a+pre-clinical+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Low-dose ionizing radiation induces therapeutic neovascularization in a pre-clinical model of hindlimb ischemia.</a> Cardiovascular Research. 113 (7), 783-794 (2017).</li>
<li>Pereira, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+angiogenesis+induced+by+human+umbilical+cord+tissue-derived+mesenchymal+stromal+cells+in+a+murine+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+Therapy%22%5BJournal%5D)">Therapeutic angiogenesis induced by human umbilical cord tissue-derived mesenchymal stromal cells in a murine model of hindlimb ischemia.</a> Stem Cell Research Therapy. 7 (1), 145(2016).</li>
<li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

מודלים murine של CLI היו בעיקר באמצעות הארכה של עורק הירך בדיוק המרוחק למקור של הראש העמוק מוריס 4,5,6,7,8,9. זה הראה להשאיר את רוב המחזור הנלווה ללא פגע, אשר מחזיר את זרימת הדם אל האיבר בתוך 7 ימים 9. ניתן להשיג את הסרת המיטה העירבון באמצעות כריתה של עורק הירך. עם זאת, עד שליש מזרימת הדם המקורית ניתן ...

מחלת עורקים היקפית (PAD) משפיעה בעיקר על הגפיים התחתונות. PAD נגרמת על ידי טרשת עורקים, חסם עורק שיכול לגרום להגבלה חמורה לזרימת הדם בגפיים התחתונות1. התפטרות לסירוגין הוא הביטוי הראשון של PAD ומתייחס כאב שרירים בעת הליכה. CLI הוא השלב החמור ביותר של PAD, להיות מאובחנים בחולים כי להראות כאבים מנוחה איסכמי, כיבים או נמק2. חולים עם CLI יש סיכון גבוה של קטיעה, במיוחד אם לא מטופל3. הגפיים התחתונות revascularization (או על ידי ניתוח פתוח או הליך אנדוכלי) היא כרגע הדרך היחידה להשיג הצלה איבר. עם זאת, בסביבות 30% מהחולים CLI אינם מתאימים הליכים אלה, מסיבות הכוללות את המיקום של נגעים, התבנית של סגר עורקים והיקף תחלואה נרחבת4,5. לכן, טיפולים חדשים נחוצים עבור אלה חולים שאינם ניתן לטיפול במקרים אחרים, עם קידום האנגיוגנזה להיות האסטרטגיה תחת חקירה אינטנסיבית יותר.
לפני בדיקה בבני אדם, את היעילות והבטיחות של טיפולים חדשים בvivo יש לשקול בדגמי חיות. מספר דגמים פותחו למחקר של CLI, בעיקר על ידי גרימת איסכמיה הגפיים האחרונות (hli) בעכברים6,7,8,9,10. עם זאת, מודלים אלה נבדלים במספר היבטים, כולל טבעו של העורקים המגורטים ו/או מרוטרים והאם הורידים והעצבים שמסביב מושלכות גם כן6,7,8, 9,10. יחד, היבטים אלה ישפיעו על חומרת הפציעה של איסכמיה-reperfusion בכל חיה, מה שהופך את התוצאות קשה להשוואה. לכן, זה קריטי לפתח פרוטוקול אפקטיבי שבו ההליך לגרום איסכמיה והערכה של מטרות שונות צריך להיות מתוקננת כדי להעריך אם טיפול אנגיוגנטי מסוים יהיה יעיל. פרוטוקול ניסיוני שנועד לכסות את כל ההיבטים הללו יספק הבנה מקיפה של המנגנונים שבהם טיפולים אנגיוגנטיים מפעילים את השפעתם ומידת יעילותם בכל אחת מהתוצאות. שתי יצירות נפרדות שפורסמו לאחרונה על ידי הצוות שלנו הם דוגמה טובה11,12, שבו גישות שונות כדי לגרום לאנגיוגנזה הטיפולית העריכו באמצעות אותו פרוטוקול אשר יתואר עם פרטים נוספים ב פרוטוקול.
המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לתאר מודל ניסיוני הניתן לחיקוי שיכול לחקות את ההשפעות של CLI ולהטיל את הבסיס הניסיוני להערכה מקיפה של ההשפעות תפקודית, היסטולוגית ומולקולרית של אנגיוגנטי. סוכנים.

<table><tbody><tr><td>7500 מהיר בזמן אמת PCR</td><td>יישומי ביו-סיסטמס</td><td></td><td>מכשיר</td></tr><tr><td>אצטון</td><td>מרק</td><td>1000141000</td><td>ריאגנט; זהירות -</td></tr><tr><td>ריאגנט</td><td>אדנוזין</td><td>ולדפארם</td><td></td></tr> דליק מאוד <tr><td>Atipamezole</td><td>OrionPharma</td><td></td><td>Reagent</td></tr><tr><td>Barium sulphate (Micropaque)</td><td>Guebert</td><td>8671404 (ref. Infarmed)</td><td>ריאגנט</td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td>ריכטרPharma</td><td></td><td>Reagent</td></tr><tr><td>Carl Zeiss Opmi-1 FC מיקרוסקופ כירורגי</td><td>קרל זייס, גרמניה</td><td></td><td>מכשיר</td></tr><tr><td>cDNA RT2 PreAMP cDNA ערכת סינתזה</td><td>Qiagen</td><td>7335730</td><td>Reagent</td></tr><tr><td>Cryostat Leica CM</td><td>Leica Microsystems</td><td>3050S</td><td></td></tr><tr><td>ערכת מצע DAB peroxidase</td><td>DAKO; Vector Laboratories</td><td>K3468</td><td>מגיב</td></tr><tr><td>מימן פרוקסידאז</td><td>Merk</td><td>1072090250</td><td>Reagent; זהירות -</td></tr><tr><td>עט הידרופובי</td> nocif <td>Dako</td><td>411121</td><td>Reagent; זהירות -</td></tr><tr><td>רעיל Ketamidor</td><td>Richterpharma</td><td>CN:580393,7 630/01/12 Dfvf</td><td>Reagent</td></tr><tr><td>לייזר דופלר זילוף הדמיה moorLDI2-HIR</td><td>MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, UK</td><td>5710</td><td>Instrument</td></tr><tr><td>Leica DM2500 מיקרוסקופ שדה בהיר זקוף</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>Instrument</td></tr><tr><td>Medetor</td><td>Virbac</td><td>037/01/07RFVPT</td><td>Reagent</td></tr><tr><td>מגיב מתנול</td><td>VWR</td><td>UN1230</td><td>; זהירות -</td></tr><tr><td>מגיב</td><td>פפאברין</td><td>לבספל</td><td></td></tr> רעיל ודליק מאוד <tr><td>Pentano Isso</td><td>Merk</td><td>1060561000</td><td>Reagent; זהירות - כוח דליק מאוד</td></tr><tr><td>SYBR&reg; Green</td><td>Applied Biosystems</td><td>4309155</td><td>מגיב</td></tr><tr><td>עכברוש מטוהר נגד עכבר CD31</td><td>Pharmingen</td><td>550274</td><td>Reagent</td></tr><tr><td>RNeasy Micro kit</td><td>Qiagen</td><td>74004</td><td>Reagent</td></tr><tr><td>Surgic-Pro 6.0</td><td>Medtronic (Coviden)</td> <td>VP733X</td><td>תפר</td></tr><tr><td>VECTASTAIN ABC HRP KIT (Peroxidase, Rat IgG)</td> <td>ערכת Vectastain ABC; Vector Laboratories</td><td>PK-4004</td><td>Reagent</td></tr><tr><td>Vicryl5.0 / Vicryl 6.0</td><td>Medtronic (Covidien)</td> <td>UL202 / UL101</td><td>תפר</td></tr><tr><td>Zeiss PALM MicroBeam מערכת מיקרודיסקציה לייזר</td><td>קרל זייס, גרמניה</td><td>מכשיר 1023290916</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ סטריאוטקסי</td><td>קרל זייס מיקרוסקופיה, גרמניה</td><td></td><td>מכשיר</td></tr><tr><td>מצלמה דיגיטלית</td><td>לינוקס</td><td></td><td>כלי</td></tr></tbody></table>

הערכת אנגיוגנזה תרפויטי במודל של מורטין של איסכמיה החוצה

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

איסכמיה גפה קריטית (CLI) היא מצב חמור הכרוך בסיכון גבוה לקטיעה בגפיים התחתונות. למרות revascularization להיות טיפול בתקן זהב, מספר ניכר של מטופלים CLI אינם מתאימים או ניתוחי וכירורגי או אנדוסקולריזציה. טיפולים מגנטיים מתפתחים כאופציה למטופלים אלה, אך כיום הם עדיין תחת חקירה. לפני היישום בבני אדם, הטיפולים האלה חייבים להיבדק במודלים של בעלי חיים והמנגנון שלו חייב להיות מובן בבירור. מודל בעל חיים של איסכמיה הגוף (HLI) פותחה על ידי החיבור וכריתה של עורקי הירך החיצוניים ואת הוורידים ורידים בעכברים. פאנל מקיף של מבחנים התאספו כדי להעריך את ההשפעות של הטיפול באיסכמיה ובטיפולים אנגיוגנטיים בתוך הפונקציונליות, היסטולוגית ורמות מולקולריות. לייזר דופלר שימש למדידת הזרימה והערכה פונקציונלית של perfusion. תגובת רקמות הוערך על ידי ניתוח של צפיפות נימי לאחר הצביעת עם הנוגדן anti-CD31 על סעיפים היסטולוגית של שריר השריר, ועל ידי מדידה של צפיפות כלי הקיבול הנלווה לאחר דיאפחונזציה. ביטוי של הגנים של אנגיוגנטית היה ככמת על ידי RT-PCR מיקוד גורמים מבוססי אנגיוגנטיים שנבחרו באופן בלעדי בתאי האנדותל (ECs) לאחר לכידת לייזר הניתוח של שרירי השרירים של העכבר. שיטות אלו היו רגישות בזיהוי הבדלים בין האיברים האיסכמי והלא-איסכמי ובין הגפיים הבלתי מטופלות. פרוטוקול זה מספק מודל מחודש של CLI ומסגרת לבדיקת טיפולים אנגיוגנטיים.

באמצעות הפרוטוקול המתואר, בתאי גזע הטבור מסנצ'יאל וקרינה מייננת במינון נמוך (ldir) נבדקו כטיפולים אנגיוגנטיים של החבל 11,12. לייזר דופלר זלוף קריאות הושגו לפני האינדוקציה איסכמיה ו ב מראש מוגדר נקודות זמן החל מיד לאחר אינדוקציה איסכמיה כדי 45 ימים post-איסכמיה. קריאות של רקמות העור על ידי דופלר לייזר נרשמו כתמונות מקודדות בצבע, ללא פרזיה שהוצגה ככחול כהה ורמת פרפיוז הגבוהה ביותר המוצגת כאדומה.  כפי שמוצג באיורים 2a ו...

כאן, המודל הניסיוני הטיפולי איסכמיה מוצג ואחריו סוללה של פונקציונלי, בדיקות היסטולוגית ומולקולרית כדי להעריך את האפקטיביות של טיפולים אנגיוגנטית.

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

המטרה הכוללת של ניסוי זה, מודל ה ischemia hindlimb שלנו היא להדליק את הניסוי בסיס להערכה מקיפה של ההשפעות התפקודיות, ההיסטולוגיות והמולקולריות של סוכנים אנגיוגניים putative. פרוטוקול זה שדות תקן לבדיקת טיפולים אנגיוגניים אפשריים במודל בעלי חיים קטנים עם פוטנציאל ליישומים עתידיים בהקשר הקליני. כמו revascularization אינו מתאים עשרים עד שלושים אחוזים של חולי איסכמיה קריטיים אנגיוגנזה טיפולית התפתחה כאסטרטגיה חדשנית לשיפור שפע הדם באתר איסכמי.פרוטוקול ניסיוני זה יכול לספק הבנה מקיפה של המנגנונים שבהם טיפולים אנגיוגניים להפעיל את השפעתם במידה של יעילותם בכל אחת מתוצאותיהם. לאחר שאישר חוסר תגובה לצביטת בוהן בעכבר שחור בן 22 שבועות C57 שש נקבה, לגלח את השיער מן hindlimb הימני ולהבטיח את החיה בדור כדי עמדת cubitus על כרית מחוממת. מניחים את החיה תחת מיקרוסקופ לנתח.ולהשתמש בלהב אזמל כירורגי מספר 11 כדי להפוך חתך עור סנטימטר אחד מעל הירך של hindlimb הימני. קהה לנתח את השומן התת עורי לחשוף את הצרור הנוירו-וסקולרי. ולהשתמש במטליות מחודדות, מספריים אביביים, ומחזיק מחט עיניים כדי לפתוח את נדן האילופרמורל הממברני כדי לחשוף את האיליאק החיצוני הדיסטלי וכלי הירך.לאחר ניתוח והפרדת העורק והווריד מהעצב, השתמשו בשבעה תפרי פוליפרופילן O שאינם ניתנים לניתוק כדי ללקט את עורק העובר והווריד הדיסטלי ואת עורק האיליאק החיצוני והווריד. זיהוי עורק האליגה החיצוני הדיסטלי והליגה והניתוס של האליג החיצוני הדיסטלי ועורק הירך והוורידים הם קריטיים להצלחת ההליך. השתמש במספריים האביב כדי לשנות את החלק של העורק iliofemoral וורידים בין הקשרים דיסטלי proximal.ולסגור את החתך עם תפר נספג. לאחר מכן, בין-צפי לספק פתרון antisedative לתוך החיה ולהחזיר את העכבר לכלוב הבית שלה עם ניטור עד החלמה מלאה. כדי לקצור את שרירי gastrocnemius, להסיר את העור משני hindlimbs.ולהשתמש ספוגית כותנה כדי להפריד את העור מן השרירים. מחזיק את גיד אכילס, להשתמש במספריים באביב כדי להפריד את השריר מן השוקה ואת השוקית עד מפרק הברך. ולהפריד את שרירי הירך מהשריר gastrocnemius.השתמש מספריים האביב לחתוך את ההכנסות של שריר gastrocnemius ברמת מפרק הברך. ולהשתמש 10% trigasanth למקם את השרירים שנקטפו בכיוון רוחבי על דיסק פקק קטן. לאחר מכן, הצמד להקפיא את הדגימות בחנקן נוזלי מקורר isopentane עבור מינוס 80 מעלות צלזיוס אחסון.עבור לכידת לייזר microdissection נימי, לאחר קבלת 12 חלקים מיקרומטר של דגימות השריר, לתקן את הרקמות לשקופיות ב 50 מיליליטר של אצטון טהור מקורר במשך חמש דקות במינוס עשרים מעלות צלזיוס. לאחר ייבוש האוויר ומקיף כל דגימה בעט הידרופובי. ולייבש מחדש את הדגימות עם שני נתרן כלורי טוחן ב- PBS בארבע מעלות צלזיוס.בסוף ההידרציה מחדש, סמן את הדגימות בנוגדן העיקרי המתאים לעניין בארבע מעלות צלזיוס במהלך הלילה. ואחריו שתי שלוש דקות שוטף טרי שני נתרן כלורי טוחן ב PBS לכל לשטוף. לאחר הכביסה השנייה, סמן את החלקים בנוגדן משני מתאים במשך שלושים דקות בארבע מעלות צלזיוס ואחריו שתי שטיפות בנתרן כלורי ב- PBS כפי שהוכח.לאחר מכן, סמן את הדגימות עם מתחם פרוקסידזה אצמוי אבידין במשך שלושים דקות בארבע מעלות צלזיוס. ואחריו שטיפה וחמש דקות של תיוג עם מצע peroxidase DAB. בסוף הדגירה, לייבש את הרקמות בקרח רציף קר 90% אתנול ו 100% אמרסי אתנול.לאחר מכן, השתמש במערכת microdissection מאוחר יותר, מצויד פולס למצב מוצק 355 לייזר ננומטר לנתח 10, 000 נימים לכל עכבר להזניק את נימי לנתח לתוך כובע דבק צינור microfuge. כפי שמודגם, אובדן מוחלט של תדלוק hindlimb נצפתה מיד לאחר אינדוקציה איסקימיה hindlimb. הערכה כמותית של זרימת הדם, שבאה לידי ביטוי כיחס בין ISC לאיבר NISC, הוכיחה חליטת דם גפיים משופרת באופן משמעותי בעכברים שנחשפו לגירוי הפרו-אנגיגני בימים 15 ו -45 לאחר HLI.כימות נימים חיוביים CD31 בחלקים היסטולוגיים של חלקי רקמת שריר gastrocnemius מראה כי צפיפות נימי גדול יותר באיבר איסכמי לעומת האיבר הלא איסכמי. כצפוי. אבל אפקט זה מוגבר עוד יותר לאחר הטיפול עם הסוכן pro-angiogenic.צפיפות כלי המשנה גם עולה באופן עקבי באיבר האיסכמי ועלייה זו גבוהה משמעותית לאחר החשיפה לגירוי הפרו-אנגיוגניים. ניתוח תגובת שרשרת פולימראז תעתיק הפוך של ביטוי גנים פרו-אנגיוגניים בתאי אנדותל חיוביים CD31 מדגים וריאציה ברורה בביטוי גנים בין עכברים שנחשפו או לא לסוכן הפרו-אנגיוגני. חשוב להשתמש במחט עיניים מבוגרת יותר כדי לפתוח את נדן iliofemoral קרום, כדי למנוע קריעת העורק והווריד במהלך ניתוח הכלי.הכלי מגיב איסכמיה hindlimb בהערכה בקלות על ידי מדידות זלוש מבוסס דופלר לייזר ואת כימות היסטולוגי של צפיפות כלי נימי מאפשר לנו להעריך את אנגיוגנזה.

assessing-therapeutic-angiogenesis-murine-model-hindlimb

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

ההליך הכירורגי לזירוז של איסכמיה hindlimb החד צדדית באה לידי ביטוי, עם אישור של איסכמיה על ידי הדמיה זלוף דופלר לייזר.

דגם Murine של איסכמיה Hindlimb

הרקמות מבוגר vascularized יונקים כי חסרה אנגיוגנזה פיזיולוגי שלא נחשף התערבות כירורגית משמש המחקר: (i) ייזום ופיתוח של אנגיוגנזה הבאים הממשל intraperitoneal של סוכני הבדיקה; (ii) שינוי של אנגיוגנזה הבאים מערכתית של הממשל נבחרת סוכני הבדיקה.

עכברוש mesentery Assay אנגיוגנזה

התחל עם חולדה הנתונה לחסימת עורק המוח האמצעי, הליך כירורגי החוסם זמנית את זרימת הדם לרקמת המוח.זה גורם לשבץ איסכמי, מה שמוביל לנזק לרקמת המוח.לאחר מכן, הסר את החסימה כדי להחזיר את זרימת הדם.בחר חולדות המציגות ליקויים נוירולוגיים כדי להבטיח רלוונטיות למחקר.לאחר מכן, יש לתת את תרופת הניסוי לקבוצת הניסוי תוך הזרקת מי מלח לקבוצה השנייה.חזור על מתן התרופה והמלח.תרופת הבדיקה מקדמת אנגיוגנזה, וכתוצאה מכך היווצרות כלי דם חדשים.זה משפר את אספקת הדם לרקמת המוח הפגועה ומפחית את השפעות השבץ.לאחר מכן,...

הערכת השפעות האנגיוגנזה של תרופת ניסוי במודל חולדה של שבץ איסכמי

אנחנו מדגימים את מודל רומן עורקי קשירה בשריר spinotrapezius עכברי, לרבות הליך צעד אחר צעד ותיאור של מכשור הנדרש. אנו מתארים את הניתוח ומדידות תוצאה רלוונטיות הנוגעות לשיפוץ כלי דם והרחבת כלי דם ברשת פונקציונלית באמצעות מיקרוסקופ intravital וconfocal.

דגם Spinotrapezius Murine כדי להעריך את ההשפעה של קשירת arteriolar על תפקוד כלי דם וRemodeling

משלוח סמים האוסמוטי לhindlimbs איסכמי וטפטוף של כלי דם עם Microfil למייקרו-טומוגרפיה ממוחשבת הדמיה

אנו מתארים את השיטה של ​​תאי גזע תכנות לביטוי יתר גורמים טיפוליים לאנגיוגנזה באמצעות חלקיקים פולימריים מתכלים. תהליכים שתוארו כוללים סינתזת פולימר, transfecting בתאי גזע שמקורם בשומן במבחנה, ומאמת את היעילות של תאי גזע מתוכנתים לקדם אנגיוגנזה במודל איסכמיה hindlimb עכברי.

תאי גזע תכנות טיפולי אנגיוגנזה שימוש אורגניים פולימריים חלקיקים

אינדוקציה כירורגית של איסכמיה של הגפיים האחוריות בעכבר שימושית לבחינת אנגיוגנזה, אולם זה נפגע בזני עכברים מסוימים המולדים המציגים נמק רקמות המושרה על ידי איסכמיה. מתוארות שיטות לגרימת איסכמיה תת-חריפה בגפיים באמצעות מכווצים אמרואידים כדי לעקוף בעיה זו באמצעות אינדוקציה של חסימת עורקים הדרגתית.

שיטות חריפה subacute Murine Hindlimb איסכמיה

ומונוציטים הם מתווכים חשובים של arteriogenesis בהקשר של מחלת עורקים היקפית. פרוטוקול זה באמצעות מטריקס קרום המרתף דמוי מיקרוסקופ intravital, חוקר אנגיוגנזה ביות ו הקשורות הגידול מונוציט לאחר ההזרקה מונוציט במודל מאתר מצדו בעורק הירך.

מיקרוסקופ intravital של יונת מונוציט, הקשורות הגידול אנגיוגנזה במודל מאתר של מחלת עורקים היקפית

אנו מתארים הליך כירורגי המשמש כדי לגרום איסכמיה היקפית בארנבים עם היפרליפידמיה וסוכרת. ניתוח זה משמש כמודל טרום קליני לתנאים המנוסים במחלות עורק היקפי בחולים. אנגיוגרפיה מתואר גם אמצעי כדי למדוד את היקף הוכנסו איסכמיה והתאוששות של perfusion.

המודל הקליני של איסכמיה הגפיים האחוריות בארנבים סוכרתית

מאמר זה מדגים גישה כירורגית יעילה ליצירת איסכמיה חריפה בעכברים עם חתך קטן. גישה זו יכולה להיות מיושמת על ידי רוב קבוצות המחקר ללא כל שדרוגי מעבדה.

מודל כירורגי מותאם של איסכמיה בגפיים אחוריות ב- ApoE-/- עכברים באמצעות חתך מיניאטורי

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל ייחודי ורלוונטי מבחינה קלינית של מחלת עורקים היקפית המשלב עורק הירך ואלקטרו-קרישת ורידים עם ניהול מעכב סינתאז תחמוצת החנקן כדי לגרום לנמק אחורי בעכברים FVB. זלוף תוך-לבבי DiI משמש לאחר מכן להדמיה תלת-ממדית ברזולוציה גבוהה של כלי הדם של משטח כף הרגל.

הדמיה תלת מימדית ברזולוציה גבוהה של כלי הדם של משטח כף הרגל במודל נמק הינדלימב מורין

חקור מודל איסכמיה בגפיים אחוריים בעכברים להערכת טיפולים אנגיוגניים. שיטה זו מאפשרת ניתוח תפקודי, היסטולוגי ומולקולרי של סוכני אנגיוגנזה לשיפור זרימת הדם ברקמות איסכמיות.

הערכת אנגיוגנזה תרפויטי במודל של מורטין של איסכמיה החוצה

גלה סרטונים נוספים