En kaninmodell av vandig-mangelfull tørrøyesykdom indusert av Concanavalin A Injection in the Lacrimal Glands: Søknad til legemiddeleffektstudier

Vår metode gir den manglende pålitelige dyremodellen av tørre øyne sykdom som kan være akutt eller kronisk takket være vår metode for å injisere alle lacrimal kjertler og gjenta injeksjoner. Denne teknikken leverer pålitelig Concanavalin A til dårligere lacrimalkjertel ved hjelp av ultralydveiledning til kjertlene av vidt variable størrelser og opp til overlegen lacrimalkjertel, noe som gjør denne metoden til en komplett tilnærming. Denne modellen gir en enkel, optimalisert, ikke-kirurgisk måte å indusere vandig-mangelfull tørre øyne sykdom.

Det er godt egnet til å studere legemiddeleffekt og sykdomsveiofysiologi. Identifisering av bakre incisure og bruk av ultralyd lokalisering kan være utfordrende i begynnelsen. Fjerning av all pelsen er avgjørende for å hjelpe til med ultralyd lokalisering for begge disse trinnene.

Å demonstrere prosedyren vil være Wei Huang, en utdannet student fra laboratoriet mitt. Etter å ha bekreftet mild sedasjon ved å observere en avslappet hodeposisjon med øreflippene ikke lenger helt oppreist, bruk en mikropipette til å bruke 25 mikroliter konserveringsmiddelfri lidokain til det første øyet og plasser et fleksibelt trådlokkspekulum mellom øyelokkene. Bruk 0,3 tang, ta tak i nictating membranen på toppen og utvide den over hornhinnen.

Bruk en 26 gauge skarp nål, injisere lidokain 1%med 1:100, 000th adrenalin subconjuctivally inn i bunnen av nictating membran. En moderat bleb bør dannes over membranen. Fjern deretter spekulumet og gjør en identisk injeksjon i venstre nictating membran.

Etter ca. fem minutter, plasser lokket spekulum tilbake i øyet og bruk 0,3 tang for å trekke tilbake nictating membranen på toppen. Bruk Westcott saks, kutt nictating membranen av ved basen og fjern spekulum. Legg deretter aktuell antibiotikasalve på øyet.

For palpebral porsjonering av overlegen lacrimal kjertel injeksjon, etter å ha bekreftet sedasjon, skjær av pelsen i pre-orbital og hodebunnen området og bruke hårfjerningskrem for å fjerne eventuelle gjenværende pels. Etter to minutter fjerner du kremen og påfør 25 mikroliter på 1% konserveringsmiddelfri lidokain til riktig øye. Evert øvre øyelokk og bruke mild medial trykk på bakre orbital rim til fremspringet merking palpebral delen av kjertelen er sett.

Ved hjelp av fintann tang og en tuberulinsprøyte utstyrt med en 27 gauge nål, direkte trenge kjertelen via en transconjunctival tilnærming fremme nålen to millimeter inn i vevet og injisere 100 mikroliter av en 500 mikrogram løsning av Concanavalin A eller Con A.Umiddelbart etter injeksjonen, bruke mediale trykk på kloden for å få orbital overlegen lacrimalkjertel å stikke ut fra bakre cisure. Ved hjelp av lukkede buede tang, innrykk området til benete åpningen i skallen er følt og bruke ytterligere beskjedent trykk med tang for å forlate en innrykk i huden for å tjene som landemerke for nålplassering. Sett inn en tuberulinsprøyte utstyrt med en 27 gauge nål vinkelrett på huden over innrykkmerket omtrent en kvart tomme inn i snittet og omdirigere nålen bakre og eksternt mot laterale canthus sikter mot midtpunktet mellom injeksjonsstedet og benete orbital rim.

Når nålens nav er nådd, sakte injisere 0,2 milliliter av en 1000 mikrogram løsning av Con A.For ILG injeksjon, se dyret fra siden for å finne prominensen av ILG langs den nedre fremre delen av banen. Bruk en kirurgisk merkepenn til å trekke en vertikal linje på huden der den overfladiske delen av ILG-kjertelen går over fra sitt overfladiske hvilested på det zygomatiske beinet til sin mer mediale plassering i banen. Fei en vertikalt holdt ultralydsonde over linjen på huden for å identifisere enden av det zygomatiske beinet.

ILG-overgangen skjer der bildet av kjertelen endres fra en omskrevet hyperechoisk linje til en uten en gjenkjennelig medial kant. Den relative posisjonen til håndstykket til linjen trukket på huden når denne endringen observeres, vil være injeksjonsstedet. For å plassere Con A i en kjertel på et punkt bare medial til zygomatisk bue bein, sett ønsket dybde av injeksjon som dybden av zygomatisk bein hyperechoic signal pluss en millimeter minus den kjente lengden på nålen.

Sett nålen ca 12 millimeter inn i kjertelen på injeksjonsstedet før langsomt trekkes tilbake til lengden på den eksponerte nålen utenfor kroppen er lik den beregnede forskjellen. Deretter injiserer du 0,2 milliliter av en 1000 mikrogram Con A-løsning og bekrefter injeksjonens suksess ved ultralyd. ILG bør vise et karakteristisk hyperekkosisk rom.

Con A injeksjoner indusere en sterk inflammatorisk respons i lacrimalkjertelen preget av et tett lymfatisk infiltrat som er ledsaget av en redusert tåreproduksjon. Tårelaktoferrinnivåer undertrykkes, noe som resulterer i en kompromittert hornhinne- og konjunktivepitelet og et økt rose bengalfarging. Injeksjonen av de tre orbitale LG-vevene gir en konsekvent og ensartet tørrøyesykdomstilstand.

Et enkelt sett med Con A injeksjoner produserer tørre øyne sykdom som varer ca en uke med alle de kliniske parametrene normalisering av dag 10. Sekvensielle Con A injeksjoner omtrent en uke fra hverandre forlenge varigheten av tørre øyne sykdom tilsvarende. Etter omtrent fem sett med injeksjoner blir tørrøyesykdomstilstanden ofte permanent uten behov for ytterligere injeksjoner.

Optimal lokalisering av lacrimal kjertelstrukturer er viktigst. Kjennskap til kranial anatomi og oppmerksomhet på fine detaljer, inkludert fjerning av pelsen sammen med dyktighet ved hjelp av ultralyd, forbedrer alle resultatene. Da denne enkle teknikken krever bruk av skarpe gjenstander, bør undersøkelsen ta riktige forholdsregler for å forhindre nålestikkskader.