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CRISPR/Cas9 dpy-10 Co-CRISPRスクリーニングマーカーと組み立てられたリボヌクレオプロテイン複合体を用いたC.エレガンスrbm-3.2遺伝子の編集。
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JoVE Journal Genetics
CRISPR/Cas9 Editing of the C. elegans rbm-3.2 Gene using the dpy-10 Co-CRISPR Screening Marker and Assembled Ribonucleoprotein Complexes.
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CRISPR/Cas9 dpy-10 Co-CRISPRスクリーニングマーカーと組み立てられたリボヌクレオプロテイン複合体を用いたC.エレガンスrbm-3.2遺伝子の編集。

DOI:
10.3791/62001-v

•

07:46 min

•

December 11, 2020

•

, , , ,
1Department of Chemistry and Biochemistry,The University of Tulsa

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:53C. elegans Gonad Preparation and Microinjection
  • 01:56Injected Worm Recovery and Transfer
  • 02:37PickingC. elegans for Screening
  • 03:17Single Worm Lysis and PCR
  • 04:22Restriction Digestion and Agarose Gel Electrophoresis
  • 05:08Identification of Positively Edited and Homozygous Edited Worms
  • 06:01Results: Representative C. elegans rbm-3.2 Gene Editing and Screening
  • 07:10Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

このプロトコルの目的は、組み立てられたリボヌクレオタンパク質複合体とスクリーニングのためのdpy-10コクリスピーマーカーを使用して、C.エレガンスゲノムのシームレスなCRISPR / Cas9編集を可能にすることです。このプロトコルは、挿入、欠失、遺伝子置換およびコドン置換を含むC.エレガンスにおける様々な遺伝子改変を行うために使用することができる。

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Keywords: CRISPR/Cas9C. ElegansRbm-3.2 GeneDpy-10 Co-CRISPRRibonucleoprotein ComplexesGenome EditingMicroinjectionRoller PhenotypeDumpy Phenotype

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