Medicine
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Een muismodel voor chronische pancreatitis via galweg TNBS-infusie
Chapters
Summary February 28th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Chronische pancreatitis (CP) is een ziekte die wordt gekenmerkt door ontsteking en fibrose van de alvleesklier, vaak geassocieerd met hardnekkige buikpijn. Dit artikel richt zich op het verfijnen van de techniek om een muismodel van CP te genereren via galweginfusie met 2,4,6 -trinitrobenzeensulfonzuur (TNBS).
Transcript
Chronische pancreatitis is een complexe ziekte waarbij alvleesklierontsteking, fibrose, buikpijn en andere symptomen betrokken zijn. Het galweg TNBS-infusiemodel repliceert de neuropathische pijn die wordt waargenomen bij chronische pancreatitispatiënten. Dit galkanaal TNBS-infusieprotocol is geoptimaliseerd om de generatie van een chronisch pancreatitismodel bij muizen te induceren.
Omdat galwegmedicijnfusie bij muizen technisch uitdagend is, zal de visualisatie ervan nuttig zijn voor onderzoekers die nieuw zijn in de methode. Gebruik voor en twee en drie weken na de operatie Von Frey monofilamenten om verschillende niveaus van kracht in oplopende volgorde toe te passen op de bovenste buikstreek van een acht tot 10 weken oude, C57 zwarte zes muis, 10 keer gedurende één tot twee seconden per toepassing. Overweeg het verhogen van het terugtrekken of likken van de buik als een positieve reactie.
Laad vervolgens een insulinespuit uitgerust met een naald van 31 gauge met 50 microliter van een vers bereide 0,75 procent TNBS-oplossing. Laad een tweede spuit met 50 microliter 10 procent ethanol in zoutoplossing als voertuigcontrole en plaats beide spuiten op ijs beschermd tegen licht. Na het bevestigen van een gebrek aan reactie op pedaalreflex, verwijdert u het haar uit de buikstreek van de verdoofde muis door te scheren of ontharingscrème aan te brengen en plaatst u de muis op een verwarmde chirurgische pad onder een ontleedmicroscoop.
Breng veterinaire zalf aan op elk oog en desinfecteer de operatieplaats met drie opeenvolgende twee procent jodium en drie 70 procent ethanoldoekjes gebruik een microschaar om een incisie van 0,5 tot één centimeter in één continue beweging te maken en gebruik wattenstaafjes om de twaalfvingerige darm voorzichtig bloot te leggen en de gemeenschappelijke galgang te lokaliseren. Om de stroom van de behandeling in de lever en galblaas te voorkomen, gebruikt u de microscoop om een rechte micro-hemoclip over het proximale gemeenschappelijke kanaal te plaatsen en steekt u de naald van de TNBS-geladen spuit door de papilla van vater in het pancreaskanaal. Gebruik een gebogen microhemoclip om de naald vast te zetten en injecteer de oplossing in de loop van één minuut in het pancreaskanaal.
Wanneer alle oplossing is geleverd, verwijdert u voorzichtig de microklemmen en bevestigt u dat de twaalfvingerige darm is teruggekeerd naar de oorspronkelijke positie. Voeg vóór het sluiten van de buikholte 500 microliter van 36 tot 37 graden Celsius steriele zoutoplossing toe om de twaalfvingerige darm te helpen terugkeren naar zijn oorspronkelijke positie en om te helpen bij het herstel van peristaltiek. Gebruik een continue hechting met een vijf-O-steek om de incisie in de spierlaag te sluiten en sluit de huid met behulp van een onderbroken hechting met een vier-O-steek.
Plaats de muis vervolgens in een herstelkooi op een verwarmingskussen met bewaking tot volledige ligtijd. Controleer de gezondheid en het gedrag van de muis dagelijks tijdens de eerste week na de operatie op tekenen van nood, zoals vocaliseren, een gebogen rughouding of het verminderen van de voortbeweging en meet het lichaamsgewicht om de andere dag. Zoals waargenomen, resulteert de injectie van 50 microliter inkt zoals aangetoond in de infiltratie van de gehele pancreas, waardoor de inductie van een homogener ziektefenotype mogelijk is.
In deze representatieve analyse verloren de muizen in de eerste drie dagen na de operatie ongeveer zes procent van hun oorspronkelijke lichaamsgewicht voordat ze geleidelijk herstelden en op dag 21 meer dan 100% van hun oorspronkelijke lichaamsgewicht kregen. Muizen die TNBS kregen, verloren daarentegen ongeveer 15 procent van hun oorspronkelijke lichaamsgewicht tijdens de eerste vijf dagen na de operatie en herwonnen iets minder dan 100 procent van hun oorspronkelijke lichaamsgewicht op dag 21. Vergeleken met controlemuizen vertoonden de TNBS-geïnjecteerde dieren een verhoogde abdominale mechanische overgevoeligheid tijdens de tweede en derde week na de operatie.
De grootte en het gewicht per lichaamsgewicht van de alvleesklieren waren significant verminderd bij TNBS-muizen in vergelijking met alvleesklieren geoogst van controledieren, wat wijst op een duidelijke pancreasatrofie bij met TNBS behandelde dieren in overeenstemming met de bevindingen bij mensen met ernstige en langdurige chronische pancreatitis. Histologische analyse van pancreasweefselsecties van met controle-ethanol behandelde muizen toonde een normale morfologie, terwijl weefselsecties van met TNBS behandelde muizen een leeg besef vertoonden met een enorm verlies van acinaire cellen die werden vervangen door vetcelinfiltratie en fibrose. Voorkomen dat de geïnjecteerde TNBS de galblaas en de darm binnendringt, is belangrijk omdat een TNBS weefselbeschadigende effecten heeft.
Houd tijdens de infusie de hand zo stabiel mogelijk om te voorkomen dat die galweg punctie inwerkt. Naast het induceren van chronische pancreatitis ontwikkeling, kan deze galweginfusie muizen kunst worden gebruikt voor de ontwikkeling van de andere pancreasziekte modellen. Dit TNBS chronische pancreatitis muismodel kan worden gebruikt om zowel de pathogenese als de behandeling van chronische pancreatitis en andere pancreasziekten te bestuderen.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
