Name: Hémorragie pontine massive par double injection de sang autologue (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-29T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: Découvrez un protocole d'injection stéréotaxique de sang autologue pour établir un modèle d'hémorragie pontine massive chez le rat. Cette méthode reproductible permet d'étudier les déficits neurologiques et les changements pathophysiologiques.

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Cette étude a été soutenue financièrement par la National Science Foundation of China (81471181 et 81870933) et le programme d’ouverture de l’Université médicale de Guangzhou (0506308) à Y Jiang, et par la National Science Foundation of China (81701471) et le programme scientifique de la Commission municipale de la santé de Guangzhou (20191A011083) à Z Qiu, et par la National Science Foundation of China (81501009) à L Wu.

<ol><li>Charidimou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+hemorrhage+recurrence%2C+small+vessel+disease+type%2C+and+cerebral+microbleeds%3A+A+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis.</a> Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).</li>
<li>Tao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+brainstem+hemorrhage+model+by+autologous+blood+infusion+in+Rat%3A+White+Matter+Injury%2C+Magnetic+Resonance+Imaging%2C+and+Neurobehavioral+features%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).</li>
<li>Ichimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+treatment+for+primary+brainstem+hemorrhage+to+improve+postoperative+functional+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes.</a> World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).</li>
<li>Behrouz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+factors+in+pontine+haemorrhage%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22European+Stroke+Journal%22%5BJournal%5D)">Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review.</a> European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).</li>
<li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brainstem+iron+overload+and+injury+in+a+rat+model+of+brainstem+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956(2020).</li>
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<li>Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+pontine+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurochirurgica+Supplement%22%5BJournal%5D)">A rat model of pontine hemorrhage.</a> Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).</li>
<li>Lekic, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+hematoma+consequences%2C+neurobehavioral+profiles%2C+and+histopathology+in+a+rat+model+of+pontine+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage.</a> Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).</li>
<li>Shrestha, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+brainstem+hemorrhage+model%3A+Key+points+to+success+in+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling.</a> World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).</li>
<li>Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+acute+pontine+infarction+in+rats+by+electrical+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).</li>
<li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keep+warm+and+get+success%3A+The+role+of+postischemic+temperature+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model.</a> Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).</li>
</ol>

Pas de conflits d’intérêts.

Dans la présente étude, nous avons fourni un protocole pour générer un modèle massif de rat d’hémorragie de pontine. Ce modèle peut être utilisé pour la recherche sur le mécanisme physiopathologique et le pronostic de l’hémorragie pontine massive.
Tout au long de l’expérience, 25 rats ont été utilisés, dont un seul est mort. La vérification de MRI, d’anatomie brute, et de la souillure IL a indiqué que cette méthode a eu un taux de mortalité très bas et un taux de réussite élevé. Pour établir l...

L’hémorragie intracérébrale représente un cinquième des patients ayant subi un AVC. Le pronostic de l’hémorragie intracérébrale dépend de la vitesse, du volume et de l’emplacement du saignement1,2. Par rapport à l’hémorragie du cerveau avant, l’hémorragie du tronc cérébral a une mortalité et une morbidité plus élevées3. Environ 40% de l’hémorragie du tronc cérébral se produit dans le pont4. L’étiologie et la physiopathologie de l’hémorragie pontine sont assez différentes et moins étudiées que l’hémorragie du cerveau avant5.
Il existe deux types de modèles animaux d’hémorragie pontine. L’un est le modèle d’hémorragie spontanée induite par infusion de collagénase bactérienne dans le pont6,7,8. Le plus grand avantage de ce modèle est que le saignement est spontané. Cependant, la collagénase ne peut induire qu’un petit volume d’hémorragie pontine. En outre, la collagénase pourrait causer d’autres blessures au cerveau. L’autre modèle est induit par injection stéréotaxique de sang autologue dans le pont9. L’avantage de ce modèle est qu’il est facile à maîtriser avec un taux de réussite élevé. Théoriquement, les chercheurs pourraient injecter n’importe quel volume de sang dans n’importe quel endroit du pont. Cependant, en raison de la fuite arrière par la voie de l’aiguille, le volume injecté est limité. Récemment, la méthode de double injection a été promue pour réduire la fuite arrière9. Cette méthode injecte du sang autologue deux fois avec un intervalle de 20 minutes entre les injections. La méthode à double injection est appliquée pour provoquer une hémorragie légère (30 μL) et modérée (60 μL) des pontines, mais pas une hémorragie pontine massive. En clinique, la majorité des patients atteints d’hémorragie pontine au pronostic sombre ont une hémorragie massive (plus de 10 ml).
Dans l’étude précédente, nous avons fourni un protocole pour établir un modèle d’AVC ischémique pontin chez le rat10. Dans cette étude, nous modifions la méthode existante de double injection et fournissons un protocole détaillé pour induire une hémorragie pontine massive chez un rat par double injection de sang autologue de 100 μL à deux endroits différents dans le pont.

<table><tbody><tr><td>100ml Solution saline</td><td>Guangdong yixiang</td><td>191222201 C1</td><td>Préparation du diluant à l’héparine</td></tr><tr><td>100&mu ; l Micro-injecteur</td><td>Shanghai Gaoge</td><td></td><td>Injection de sang autologue</td></tr><tr><td>1ml Seringue</td><td>Jiangsu Zhiyu</td><td>20191014</td><td>Retirer le sang autologue de la veine de la queue</td></tr><tr><td>75 % Alcool</td><td>Shandong Lierkang</td><td></td><td>Désinfection de la queue de rat</td></tr><tr><td>Ruban adhésif</td><td>Shanghai Jinzhong</td><td></td><td>Surgicl instruments</td></tr> Système <tr><td>d’anesthésie animale</td><td>RWD</td><td>R510-31S-6</td><td>Induction et maintien de l’anesthésie</td></tr><tr><td>Poutre d’équilibre</td><td>Jiangsu Saiangsi</td><td></td><td>Pour les scores de déficit neurologique</td></tr><tr><td>Lames Shanghai</td><td>Feiying</td><td>74-C</td><td>Pour l’anatomie macroscopique</td></tr><tr><td>Ciment osseux</td><td>Shanghai Xinshiji</td><td>20180306</td><td>Instruments surgicliques</td></tr><tr><td>Réservoir cérébral</td><td>Shenzhen LEIYEA Pour l’anatomie</td><td></td><td>macroscopique</td></tr><tr><td>Butorphanol tartrate</td><td>Jiangsu Hengrui</td><td></td><td>Pour la gestion de la douleur</td></tr><tr><td>Foret crânien électrique</td><td>Nanjing&nbsp ; Darwin biotechnologie</td><td>20180090018</td><td>Faire un trou de bavure sur le crâne</td></tr><tr><td>Tube EP</td><td>Nantong Surui</td><td></td><td>Transfert de sang autologue</td></tr><tr><td>Crème pour les yeux à l’érythromycine</td><td>Pharmacie</td><td></td> du Yunnan <td>Protection des yeux</td></tr><tr><td>Liqueur de colorant HE</td><td>Solarbio</td><td>G1120</td><td>Pour la coloration</td></tr><tr><td>HE Chauffage&nbsp ; pad</td><td>Dangerous Jungle</td><td>JR01</td><td>Rester au chaud</td></tr><tr><td>Injection d’héparine sodique</td><td>Chengdu Haitong Pharmacal Company</td><td>190701</td><td>Préparation du diluant à l’héparine</td></tr><tr><td>IndoPhors</td><td>Guoyao de Chine</td><td></td><td>Stérilisation</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD</td><td>20080701</td><td>Induction et maintien de l’anesthésie</td></tr><tr><td>Boîte sombre claire</td><td>Jiangsu Saiangsi</td><td></td><td>Pour scores de déficit neurologique</td></tr><tr><td>Pompe à micro-injection</td><td>Baoding Leifu</td><td>TFD03-01-C</td><td>Injection d’un système d’IRM de sang autologue</td></tr><tr><td></td><td>Philips</td><td></td><td>Confirmation de l’infarctus in vivo</td></tr><tr><td>Porte-aiguille</td><td>Shanghai Jinzhong J32020</td><td></td><td>Instruments surgicl</td></tr><tr><td>Pénicilline</td><td>Guoyao de Chine</td><td></td><td>Prévention des infections</td></tr><tr><td>Q-tips</td><td>Jiangxi Songhe</td><td></td><td>Instruments surgicl</td></tr><tr><td>Scalp heedle</td><td>Jiangxi Hongda</td><td>20200313</td><td>Retirer le sang autologue de la veine de la queue</td></tr><tr><td>Scalpel</td><td>Shanghai Kaiyuan</td><td>170902</td><td>Instruments surgicl</td></tr><tr><td>Ciseaux de cisaillement</td><td>Shanghai Jinzhong</td><td>Y00040</td><td>Instruments surgicl</td></tr><tr><td>Appareil stéréotaxique</td><td>RWD</td><td>900-00001-00</td><td>pour chirurgie positionnement</td></tr><tr><td>Serviette chirurgicale</td><td>Xinxiang Huakangweicai</td><td>20070601</td><td>Instruments surgicl</td></tr><tr><td>Aiguille de suture</td><td>Shanghai Jinzhong</td><td></td><td>Instruments surgicl</td></tr><tr><td>Ciseaux de suture</td><td>Shanghai Jinzhong J25041</td><td></td><td>Instruments surgicls</td></tr><tr><td>Forcepts de maintien des tissus</td><td>Shanghai Jinzhong J31080</td><td></td><td>Instruments surgicl</td></tr></tbody></table>

hémorragie pontine massive par double injection de sang autologue

Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood

Nous fournissons un protocole pour établir un modèle massif d’hémorragie pontine chez un rat. Des rats pesant environ 250 grammes ont été utilisés dans cette étude. Cent microlitres de sang autologous ont été pris de la veine de queue et stereotaxically injectés dans le pont. Le processus d’injection a été divisé en 2 étapes: Premièrement, 10 μL de sang ont été injectés dans un endroit spécifique, en position antéropostérieure (AP) -9,0 mm; latéral (Lat) 0 mm; vertical (Vert) -9,2 mm, suivi d’une deuxième injection du sang résiduel situé à AP -9,0 mm; Lat 0 mm; Vert -9,0 mm avec un intervalle de 20 minutes. L’essai de faisceau d’équilibre, l’essai de placement de membre, et le neuroscore modifié de Voestch ont été utilisés pour évaluer la fonction neurologique. La formation image de résonance magnétique (MRI) a été employée pour évaluer le volume de l’hémorragie in vivo. Les symptômes de ce modèle étaient en ligne avec des patients présentant l’hémorragie massive de pontine.

Au total, 25 animaux ont été utilisés, 3 pour des injections de sang de contrôle, 6 pour 30 μL, 6 pour 60 μL et 10 pour des injections sanguines de 100 μL. Un rat qui a reçu une injection de sang autologue de 100 μL (1/10) est décédé dans les 24 heures suivant la chirurgie.
Des tests comportementaux ont été effectués le jour 1, le jour 3, le jour 7 et le jour 14 après chirurgie. Les scores pour le groupe témoin et les groupes d’...

Nous présentons un protocole pour établir un modèle massif d’hémorragie de pontine chez un rat par l’intermédiaire de la double injection du sang autologous.

Hémorragie pontine massive par double injection de sang autologue

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred ...

Nous fournissons un protocole pour établir l’hémorragie massive de pontine chez un rat. Ce modèle est facile à établir, reproductible et très réussi. L’injection distillée de la méthode autologue de rat pourrait être employée pour faire l’hémorragie dans n’importe laquelle des régions de cerveau.Les personnes qui veulent essayer ces techniques devraient apprendre à utiliser un cadre stéréotaxique et se familiariser avec l’anatomie des pontines. Commencez par placer un rideau chirurgical sur la souris. Faites une incision avec un scalpel le long de la ligne médiane marquée.Utilisez un coton-tige pour enlever tout sang potentiel. Placez ensuite un morceau de pince de chaque côté du lambeau du cuir chevelu pour exposer le crâne. Trempez un coton-tige dans une solution saline à 0,9 % et retirez délicatement les tissus conjonctifs de l’os du crâne.Utilisez un stylet pour marquer le point central du bregma comme point d’origine. Effectuez une craniotomie à l’aide d’une micro perceuse, en procédant prudemment. Lorsque vous avez terminé, retirez la micro perceuse du cadre stéréotaxique.Mettez une seringue Hamilton de 100 microlitres dans le support stéréotaxique. Allumez l’interrupteur de

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Le modèle d'injection de sang autologue d'hémorragie intracérébrale chez la souris décrites dans ce protocole utilise la technique de double injection pour minimiser le risque de reflux du sang jusqu'à la piste d'aiguille, pas d'anticoagulants dans le système de pompage, et élimine tous les espaces morts et tuyaux extensibles dans le système.

Injection de sang autologue au modèle spontané Hémorragie intracérébrale chez la souris

Modèles animaux cliniquement pertinentes de l'hémorragie intracérébrale (HIC) sont nécessaires pour étendre notre connaissance des accidents vasculaires cérébraux hémorragiques et d'examiner de nouvelles stratégies thérapeutiques. Dans cette étude, nous décrivons et évaluons deux modèles ICH qui mettent en œuvre des injections unilatérales soit du sang total autologue ou la collagénase bactérienne dans les noyaux gris centraux (corpus striatum) de souris.

Hémorragie intracérébrale chez la souris Modélisation: L&#39;injection de sang autologue ou collagénase bactérienne

Cette vidéo montre la procédure d’établissement d’un modèle de rat d’hémorragie sous-arachnoïdienne. Un rat anesthésié est implanté avec des sondes pour mesurer la pression intracrânienne et le débit sanguin cérébral. Le site cible est identifié et l’aiguille est insérée dans une position pré-chiasmatique. Le sang autologue est ensuite injecté dans l’espace sous-arachnoïdien, augmentant la pression intracrânienne et diminuant le flux sanguin cérébral, établissant ainsi le modèle.

Etablissement d’un modèle de rat d’hémorragie sous-arachnoïdienne induite par injection sanguine autologue

Source : Tang, X. et. al., Hémorragie pontique massive par double injection de sang autologues. J. Vis. Exp. (2021)Ce protocole décrit l’infusion contrôlée de sang autologue dans la région pontique du cerveau d’un rat pour modéliser une hémorragie pontique massive. Le but est de simuler une hémorragie cérébrale localisée en augmentant la pression localisée.

Induction d’une hémorragie pontique massive dans un modèle de rat par injection sanguine autologue

Des modèles précliniques d’hémorragie intracérébrale sont utilisés pour imiter certains aspects de la maladie clinique. Ainsi, les mécanismes de lésion et les stratégies thérapeutiques potentielles peuvent être explorés. Dans ce protocole, deux modèles d’hémorragie intracérébrale sont décrits, les injections intrastriatales (ganglions de la base) de sang autologue ou de collagénase.

Injection intrastriatale de sang autologue ou Clostridium collagénase comme modèles murins de Hémorragie intracérébrale

Le modèle expérimental d’hémorragie sous-arachnoïdienne (HSA) par dérivation sanguine contrôlée par pression intracrânienne chez le lapin combine les procédures standard - canulation de l’artère sous-clavière et ponction transcutanée de la citerne magna, ce qui permet d’imiter étroitement les conditions physiopathologiques humaines après une HSA. Nous présentons des instructions étape par étape et discutons des points chirurgicaux clés pour une création expérimentale réussie de l’HSA.

Le lapin de sang-shunt modèle pour l&#39;étude de aiguë et les séquelles tardives de hémorragie méningée: Aspects techniques

Nous avons décrit dans ce protocole un modèle normalisé d’hémorragie sous-rachnoïde (SAH) de souris par une double injection de sang entier autologue dans la magna de cisterna. Le degré élevé de normalisation de la procédure de double injection représente un modèle moyen à aigu de SAH avec une sécurité relative en ce qui concerne la mortalité.

Double injection directe de sang dans la Cisterna Magna comme modèle d’hémorragie subarachnoïde

L’hémorragie sous-arachnoïdienne continue de porter un lourd fardeau de mortalité et de morbidité chez l’homme. Pour faciliter la poursuite des recherches sur la maladie et sa physiopathologie, un modèle pré-chiasmatique à injection unique est présenté.

Injection unique pré-chiasmatique de sang autologue pour induire une hémorragie sous-arachnoïdienne expérimentale chez un rat

L'activité dans les systèmes neuronaux nécessite souvent des décharges action synchrone potentiels de neurones dans une population spécifique. Par exemple, des impulsions de la gonadolibérine (GnRH) nécessitera probablement une activité coordonnée entre les neurones à GnRH. Nous présentons notre approche méthodologique pour l'obtention simultanée de manière fiable des enregistrements électrophysiologiques des neurones GnRH diffusément réparti.

Double Recordings somatiques de la gonadolibérine (GnRH) neurones identifiés par Green Fluorescent Protein (GFP) en tranches hypothalamiques

Ce protocole décrit une méthode non virale de la livraison des constructions génétiques à une certaine zone du cerveau de rongeur vivant. La méthode consiste à la préparation de plasmides, de fabrication micropipette, la chirurgie néonatale chez le rat nouveau-nés, la microinjection de la construction,...

Livraison de gènes au cerveau de rat postnatal par des non-ventriculaire injection Plasmide et électroporation

Découvrez un protocole d'injection stéréotaxique de sang autologue pour établir un modèle d'hémorragie pontine massive chez le rat. Cette méthode reproductible permet d'étudier les déficits neurologiques et les changements pathophysiologiques.

Hémorragie pontine massive par double injection de sang autologue

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