Immunology and Infection
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호흡기 멜리오이드증 동안 폐 기능을 특성화하기 위해 단순화 된 전신 혈량 검사
Chapters
Summary February 24th, 2023
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이 프로토콜은 세균성 호흡기 질환 진행을 비 침습적으로 모니터링하기 위해 단순화 된 전신 혈량 검사 장치의 구성 및 사용을 제시합니다.
Transcript
단순화 된 전신 혈량 측정법을 사용하면 연구 동물의 폐 기능과 질병 진행 사이의 관계를 밝히는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 억제되지 않은 동물로부터 호흡기 데이터를 수집 할 수 있다는 것입니다. 8핀 DIN 커넥터를 사용하여 샘플링 챔버를 브리지 증폭기에 연결하고 브리지 증폭기를 데이터 수집 장치에 연결하여 시스템 설정을 시작합니다.
데이터 수집 디바이스를 전원 공급 장치와 생리학적 데이터 분석 소프트웨어가 있는 컴퓨터에 연결합니다. 연결되면 소프트웨어를 시작하여 데이터 수집 시스템과 인터페이스합니다. 소프트웨어에서 선택적 폐활량 측정 모듈을 다운로드하고 폐활량 측정 탭으로 이동하여 설정 창에서 기본 단위 설정을 초당 리터에서 마이크로리터/초로 수정합니다.
시스템 보정을 위해 소프트웨어 내에 4채널 창을 만듭니다. 채널 1에서 소스 데이터를 초당 4, 000 데이터 포인트 샘플 속도와 1 밀리볼트 범위로 설정하십시오. 채널 2는 고역 통과, 1 헤르츠, 자동 조정 필터를 사용하는 채널 1의 디지털 필터입니다.
채널 2 데이터의 평활화 탭에서 100개 샘플의 평균을 구하여 채널 3을 만듭니다. 그리고 채널 3 데이터의 폐활량 측정 흐름에서 채널 4를 만듭니다. 다음으로, 3개의 열이 있는 채널 4의 데이터 패드 분석을 설정합니다.
1열의 경우 채널 4 데이터 및 주석으로 이동하여 전체 주석 텍스트에 액세스합니다. 그런 다음 열 2와 채널 4 데이터 및 순환 측정을 설정하여 평균 순환 빈도를 선택합니다. 열 3 및 채널 4 데이터의 경우 순환 측정값과 평균 순환 높이를 선택합니다. 차트 표시의 오른쪽 하단 모서리에서 프레임 속도를 100 대 1로 설정하고 창 구성을 향후 연구를 위해 템플릿으로 저장합니다.
완료되면 샘플 챔버 뚜껑을 닫고 25마이크로리터 기밀 주사기를 루어 벌크헤드 커넥터에 부착합니다. 그런 다음 주사기에 Chaney 어댑터를 장착하여 Chaney 어댑터의 깊이 스톱을 사용하여 주사기에 20마이크로리터의 공기를 끌어들입니다. 그런 다음 소프트웨어에서 pleth를 0으로 설정하려면 설정 탭에 액세스하고 녹음을 시작하기 전에 모든 입력 0을 선택합니다.
기록하는 동안 기준선이 안정화될 때까지 기다린 다음 주사기 플런저를 빠르게 누르고 10회 반복하여 측정된 20마이크로리터 호흡으로 피사체 호흡을 복제합니다. 완료되면 번호가 매겨진 pleth 기록의 시작을 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하여 기록을 중지하고 주석 추가를 클릭하여 측정된 샘플의 ID에 레이블을 지정합니다. 주사기를 재설정하고 입력을 영점으로 설정하고 20마이크로리터 펄스의 기록 측정을 두 번 반복합니다.
세 번의 기록 세션에서 모든 측정을 완료한 후 컴퓨터 마우스를 사용하여 인공 20마이크로리터 호흡을 정확하게 나타내는 호흡 플레스의 일부를 선택합니다. 다음으로, 평균 주기 높이에 대한 열 3 데이터를 검토하고 3개의 기록에서 측정된 평균 호흡량을 계산합니다. 앞에서 설명한 대로 설명된 대로 마스터 템플릿을 엽니다.
다음으로, 의식이 있는 4-12주, 암컷 흰둥이 C57 블랙 6J 마우스를 샘플링 챔버에 넣고 뚜껑을 잠급니다. 루어 격벽 캡을 잠시 풀어 챔버의 대기압을 균등화하고 캡을 다시 조입니다. 모든 입력을 제로화하고 녹음을 시작하기 전에 피사체가 샘플링 챔버 내에서 활발하게 움직이지 않는지 관찰하십시오.
번호가 매겨진 pleth 기록의 시작 부분을 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 주석 추가를 클릭하여 주제의 ID에 레이블을 지정합니다. 그런 다음 마우스를 케이지로 되돌립니다. 피사체 호흡을 정확하게 나타내는 호흡 횟수의 일부를 선택합니다.
데이터 패드 모듈에서 데이터는 미리보기 헤더에 나타나 호흡률과 호흡량을 일시적으로 판독합니다. 데이터 미리보기는 데이터 패드에 추가 아이콘을 사용하여 데이터 패드에 기록할 수 있습니다. 피험자 마우스에 대한 파라미터를 한 번에 하나씩 계속 측정하고 호흡의 대표적인 부분을 데이터 패드에 기록합니다.
데이터 기록 후 데이터 패드 데이터를 Excel로 내보내고 분 볼륨을 계산합니다. 전신 혈량 측정의 임상 사용에서, 피험자 자신의 체온 및 환경 온도 및 습도는 복잡한 호흡 계산에 영향을 미친다. 이 연구에서 단순화 된 전신 혈량 검사 또는 SWBP 접근법은 환경 온도 및 습도 변화를 제어하며 숙주 자체의 온도 및 습도에 대한 기여가 20 마이크로 리터 교정 볼륨의 호흡 측정 정확도에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 관찰되었습니다.
흡입 마취제가 마우스의 호흡에 미치는 영향을 조사했습니다. 마취 전의 기준선 호흡과 마우스가 마취로부터 회복되는 동안의 호흡이 여기에 도시되어 있다. 바람직한 마취제를 사용한 치료는 마우스가 큰 일회 호흡량의 공기와 함께 느린 호흡 속도를 나타내도록 했습니다.
마우스가 진정에서 회복됨에 따라 호흡 속도가 증가하고 호흡량이 점차 감소했습니다. 유사하게, 호흡률은 기준선 호흡이 마취로부터 제거된 후 2 내지 2.5분으로 회복될 때까지 꾸준히 증가하였다. 분 부피는 마취에서 제거한 후 2.5 분까지 기준선 분 부피에 도달하는 호흡수의 효과를 밀접하게 따랐습니다.
호흡 멜리오이드증 감염 동안의 호흡 변화를 숙주 마우스에서 모니터링하였다. 생쥐의 호흡수와 총 흡기 공기는 감염 첫날 동안 급격히 감소했으며 나머지 질병 과정 동안 낮게 유지되었습니다. 대조적으로, 호흡량은 처음 24 시간 동안 가파르게 떨어지지 않고 대신 질병의 3 일 과정까지 꾸준히 감소합니다.
이러한 데이터는 호흡량이 마우스의 호흡기 질환 중증도에 대한 생체 판독값을 제공할 수 있음을 시사합니다. 이 절차를 시도하는 동안 기억해야 할 가장 중요한 것은 녹음을 시작하기 전에 마우스가 움직이지 않을 때까지 기다리는 것입니다. 때로는 호기심 많은 마우스가 샘플링 챔버를 탐색하는 동안 인내심을 가져야합니다.
이 기술은 박테리아 돌연변이가 변경된 질병 과정에서 숙주 폐 기능에 어떻게 다른 영향을 미치는지, 그리고 치료 적 개입이 감염된 마우스에서 정상적인 폐 기능의 회복을 가속화 할 수있는 방법을 탐구 할 수있는 길을 열어 줄 것입니다.
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