In vitro Différenciation des cellules dendritiques humaines et de leurs marqueurs dans l’infection à Leishmania

Résumé

Les cellules dendritiques (CD) sont des composants essentiels de l’immunité innée contre l’infection à Leishmania. Les mécanismes sous-jacents à l’interaction complexe entre les DC et Leishmania restent mal compris. Ici, nous décrivons des méthodes pour évaluer comment l’infection à Leishmania affecte la fonction immunobiologique des CD humains, telles que l’expression des molécules liées à la migration et costimulatrices.

Résumé

La leishmaniose comprend un ensemble de manifestations cliniques associées à l’infection de protozoaires intracellulaires obligatoires, la leishmaniose. Le cycle de vie des parasites Leishmania se compose de deux stades de vie alternés (amastigotes et promastigotes), au cours desquels les parasites résident soit chez des arthropodes vecteurs, soit chez des hôtes vertébrés, respectivement. Notamment, les interactions complexes entre les parasites Leishmania et plusieurs cellules du système immunitaire influencent largement l’issue de l’infection. Il est important de noter que, bien que les macrophages soient connus pour être la principale niche d’hôte pour la réplication de Leishmania , les parasites sont également phagocytés par d’autres cellules immunitaires innées, telles que les neutrophiles et les cellules dendritiques (DC).

Les DC jouent un rôle majeur dans le rapprochement entre les branches innées et adaptatives de l’immunité et orchestrent ainsi les réponses immunitaires contre un large éventail d’agents pathogènes. Les mécanismes par lesquels Leishmania et les DC interagissent restent flous et impliquent des aspects de la capture des agents pathogènes, de la dynamique de la maturation et de l’activation des CD, de la migration des DC vers les ganglions lymphatiques drainants (dLN) et de la présentation de l’antigène aux lymphocytes T. Bien qu’un grand nombre d’études soutiennent l’idée que les CD jouent un double rôle dans la modulation des réponses immunitaires contre Leishmania, la participation de ces cellules à la susceptibilité ou à la résistance à Leishmania reste mal comprise. Après l’infection, les CD subissent un processus de maturation associé à la régulation positive du complexe majeur d’histocompatibilité (CMH) II de surface, en plus des molécules de costimulation (à savoir, CD40, CD80 et CD86).

Comprendre le rôle des CD dans l’issue de l’infection est crucial pour développer des stratégies thérapeutiques et prophylactiques visant à moduler la réponse immunitaire contre Leishmania. Cet article décrit une méthode de caractérisation de l’interaction Leishmania-DC. Ce protocole détaillé fournit des conseils tout au long des étapes de la différenciation des CD, de la caractérisation des molécules de surface cellulaire et des protocoles d’infection, permettant aux scientifiques d’étudier la réponse des DC à l’infection à Leishmania et de mieux comprendre les rôles joués par ces cellules au cours de l’infection.

Introduction

La leishmaniose constitue un complexe de maladies négligées causées par différentes espèces du genre Leishmania ¹. Leishmania est un protozoaire intracellulaire de la famille des Trypanosomatidae qui infecte les humains et d’autres mammifères, provoquant un éventail de maladies allant des lésions cutanées aux formes viscérales². Les principales manifestations cliniques de cette maladie sont la leishmaniose tégumentaire (TL) et la leishmaniose viscérale (VL). L’Organisation mondiale de la santé (OMS) estime que 700 000 à 1 million de nouveaux cas surviennent chaque année....

Protocole

REMARQUE : Les cellules ont été obtenues à partir de donneurs volontaires sains. La procédure décrite dans le présent document a été approuvée par le Comité national d’éthique (numéro 2.751.345) - Fiocruz, Bahia, Brésil).

1. Différenciation des cellules dendritiques humaines

1. Pipeter 10 mL de mélange de polysaccharose-triazoate de sodium dans des tubes coniques de 50 mL.
2. Étiquetez les tubes coniques de 50 mL respectivement pour chaque donneur.
3. Prélever 30 ml de sang de donneurs sains et effectuer toutes les étapes subséquentes dans la hotte à flux laminaire.

Résultats

Ce rapport étudie le rôle des CD dans l’infection à Leishmania à l’aide de la cytométrie en flux et de la microscopie confocale. Initialement, le profil phénotypique de la DC dérivée des monocytes humains a été établi. Notamment, les populations de cellules dendritiques CD11c⁺ obtenues étaient positives pour CCR7, CD209, CD80, CD1a et HLA-DR. Les résultats indiquent que l’expression de ces marqueurs dans les populations de DC est profondément affectée par l’infection à Leishmania. Les DC infe.......

Discussion

La leishmaniose est un grave problème de santé publique dans le monde entier. La pathogenèse de cette maladie est assez complexe, et les mécanismes favorisant la survie des parasites chez les hôtes vertébrés restent insaisissables¹⁷. Les DC sont des cellules professionnelles présentatrices d’antigènes présentes dans tout le corps, y compris les organes filtrants et lymphoïdes. Après la capture et le traitement de l’antigène, les CD immatures subissent un processus.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
anti CCR7	Thermo
anti CD209	Isofarma
anti CD83	Leica SP8
anti HLA-DR	Gibco
Sérum bovin albumine	Thermo	A2153-100G	Sigma
Ciprofloxacine	Gibco
microscope confocal	Thermo Fisher Scientific
Sérum fœtal bovin	Gibco
Flow Jo	Thermo Fisher Scientific
Gentamicine	Thermo Fisher Scientific
Glutamin	Gibco
HEPES	Thermo Fisher Scientific
phalloidine	Thermo Fisher Scientific
Solution tampon phosphate	Peprotech
prolong gold kit anti-décoloration	BD pharmigen
RPMI	BD pharmigen
Saponin	BD pharmigen	47036 &ndash ; 50G &ndash ; Le
milieu d’insectes	BD biosciences

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