نموذج Xenograft خال من الملصقات للتحقيق في سلوك الخلايا الجذعية البشرية الكروية في أجنة الكتاكيت

Ingrid Rosenburg Cordeiro; José Marques de Brito Neto

doi:10.3791/63067

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج Xenograft خال من الملصقات للتحقيق في سلوك الخلايا الجذعية البشرية الكروية في أجنة الكتاكيت

1.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/63067

⸱

أكتوبر 15, 2021

Ingrid Rosenburg Cordeiro¹^,² , José Marques de Brito Neto¹

¹Morphological Sciences Program, Biomedical Sciences Institute, Federal University of Rio de Janeiro, ²Department of Life Science and Technology, Tokyo Institute of Technology

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نصف طريقة لزرع وتحديد كرويات الخلايا البشرية في أجنة الكتاكيت. يستخدم نموذج الطعم الغريب هذا البيئة المكروية الجنينية كمصدر للإشارات الإرشادية لفحص هجرة الخلايا والتمايز والانتحاء وهو مناسب بشكل خاص لدراسة مجموعات الخلايا الأولية و / أو غير المتجانسة.

الملخص

Xenografts هي طرق قيمة للتحقيق في سلوك الخلايا البشرية في الجسم الحي. على وجه الخصوص ، توفر البيئة الجنينية إشارات لهجرة الخلايا والتمايز والتشكل ، مع إشارات إرشادية فريدة وهوية الطبقة الجرثومية التي غالبا ما تكون غائبة عن نماذج الطعم الغريب للبالغين. بالإضافة إلى ذلك ، لا يمكن للنماذج الجنينية التمييز بين الأنسجة الذاتية والأنسجة غير الذاتية ، مما يلغي خطر رفض الكسب غير المشروع والحاجة إلى قمع المناعة للمضيف. تقدم هذه الورقة منهجية لزرع كرويات الخلايا البشرية في أجنة الدجاج ، والتي يمكن الوصول إليها ، وقابلة للتلاعب ، وتتطور عند 37 درجة مئوية.

تسمح الكرويات باختيار منطقة معينة من الجنين للزرع. بعد التطعيم ، يتم دمج الخلايا في الأنسجة المضيفة ، مما يسمح بمتابعة هجرتها ونموها وتمايزها. هذا النموذج مرن بما يكفي للسماح باستخدام مجموعات مختلفة ملتصقة ، بما في ذلك مجموعات الخلايا الأولية غير المتجانسة والخلايا السرطانية. للتحايل على الحاجة إلى وضع العلامات المسبقة على الخلايا ، يتم أيضا وصف بروتوكول لتحديد الخلايا المانحة من خلال تهجين مجسات Alu الخاصة بالإنسان ، وهو أمر مهم بشكل خاص عند التحقيق في مجموعات الخلايا غير المتجانسة. علاوة على ذلك ، يمكن تكييف مجسات الحمض النووي بسهولة لتحديد الأنواع المانحة الأخرى. سيصف هذا البروتوكول الطرق العامة لتحضير الفيريات ، والتطعيم في أجنة الدجاج ، وتثبيت ومعالجة الأنسجة لتقسيم البارافين ، وأخيرا تحديد الخلايا البشرية باستخدام تهجين الحمض النووي في الموقع . ستتم مناقشة الضوابط المقترحة وأمثلة على تفسير النتائج وسلوكيات الخلية المختلفة التي يمكن فحصها بالإضافة إلى قيود هذه الطريقة.

المقدمة

Xenografts هي أدوات مفيدة للتحقيق في سلوك الخلايا البشرية في الجسم الحي. قدمت هذه النماذج معلومات لا تقدر بثمن لمجموعة واسعة من الموضوعات العلمية ، مثل بيولوجيا الخلايا الجذعية البشرية¹ ، ومراقبة الأحداث الخلوية في الوقت الفعلي² ، والتحقيق في تكوين الأوعية الدموية الورمية والورم الخبيث³. بالإضافة إلى ذلك ، تمت دراسة العديد من جوانب بيولوجيا السرطان ، بما في ذلك تكوين الأورام في الطعوم الغريبة الخاصة بالمريض^{، 4}^،⁵. كل نموذج من نماذج xenograft هذه له مزاياه وعيوبه ، وبالتالي ، فإن كل نموذج مناسب بشكل....