喉頭移植研究のための異所性マウスモデル

喉頭移植モデルは、マウスおよびラットで記載された。シニアアルターの以前の研究は、吻合のためにドナー頸動脈を使用するより効率的な方法を考案することに焦点を当て、上甲状腺動脈を解剖する必要がなくなりました。このビデオでは、マウスでこの手順について説明しました。

このマウス喉頭移植モデルにより、免疫学的研究を簡単かつ低コストで実施することができます。ラットモデルに比べて血管のサイズが小さいため、技術的には困難ですが、手術手順に精通していれば、この手順は約3時間で実行できます。動物が完全に麻酔された後、マウスをシェービング領域に移し、麻酔の維持のためにフェイスマスクを介して毎分1リットルの酸素流を含む1.5%イソフルランが送達されます。

つま先ピンチで麻酔の深さを確認します。マウスの胸と首を顎のラインまで剃り、脱毛クリームを塗ります。そして30秒後、クリームを拭き取り、マウスを手術領域に移します。

マウスを固定し、ポビドンヨードとアルコールで手術部位を3回準備してから、マウスをドレープします。胸骨上ノッチのすぐ上に小さな水平切開を行います。細かいハサミを使用して、その切開部から下顎骨まで皮膚を両側に持ち上げ、台形の皮膚部分を切除します。

両側唾液腺を切除し、腺を通過する小さな静脈が視覚化される上部で焼灼を使用します。両側胸鎖乳突筋を周囲の組織から解剖し、横方向に引っ込めます。ストラップの筋肉を正中線で切開し、下にある甲状腺を傷つけないように注意しながら両側に切除し、喉頭気管食道またはLTE複合体に残します。

このステップの後、両側頸動脈が見えます。総頸動脈を下鎖骨のレベルまで、頸動脈分岐部を上方に円周方向に解剖する。迷走神経と内頸静脈は頸動脈から解剖され、調達された移植片には含まれていません。

内頸動脈と外頸動脈を結紮して分裂させることができるほど十分に高く解剖します。10-0ナイロン縫合糸を使用して、頸動脈分岐部より2〜3ミリメートル優れた内頸動脈を結紮します。上甲状腺動脈の分岐点より少なくとも3ミリメートル高い外頸動脈を結睭化し、胸骨のレベルで総頸動脈を結紮する。

すべての結紮血管を両側に切断します。さらなる解剖中の偶発的な損傷を避けるために、血管茎をLTE複合体の上に保ちます。ガス漏れや不注意による麻酔の喪失を防ぐために、気道を切る前に動物の有効期限が切れていることを確認してください。

第5気管リングの下の気管を横断し、切開部を食道を通って椎前筋膜まで運び、LTE複合体を下方に解放します。気管と食道を下の椎骨前筋膜から下から上へと解放します。舌骨よりすぐ下の前咽頭切除術を作成します。

切開部を椎前筋膜まで運び、LTE複合体を上手に解放します。LTE複合体と周囲の組織の間で残りのリンパ系または結合組織の付着物を分割します。そして最後に、移植片を取り除きます。

調達した移植片を滅菌ペトリ皿に入れ、通常の生理食塩水で洗って血栓を取り除きます。1ミリメートルのマイクロ拡張器を使用して両側頸動脈を拡張します。30ゲージの先端の鈍い針を使用して、各頸動脈に約2ミリリットルのヘパリン化生理食塩水を注入して移植片を洗い流します。

血液と生理食塩水が反対側の頸動脈と小さな自由血管の端から洗い流されているのが見られ、無傷の上甲状腺動脈が確認されます。移植片はヘパリン処理生理食塩水に残すことができ、レシピエントに移植する前に最大3時間短い休憩を取ることができます。麻酔導入、剃毛、および外科的準備ステップに続くドナーについて説明したのとまったく同じ方法でレシピエントマウスを準備します。

レシピエントマウスに徐放性鎮痛剤を手術開始の30分前に皮下注射する。メスを使用して、顎のラインから下にある胸骨まで伸びる正中線の首の切開を行います。左側の皮膚を持ち上げ、横方向に引っ込めます。

前述のように上血管を焼灼する左唾液腺を切除する。目に見える血管を低温焼灼で分割することにより、脂肪組織とリンパ組織を切除します。下にある外頸静脈を傷つけないように注意してください。

外頸静脈を円周方向に解剖します。吻合のために血管の少なくとも5ミリメートルの明確な長さを使用してください。胸骨乳突筋を解剖し、横方向に引っ込めます。

鎖骨から頸動脈分岐部まで総頸動脈を円周方向に解剖する。背景資料を外頸静脈の下に通し、二重近似B-3血管クランプを適用します。10-0ナイロン縫合糸を外頸静脈の前壁に通して目的の単調解術の位置に配置し、縫合糸を使用して血管を前方に引っ張ります。

マイクロハサミで縫合糸まで深くカットして、適切なサイズのシングルスリット静脈切開の作成を容易にし、カットが静脈壁を完全に貫通するようにします。30ゲージの先端の鈍い針を使用して、静脈の内側をヘパリン化生理食塩水で洗い流します。ドナーLTE複合体をレシピエントの左頸動脈と左外頸静脈の間に配置します。

ドナー左頸動脈の自由端をレシピエントの左外頸静脈に合わせ、鋭利なハサミを使用して端を面取りします。4本の10-0ナイロン中断縫合糸を用いて、ドナーは頸動脈を左に、レシピエントは外頸静脈を端から左右に吻合した。背景物質をレシピエントの副頸動脈の下にスライドさせ、二重近似A-3血管クランプを適用します。

静脈切開と同じ方法で動脈切開を作成します。ドナー右頚動脈をレシピエント左頚動脈に端から横に吻合する。10-0ナイロンで6つの中断された縫合糸を使用することは、動脈吻合に最適です。

静脈側のクランプを取り外します。出血が発生した場合は、綿の先端で穏やかな圧力をかけます。動脈のクランプを外し、すぐに綿の先端で穏やかな圧力をかけます。

穏やかな圧力で通常1分後に止まるステップでいくらかの出血が予想されます。静脈内の動脈の血流の完全性を確認してください。無傷の動脈流では、通常、ドナー頸動脈の脈動が見られ、ドナー甲状腺は紅潮した透明な色から元の赤みがかった色に戻ります。

LTE複合体上の小血管の赤い着色も観察することができます。ランニング方式で5-0モノフィラメント縫合糸で皮膚切開を閉じます。切開部に皮膚接着剤を塗布します。

手術中の体液損失を考慮して、1ミリリットルの温かい生理食塩水を皮下注射します。麻酔を停止し、マウスを回復ケージに移します。低体温症を避けるために、完全に目覚めるまで加熱パッドでマウスを観察します。

外科的成功は、血管クランプを取り外した直後に評価することができる。図Aは、ドナー喉頭の頸動脈に血流が可視化され、甲状腺が赤くなったため、手術の成功を表しています。図Bは、ドナー喉頭の頸動脈の血流を視覚化できず、甲状腺が青白いままであったため、失敗した手術を表しています。

免疫抑制がない状態で15日後、ほとんどのレシピエントは移植への血流がありません。動脈の開存性は、周囲のレシピエント組織から遊離した喉頭気管複合体を解剖し、端部から側方への吻合を視覚化することによって巨視的に評価することができる。感謝。このビデオを見た後、約3時間で喉頭気管食道複合体をあるマウスから別のマウスに異所性に移植する方法を理解する必要があります。

この実現可能で比較的低コストのモデルは、喉頭気管複合体の拒絶における免疫系の役割を研究する上で大きな可能性を提供し、それによって臓器移植における新しい治療法の可能性を提供します。