Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Histologi Grunnleggende og Cell Death Detection i Honeybee Tissue
Chapters
Summary July 7th, 2022
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Immunhistokjemiske metoder er nyttige i honningbieforskning for å oppdage og vurdere nivået av apoptose og nekrose i midgut og hypopharyngeal kjertler av voksne bier.
Transcript
Denne protokollen er nyttig i mange biologiske og toksikologiske studier av honningbier behandlet med plantevernmidler. Det bidrar til å oppdage de cellulære responsene av honningbievev av akaricider som brukes i bikolonier for behandling mot Varroa-myter. Det er et kraftig verktøy for påvisning av sub-små effekter på vev i kombinasjon med oppførsel av bier eller andre gunstige insekter.
For å begynne, ta forsiktig en arbeiderbi med tang og legg den på is eller fryser ved minus 20 grader Celsius i to minutter for å immobilisere den. Fest bien på petriskålen diagonalt gjennom den øverste bakre delen av thoraxen to ganger fra venstre til høyre og fra høyre til venstre. Dårlig insekt saltvann for å dekke kroppen.
Plasser petriskålen under stereomikroskopet, fokuser og juster. For å dissekere midttarmen, start med magen ved å sette inn ett punkt på saksen under tergite A5 i midten av høyre side av biekroppen. Klipp til tergite A2. Hold saksens indre blad parallelt med siden av kroppen for å unngå å skade de indre organene.
Vri saksen til venstre og klipp. Åpne forsiktig venstre del av magen og fest den. Bruk tang med den ene hånden, trekk forsiktig honningbiemagen oppover, og med saks i den andre hånden, kutt helt i enden av spiserøret.
Trekk magen og midgut vekk fra magen og kutt i endetarmen. Bruk en pipette med insekt saltoppløsning og fjern avføring eller deler av vevet. For disseksjon av hypofaryngeale kjertler, immobiliser en arbeiderbi på is som beskrevet tidligere.
Klipp hodet av og legg det på en mindre plate med antennen vendt opp. Fest hodet med to pinner, en gjennom venstre sammensatte øye og den andre gjennom høyre sammensatte øye. Lag et kutt over det første sammensatte øyet på innsiden av pinnene, fortsett til labrum, og gjør deretter et nytt kutt på den andre siden over det andre sammensatte øyet.
Klipp av antennene. Løft av masken og kutt der den fortsatt er festet. Ta tangen og fjern kjertlene forsiktig sammen med hjernen og en del av de sammensatte øynene.
For farging av hematoksylin og eosin, legg de devoksede, rehydrerte seksjonene i hematoksylin i fem minutter. Legg dem deretter forsiktig under rennende vann fra springen i to minutter. Legg dem deretter i destillert vann i ett minutt og eosin i fire minutter.
Plasser lysbildene 96% etanol i ett minutt, deretter 2-propanol i to minutter, og til slutt inn i ryddemiddelet i to minutter. Legg til monteringsmedium og et dekselglass og la dem tørke. Vær oppmerksom under et lysmikroskop.
Forbered Coplin krukker. Forbered proteinase-K. Etter avvoksing og rehydrering av seksjonene, plasser lysbildene i PBS i fem minutter.
Plasser lysbildene flatt i beholderen og legg til proteinase-K. Vask lysbildene i destillert vann. Slukk i endogen peroksidase ved romtemperatur.
Skyll lysbildene med PBS eller vann. Plasser lysbildene flatt i beholderen og bruk likevektsbuffer i 10 sekunder ved romtemperatur. Etter å ha tørket rundt vevet, legg til det terminale deoksynukleotidyltransferaseenzymet til hver seksjon, og inkuber i et fuktet kammer i en time ved 37 grader Celsius.
Før inkubasjon, legg fuktede papirhåndklær inne i brettet rundt lysbildene og dekk dem med plastfolie. Etter inkubasjon, legg prøvene på stativet og la dem stå i stoppvaskbufferen. Etter å ha vasket lysbildene i PBS og tørket rundt vevet, tilsett to dråper varmt anti-digoksigeninperoksidasekonjugat til seksjonene og inkuber i 30 minutter i en fuktet beholder.
Etter vask i PBS, tilbered arbeidsstyrke-peroksidasesubstrat, dekk seksjonene med peroksidasesubstrat og flekk i fem minutter. Plasser lysbildet under mikroskopet og bestem den optimale fargetiden. Etter å ha vasket lysbildene i et fargestativ og destillert vann, inkuberer lysbildene i destillert vann i fem minutter.
Motflekk ved bruk av hematoksylin i to minutter. Vask lysbildene ved å plassere dem under rennende vann fra springen i tre minutter og deretter i destillert vann. Monter lysbildene under glassdeksel og monteringsmedium og la det være flatt å tørke.
Vær oppmerksom under et lysmikroskop. Prosentandelen av berørte celler ble beregnet ved hjelp av et lysmikroskop. Resultatene indikerte at behandlingen med oksalsyre signifikant påvirket cellene i midttarmen.
Immunostaining viste positive røde eller brune reaksjonsprodukter i de apoptotiske kjernene i hypofaryngeale kjertler. Positivt reaksjonsprodukt etter imidakloprid- eller kumarofosbehandling ble bestemt i de fleste kjertelceller. Når du løfter masken på biehodet, må du passe på at du ikke skader eller trekker av delene av hypopharyngeal kjertlene.
Denne teknikken oppdager subkliniske endringer i bier og er også egnet for påvisning av andre miljøeffekter på bier og noen andre levende organismer.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
