Name: モルモットの目からの網膜色素上皮細胞の分離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 6 s
Description: 学ぶモルモットの眼から網膜色素上皮細胞を分離する簡便な手法。高品質なRPEサンプルを取得し、遺伝子発現解析などの分子生物学研究に応用できます。

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本研究は、日本学術振興会海外特別研究員(S.G.)、ロリス&デイビッド・リッチ博士研究員(S.G.)、国立衛生研究所眼科研究所(R01EY012392;C.F.W.)。

この研究で使用されたすべての動物の世話と治療は、眼科および視覚研究における動物の使用に関するARVOステートメントに準拠していました。実験プロトコルは、カリフォルニア大学バークレー校の動物管理および使用委員会によって承認されました。
1.モルモットの目の除核
<ol><li>麻酔下で送達されたペントバルビタールナトリウム(酸素中の5%イソフルラン)の心臓内注射でモルモットを安楽死させる。</li>
	<li>鉗子とはさみを使って目を除核し、すぐに滅菌リン酸緩衝生理食塩水(PBS)を入れた10cmのペトリ皿に移して洗浄します。新鮮なPBS溶液に目を移します。 注:ウェルあたり4 mLの溶液を含む6ウェルプレートをお勧めします。</li>
</ol>2.眼後眼カップとRPE/脈絡膜/強膜複合体の分離
<ol><li>解剖顕微鏡の助けを借りて、18 Gの針を使用して、辺縁部の境界の約1.0 mm後方(つまり、角膜と強膜の間)にある強膜を最初に小さな切開を行います(図1A)。次に、はさみを使用して、角膜、虹彩、毛様体、水晶体などの前部を取り除きます。</li>
	<li>次に、残りの後眼セグメントアイカップを使用して、網膜をRPE /脈絡膜/強膜複合体から剥離します。鉗子を使用して、最初にジンの小帯をつかみ、次に穏やかに引っ張ってから、断片化せずに網膜を徐々に剥がします(図1B)。 注:網膜の断片化や不完全な網膜組織の分離を避けるために、網膜を直接把握してはなりません。この解剖ステップには顕微鏡の使用が不可欠です。</li>
</ol>3. 脈絡膜からのRPEの分離
<ol><li>網膜が完全に除去されたら、RPE、脈絡膜、強膜を含む残りの後眼カップを組織保存試薬に5分間浸します( 材料の表を参照)。 注:識別されたウェルを備えた12ウェルプレートを使用し、それぞれに2mLの組織保存試薬を充填します。</li>
	<li>アイカップを4 mLのPBSで満たされた別のウェルに10秒間移してから、2 mLのPBSで満たされた3番目のウェルに移動します。</li>
	<li>最後のRPE分離ステップのために、PBSで満たされた1 mLシリンジに30 Gの針を取り付けます。シリンジをそっと押して、PBSのジェットストリームを作成します。まず、このストリームをRPEに向け、小さな裂け目または穴を開けてから、PBSのストリームを作成した開口部に向け、RPEをシートとして脈絡膜から切り離します(図1C)。 注:RPEをシートとして切り離すと、最大のRPEサンプルが得られます。繰り返しになりますが、このステップには顕微鏡の使用が不可欠です。</li>
	<li>RPEを脈絡膜から剥離した後(図1D)、RPE組織を針のない1 mLシリンジに採取し、採取したサンプルを1.5 mLチューブに移します。</li>
	<li>回収したRPEを入れた1.5 mLチューブを8,000 × g で1分間遠心分離し、RPEペレットを得ました(図2A)。</li>
	<li>PBS溶液を廃棄し、RNA分離キットに含まれている350 mLの溶解バッファーと交換します( 材料の表を参照)。ピペット20倍で混合し、サンプルの品質を維持します。長期保存および保存のために、サンプルを−80°Cの冷凍庫に移します。 注:溶解バッファーは、RNA単離およびRNA/DNA/タンパク質同時単離前の細胞および組織溶解用のRNA分離キットの独自のコンポーネントです。ライセート中のRNAsesを不活性化するには、必ずβ-メルカプトエタノールを溶解バッファーに添加してください(溶解バッファー1 mLあたり10 μLのβ-メルカプトエタノール)。</li>
</ol>4. RPE-RNA抽出
<ol><li>RNA分離キット( 材料表を参照)を使用して、提供されている製造元の指示に従ってRPEサンプルからRNAを分離および収集します。電気泳動 で サンプルの品質を評価します。 注:記載されたプロトコルは、高品質の製品(すなわち、8.0を超えるRNA完全性番号[RIN])を生み出しました。</li>
</ol>

<ol><li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological Reviews. 85 (3), 845-881 (2005).</li>
<li>Amram, B., Cohen-Tayar, Y., David, A., Ashery-Padan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+pigmented+epithelium+-+from+basic+developmental+biology+research+to+translational+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The retinal pigmented epithelium - from basic developmental biology research to translational approaches.</a> The International Journal of Developmental Biology. 61 (3-4-5), 225-234 (2017).</li>
<li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+retina-specific+Aldh1a1+controls+dorsal+choroidal+vascular+development+via+Sox9+expression+in+retinal+pigment+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Neural retina-specific Aldh1a1 controls dorsal choroidal vascular development via Sox9 expression in retinal pigment epithelial cells.</a> Elife. 7, 32358(2018).</li>
<li>Rymer, J., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+retinal+pigment+epithelium+in+eye+growth+regulation+and+myopia%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Visual+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of the retinal pigment epithelium in eye growth regulation and myopia: A review.</a> Visual Neuroscience. 22 (3), 251-261 (2005).</li>
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<li>Bhutto, I., Lutty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+age-related+macular+degeneration+%28AMD%29%3A+Relationships+between+the+photoreceptor%2Fretinal+pigment+epithelium%2FBruch%27s+membrane%2Fchoriocapillaris+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Aspects+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex.</a> Molecular Aspects of Medicine. 33 (4), 295-317 (2012).</li>
<li>Shelton, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+analysis+of+choroid%2FRPE+gene+expression+in+marmoset+eyes+undergoing+changes+in+ocular+growth+and+refraction%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Vision%22%5BJournal%5D)">Microarray analysis of choroid/RPE gene expression in marmoset eyes undergoing changes in ocular growth and refraction.</a> Molecular Vision. 14, 1465-1479 (2008).</li>
<li>Wang, S., Liu, S., Mao, J., Wen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+retinoic+acid+on+the+tight+junctions+of+the+retinal+pigment+epithelium-choroid+complex+of+guinea+pigs+with+lens-induced+myopia+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of retinoic acid on the tight junctions of the retinal pigment epithelium-choroid complex of guinea pigs with lens-induced myopia in vivo.</a> International Journal of Molecular Medicine. 33 (4), 825-832 (2014).</li>
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<li>Nickla, D. L., Wallman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multifunctional+choroid%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The multifunctional choroid.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 29 (2), 144-168 (2010).</li>
<li>Zhang, Y., Liu, Y., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional%2C+optical+sign-dependent+regulation+of+BMP2+gene+expression+in+chick+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Bidirectional, optical sign-dependent regulation of BMP2 gene expression in chick retinal pigment epithelium.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 53 (10), 6072-6080 (2012).</li>
<li>Xin-Zhao Wang, C., Zhang, K., Aredo, B., Lu, H., Ufret-Vincenty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+method+for+the+rapid+isolation+of+RPE+cells+specifically+for+RNA+extraction+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Novel method for the rapid isolation of RPE cells specifically for RNA extraction and analysis.</a> Experimental Eye Research. 102 (1), 1-9 (2012).</li>
<li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+signatures+of+contact+lens-induced+myopia+in+guinea+pig+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Gene expression signatures of contact lens-induced myopia in guinea pig retinal pigment epithelium.</a> Investigative Opthalmology and Visual Science. 63 (9), 25(2022).</li>
<li>De Schaepdrijver, L., Simoens, P., Lauwers, H., De Geest, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vascular+patterns+in+domestic+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Retinal vascular patterns in domestic animals.</a> Research in Veterinary Science. 47 (1), 34-42 (1989).</li>
<li>Araki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Base-resolution+methylome+of+retinal+pigment+epithelial+cells+used+in+the+first+trial+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-based+autologous+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Base-resolution methylome of retinal pigment epithelial cells used in the first trial of human induced pluripotent stem cell-based autologous transplantation.</a> Stem Cell Reports. 13 (4), 761-774 (2019).</li>
<li>Sonoda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+culture+and+differentiation+of+highly+polarized+human+retinal+pigment+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">A protocol for the culture and differentiation of highly polarized human retinal pigment epithelial cells.</a> Nature Protocols. 4 (5), 662-673 (2009).</li>
<li>Fernandez-Godino, R., Garland, D. L., Pierce, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture+and+characterization+of+primary+mouse+RPE+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture and characterization of primary mouse RPE cells.</a> Nature Protocols. 11 (7), 1206-1218 (2016).</li>
</ol>

著者は、競合する金銭的利益を宣言していません。

本稿では、若く色素性モルモットの目からRPE遺伝子発現解析に適したRPEを単離する方法について説明します。このプロトコルのメリットは、比較的汚染のない高品質のRPEサンプルが得られ、RNA特異的分析にRNAが適切に保存され、しかも比較的シンプルで効率的であることです。ここで提供される例では、RPEサンプルは若い(2週齢)モルモットの目から収集されましたが、このプロトコルは、年配の(若い成体)動物からRPEサンプルを収集するためにも成功裏に使用されています。
眼科手術や解剖の経験が最小限の研究者にとって、プロトコルステップ2.1とステップ2.2は困難な場合があります。ステップ2.1の重要な詳細は、強膜の最初の切開の位置であり、前部を剥離するときに虹彩と水晶体が角膜と一緒に除去されるように、辺縁部の1.0 mm後方に正確に配置する必要があります。代わりに、虹彩が後眼部に付着したままである場合、次のステップで網膜を正常に剥離するための鍵となるジンの小帯を見つけることは困難です。プロトコルに記載されているように、網膜の剥離を成功させるためには、網膜を鉗子で直接把持しないことも重要です。モル...

RPEは、神経網膜と血管脈絡膜の間に位置する色素細胞のユニークな単層で構成されており、光伝達を含む正常な網膜機能の発生と維持においてよく認識されている役割を持っています1,2。最近では、RPEは眼の成長調節3、したがって近視4の発症において追加の重要な役割を割り当てられています。この割り当ては、網膜と脈絡膜の間に介在するRPEの重要な位置と、眼の成長、したがって屈折異常が局所的に調節されていることが広く受け入れられていることに基づいています5。RPEは、増殖調節信号の想定源である網膜を、中継信号の2つの標的である脈絡膜および強膜に連結する信号中継として重要な役割を果たすと考えられている6,7,8。
ほとんどの近視を特徴付ける軸長の増加は良性とは見なされず、網膜、脈絡膜、および/または強膜を含む病態生理学的変化は、過度の眼の伸長の避けられない、そして今ではよく認識されている結果を表しています7,9。これに関連して、RPEは、非有糸分裂組織であるため、個々の細胞の伸張および菲薄化によってのみ拡大する硝子体腔を収容することができるので、おそらく最も脆弱である。近視性黄斑変性症などの近視関連の病状におけるその役割はまだ完全には理解されていませんが、RPEは、網膜、RPE、および脈絡膜の文書化された異常に関連する失明の主な原因の1つである地図状萎縮を含む、他の多くの網膜疾患の病因に関与しています10,11、12.
隣接する眼組織からの汚染のないRPE細胞の単離に成功することで、さまざまな眼/網膜疾患の根底にあるメカニズムに関する新しい洞察を得るための多くの研究機会が開かれる可能性があります。しかし、RPEの分離は困難であることが証明されており、多くの発表された研究では、この理由から網膜/RPEまたはRPE/脈絡膜の組み合わせサンプルを利用しています13,14,15。分子生物学的研究に適した品質のRPEの単離の成功を含む研究は、ニワトリおよびマウスの眼に限定されてきた16,17。例えば、RPE単離とRNA安定化の同時進行(SRIRS)法は、Wangら18によって記載される。マウスでRPE細胞を単離することは、モルモットの目ではうまく機能しないようです。ここで説明するプロトコルは、著者の1人(M.F.)によって最初に木のじゃじゃ馬の目でプロトタイプ化されたアプローチの改良を表しており、若い色素性モルモットの目からRNAやその他の分子生物学的分析に適した高品質のRPEサンプルが得られることが証明されています19。

<table><tbody><tr><td>1 mL シリンジ(スリップチップ付き</td>) <td>BD Vacutainer Labware Medical</td><td>22-253-260</td><td></td></tr><tr><td>2-メルカプトエタノール</td><td>Invitrogen</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>6 ウェル組織培養プレート(蓋付き)、平底、滅菌</td><td>胸部 Chemical Mfg. Corp</td><td>970-95008</td><td></td></tr><tr><td>12 ウェル組織培養プレート(蓋付き)、個別、滅菌</td><td>Thomas Scientific LLC</td><td>1198D72</td><td></td></tr><tr><td>Agilent 2100 Bioanalyzer</td><td></td><td></td><td>自動電気泳動で RNA 品質を確認</td></tr><tr><td>Balanced Salt Solutions</td><td>Gibco</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>Bonn Micro Forceps, Straight Smooth, 0.3 mm Tip, 7 cm</td><td>Fine Science Tools, Inc.</td><td>11083-07</td><td></td></tr><tr><td>デュモン鉗子番号5</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5045</td><td></td></tr>皮<tr><td>下注射用使い捨て針</td><td>Exelint International, Co.</td><td>26419</td><td></td></tr><tr><td>皮下注射用使い捨て針</td><td>Exelint International, Co.</td><td>26437</td><td></td></tr><tr><td>MiniSpin 微量遠心分離機</td><td>エッペンドルフ</td><td>540108</td><td>最大速度:8,000 g</td></tr><tr><td>RNAlater 安定化溶液</td><td>Invitrogen</td><td>AM7020</td><td>組織保存試薬</td></tr><tr><td>RNeasy Mini kits</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td>RNA Isolation kit</td></tr><tr><td>Student Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools, Inc.</td><td>91500から09</td><td></td></tr></tbody></table>

モルモットの目からの網膜色素上皮細胞の分離

Isolation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Guinea Pig Eyes

このプロトコルは、遺伝子発現分析を含む分子生物学研究への応用の可能性のために、若い色素性モルモットの目から網膜色素上皮(RPE)の細胞を単離することについて説明しています。眼の成長調節と近視の文脈では、RPEは網膜と脈絡膜や強膜などの眼の2つの壁の間に位置するため、成長調節シグナルの細胞リレーとしての役割を果たす可能性があります。RPEを単離するためのプロトコルは、ヒナとマウスの両方について開発されていますが、これらのプロトコルは、重要で広く使用されている哺乳類近視モデルとなっているモルモットに直接翻訳できないことが証明されています。この研究では、分子生物学的ツールを使用して特定の遺伝子の発現を調べ、サンプルに隣接組織からの汚染がないことを確認しました。このプロトコルの価値は、近視誘発性の光学的焦点ぼけにさらされた若い色素性モルモットからのRPEのRNA-Seq研究ですでに実証されています。眼の成長調節以外にも、このプロトコルは、RPEが関与している近視の失明の主な原因の1つである近視性黄斑症を含む網膜疾患の研究に他の潜在的な用途があります。この技術の主な利点は、比較的単純であり、一度完成すると、RNA分析を含む分子生物学研究に適した高品質のRPEサンプルが得られることです。

上記のプロトコルを使用して収集されたRPEサンプルの分析では、1眼あたり240.2 ng±35.1 ngのよく保存されたRNA(RIN &gt;8.0、図2B)が示されました(n = 8、NanoDrop、図2B)。 単離されたRPEサンプルの品質、特に脈絡膜および強膜汚染物質の不在をさらに評価するために、RPEサンプル19における後者の組織のそれぞれについての代表遺伝子の発現を調べた。RPEサンプルは、脈絡膜および強膜におけるRpe65発現レベルと比較して、Rpe65(RPE特異的遺伝子)の有意に高い発現を示した(表1および図2C)。対照的に、RPEサンプルは、選択された脈絡膜強膜特異的遺伝子であるCol1a1の最小発現を示した(図2D)。
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我々は、若い色素性モルモットの目から網膜色素上皮(RPE)細胞の細胞を単離するための簡単で効率的な方法を説明する。この手順により、遺伝子発現解析を含む、単離されたRPEに関するフォローアップ分子生物学的研究が可能になります。

This protocol describes the isolation of cells of the retinal pigment epithelium (RPE) from the eyes of young pigmented guinea pigs for potential ...

網膜色素上皮またはRPEは、網膜の健康にとって重要です。そして、単離されたRPEを研究することは、網膜疾患にとって非常に重要です。人気のある近視モデルであるモルモットからのRPE分離のこの方法は、困難な問題の解決に役立ちます。この技術の主な利点は、RPE分析を含む生物学的分子研究に適した比較的簡単で高品質のRPEサンプルが得られることです。実証されたテクニックに完全に従い、解剖ツールの操作方法を観察することで、ある程度の練習でこの手順をすばやく習得できます。モルモットを人道的に安楽死させ、動物の目を切除した後、滅菌リン酸緩衝生理食塩水またはPBSを含む10センチメートルのペトリ皿に移して直ちに目を洗います。洗浄後、目を新鮮なPBS溶液に移します。現在、解剖顕微鏡で作業している18ゲージの針を使用して、角膜と強膜の間の辺縁境界の約1ミリメートル後ろにある片目の強膜に最初の小さな開口部を作ります。はさみを使用して、角膜、虹彩、毛様体、水晶体などの前部を取り除きます。次に、残りの後眼部で作業し、鉗子を使用してジン小帯をつかんで優しく引っ張り、続いて網膜をRPE /脈絡膜/強膜複合体から剥離し、断片化せずに網膜を剥がします。網膜が完全に除去されたら、RPE、脈絡膜、強膜を含む残りの後眼カップを、2ミリリットルの組織保存試薬を含む12ウェルプレートのウェルの1つに浸し、5分間浸したままにします。保存試薬を洗い流すには、アイカップを4ミリリットルのPBSで満たされた別のウェルに10秒間移してから、2ミリリットルのPBSで満たされた3番目のウェルに移動します。最後のRPE分離ステップに進む前に、PBSで満たされた1ミリリットルのシリンジを準備し、30ゲージの針を取り付けます。シリンジプランジャーをそっと押して、PBSのジェットストリームを作成します。顕微鏡下で作業し、まず、このPBSの流れをRPEに向け、小さな裂け目や穴を開けます。次に、PBSのストリームを作成した開口部に向け、RPEをシートとして脈絡膜から切り離します。脈絡膜からRPEを剥離した後、RPE細胞を針のない1ミリリットルのシリンジに集め、採取したサンプルを1.5ミリリットルのチューブに移します。回収したRPEでチューブを8, 000 x gで1分間遠心分離し、RPEペレットを得た。RNA分析に使用するサンプルの場合は、上清、つまりPBS溶液を廃棄し、RNA分離キットに含まれている350ミリリットルの溶解バッファーと交換してください。内容物を20回上下にピペットして、よく混合し、サンプルの品質を維持します。長期保存と保存のために、サンプルをマイナス80°Cの冷凍庫に移します。RNA分離キットを使用し、製造元の指示に従ってRPEサンプルからRNAを分離および収集してから、電気泳動でサンプルの品質を評価します。私

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオでは、ウサギモデルから眼の色素上皮細胞を取得する手順を示しています。これらの細胞は、網膜変性疾患の治療戦略の開発に役立ちます。...

IPEおよびRPE細胞の単離:ウサギの眼から眼の色素上皮細胞を得るための技術

このビデオでは、ブタの眼から虹彩と網膜色素上皮細胞を分離し、in vivoおよびex...

IPEおよびRPE細胞の単離:単離されたブタの眼から色素性上皮細胞を取得する技術

このビデオは、採取したウシの目から網膜色素上皮細胞(RPE)細胞と虹彩色素上皮細胞(IPE)を単離する手順を示しています。単離された細胞を培養して、眼疾患の治療におけるそれらの役割を研究することができます。...

ウシ眼からのRPEおよびIPE細胞の単離:ウシ初代色素上皮細胞の採取および培養手順

ここでは、種々の哺乳動物(マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ)から一次虹彩および網膜色素上皮細胞を単離およびトランスフェクトするプロトコルが提示される。この方法は、ヒトに移管可能なエクスビボ分析およびインビボ研究のための様々なセットアップにおける眼遺伝子治療アプローチを研究するのに理想的である。...

非ウイルス遺伝子治療のための哺乳動物一次色素上皮細胞の単離、培養、遺伝子工学

この原稿では、網膜色素上皮(RPE)細胞をマウスの目から段階的に単離するための簡略化されたプロトコルについて説明しています。このプロトコルには、マウスの目の除核と解剖、それに続くRPE細胞の単離、播種、培養が含まれます。...

初代マウス網膜色素上皮細胞の単離

このプロトコルは局部的に供給されたブタの目から第一次網膜の色素の上皮(RPE)のセルを得、培養するためのプロシージャを概説する。これらの細胞は、幹細胞の高品質な代替品として機能し、 in vitro...

In vitroモデリングのための初代ブタ網膜色素上皮細胞の単離

網膜色素上皮(RPE)は、脈絡膜と網膜との間の重要な障壁として機能し、光受容体などの網膜細胞タイプの健康と機能を促進します。ここでは、成体マウスRPEを単離および培養するための簡単で効果的なプロトコルについて説明します。...

成体マウスからの網膜色素上皮細胞の単離および培養のための簡易法

このビデオでは、我々はマウスの眼の毛様体上皮から網膜幹細胞を分離し、クローン網膜球体を形成する文化の中で、それらを成長させる方法を紹介します。分離されている球は、幹細胞の枢機卿性質を有している：自己再生および多能。...

マウスの眼から網膜幹細胞の単離

人間の皮膚から実行可能な成人上皮幹細胞を単離の迅速、確実な方法が記載されている。方法は、毛包と細胞培養のための単一の細胞懸濁液または組織断片の分離の摘採が続く皮膚のコラーゲンマトリックスの酵素消化を、利用しています。...

ヒト皮膚から大人上皮幹細胞の単離と培養

マイクロRNA（miRNAを）人為-多能性幹（IPS）細胞（IPS-RPE）、および胎児RPE由来のヒト誘起多能性幹（IPS）細胞、網膜色素上皮（RPE）のプロファイルは、比較した。...

ヒトiPS細胞のマイクロRNA発現プロファイル、IPから派生網膜色素上皮、および胎児の網膜色素上皮

学ぶモルモットの眼から網膜色素上皮細胞を分離する簡便な手法。高品質なRPEサンプルを取得し、遺伝子発現解析などの分子生物学研究に応用できます。

モルモットの目からの網膜色素上皮細胞の分離

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