Подготовка и иммунофлуоресцентное окрашивание пучков и клеток отдельных волокон коры и ядра хрусталика глаза

Хрусталик представляет собой прозрачный эллипсоидный орган в передней камере глаза и отвечает за тонкую фокусировку света на сетчатке для создания четкого изображения. Функция хрусталика зависит от его биомеханических свойств, недавно было показано, что сложные взаимосвязи между клетками волокон хрусталика важны для жесткости хрусталика. В то время как специализированная морфология клеток волокон хрусталика была ранее описана с помощью электронной микроскопии, мало что известно о белках, которые необходимы для этих взаимосвязанных мембран.

Предыдущие исследования опирались на срезы ткани хрусталика, которые не позволяют четко визуализировать сложную клеточную архитектуру. Мы создали и усовершенствовали новую технику для точного сохранения сложных мембранных взаимосвязей между клетками волокон хрусталика для окрашивания и конфокальной микроскопии визуализации специфических белков. В этом протоколе также есть новый метод окрашивания волоконных клеток из центра хрусталика, который также известен как ядро хрусталика.

Этот метод открывает путь к пониманию дифференцировки и созревания клеток волокна путем изучения механизмов формирования и изменений в мембранных интердигитациях.