Name: Dissection de SNC larvaire chez Drosophila melanogaster (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Apprenez la dissection du système nerveux central chez les larves de Drosophila melanogaster. Cette technique permet d'exposer le SNC intact pour l'étude de l'expression protéique en neurobiologie du développement.

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<ol><li> Disséquer 3 e stade larvaire, laissant SNC attaché à la cuticule. Placer dans un tube de 1,5 ml. </li><li> Fixer dans du PBS (1x) contenant du formaldéhyde à 2% pendant 40 min avec bascule. ; Utilisation 250ul pour chaque SNC 50-10 disséqués. </li><li> Retirez le formaldéhyde et brièvement laver 3 fois avec du PBS + 0,1% Triton X-100 (PBST). Utiliser une pipette Pasteur finement tiré pour éviter la perte de tissu. </li><li> Blocage des sites de protéines de liaison non spécifiques et de perméabiliser les membranes cellulaires des tissus en incubant 1-8 heures dans le PBST + 5% de SAB, bascule à 4 ° C. </li><li> Incuber dans l&#39;anticorps primaire dilué dans du PBST + 5% à bascule BSA à 4 ° C pendant la nuit. Dilution d&#39;anticorps optimal varie d&#39;anticorps différents. </li><li> Rincez 3x dans le PBST suivi par deux lavages 30min à 4 ° C. </li><li> Incuber dans anticorps secondaire dilué dans du PBST + BSA 5% pour les heures 1-3 bascule à 4 ° C. Rincez 3x dans le PBST suivi par deux lavages 30min à 4 ° C. Si le secondaire est conjugué à un composé sensible à la lumière, enveloppez le tube dans du papier aluminium. </li><li> Disséquer les tissus supplémentaires (si nécessaire) et monter sur des lames. </li></ol>

<ol>
	<li>Lin, D. M., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+and+increased+expression+of+fasciclin+II+alters+motoneuron+growth+cone+guidance.">Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance.</a> Neuron. 13, 507-523 (1994).</li><li>Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=even+skipped+is+required+to+produce+a+trans-acting+signal+for+larval+neuroblast+proliferation+that+can+be+mimicked+by+ecdysone.+Development+128.">even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128.</a> , 1899-1909 (2001).</li></ol>

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

Cette vidéo montre comment disséquer le système nerveux central du troisième stade drosophile larves. Après dissection, le CNS peut être teint en utilisant un protocole d&#39;immunohistochimie standard. Actuellement, il reste encore beaucoup à découvrir sur la façon dont le système nerveux adulte est généré ainsi que la façon dont il stocke et transmet des informations. Les études sur le développement des larves du SNC chez la drosophile devrait améliorer nos connaissances sur le câblage du système nerveux et la fonction. Larves de ...

<table><tbody><tr><td>Pinces</td><td>à extrémité fine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Verre de montre à 9 alvéoles</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Boîte de Pétri en plastique</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissection de snc larvaire chez drosophila melanogaster

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Le système nerveux central (SNC) des larves de drosophile est complexe et mal comprise. Une façon d&#39;enquêter sur le système nerveux central est d&#39;utiliser l&#39;immunohistochimie pour examiner l&#39;expression du roman de diverses protéines marqueurs. Coloration des larves ensemble est impraticable parce que la cuticule dure empêche les anticorps de pénétrer à l&#39;intérieur de la cavité corporelle. Afin de colorer ces tissus, il est nécessaire de disséquer l&#39;animal avant fixation et coloration. Dans cet article, nous démontrons comment disséquer larves de drosophile, sans endommager le système nerveux central. Commencez par déchirer la larve de moitié avec une paire de pinces fines, puis tournez la cuticule «inside-out&quot; pour exposer le système nerveux central. Si la dissection est effectuée avec soin la SNC restera attaché à la cuticule. Nous conservons généralement le SNC attaché à la cuticule au long des étapes de fixation et de coloration, et seulement de supprimer complètement le SNC de la cuticule, juste avant le montage des échantillons sur des lames de verre. Nous montrons aussi quelques images représentatives d&#39;une SNC larvaires colorés avec Eve, un facteur de transcription exprimé dans un sous-ensemble de neurones dans le SNC. L&#39;article conclut par une discussion de quelques-unes des utilisations pratiques de cette technique et les difficultés qui pourraient surgir.

Dans cet article, nous démontrons comment disséquer le système nerveux central du troisième stade drosophile larves.

Dissection de SNC larvaire chez Drosophila melanogaster

Le système nerveux central (SNC) des larves de Drosophila est complexe et encore mal compris. L'une des méthodes pour étudier le SNC consiste à utiliser l'immunohistochimie pour...

Je m'appelle Nate Fer. Je suis étudiant diplômant ici à Princeton. Bon. Ce que vous voulez faire, c'est trouver le ver, puis le transférer dans une boîte contenant du PBS.Voilà à quoi ils vont ressembler : vous les déchirez en deux et toutes les entrailles s'échappent. Ici, j'ai donc la cuticule avec un ensemble de structures internes, et je m'assure qu'elle est bien retournée et que le SNC est toujours attaché. Compris. Oui. Il est juste là.Juste là. Lequel ? Vous pouvez le voir sur la pince de ma droite.Voilà, vous avez deux lobes distincts, puis le système nerveux central lui-même qui s'étend vers le bas comme une racine pivot, juste ici sur le côté droit des crochets buccaux foncés et du reste de la cuticule. Souhaitez-vous séparer le système nerveux central de cette manière ? Oui, bien sûr.Je peux le faire. Et cela correspond à une vue de dessus. Vous voyez donc les deux lobes, puis vous voyez le système nerveux central lui-même.Alors, pourquoi réalisez-vous cette expérience ? Eh bien, nous souhaitons étudier l'expression des protéines dans le système nerveux des larves. La meilleure méthode consiste donc à disséquer le tissu larvaire.Et comme il est difficile pour les anticor

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Drosophile larvaire JNM Dissection

Drosophila melanogaster larves fournir un système modèle idéal pour étudier les mécanismes du transport axonal dans les larves de nerfs segmentaires. En utilisant cette procédure, 3 e stade larvaire porteuses de mutations différentes peuvent être comparés à des larves de type sauvage.

Visualisation des larves nerfs segmentaires en 3 Rd Instar Drosophile Les préparatifs des larves

Nous décrivons une flippase induite intersectionnelle Gal80/Gal4 répression (FINGR) méthode, permettant tissu-spécifique FLP pour déterminer les profils d'expression GAL80. Partout où Gal4 et le chevauchement FLP, Gal4 expression est activée (GAL80 flippé) ou désactiver (GAL80 basculé dans). La méthode FINGR est polyvalente pour l'analyse clonale et la cartographie des circuits neuronaux.

Application de cartographie et de Enhancer-trap expression flippase dans larvaire et adulte Drosophile SNC

Cette vidéo décrit comment disséquer et isoler le cerveau adulte de la drosophile – une procédure nécessaire pour visualiser l’organe, qui est autrement obscurci par la cuticule, l’œil et le tissu trachéal. L’exemple de protocole montre une démonstration détaillée produisant des préparations de haute qualité qui peuvent être utilisées pour les méthodes d’immunocoloration et d’imagerie en neurobiologie de la drosophile.

drosophile Dissection cérébrale chez l’adulte : une méthode de neurobiologie des mouches

Cette vidéo montre la dissection et le montage d’explants cérébraux de larves de drosophile. Le système nerveux central (SNC), attaché aux disques oculaires, est extrait des larves, puis monté sur une lame de verre dans une solution saline physiologique.

Dissection et montage d’explants de cerveau de larves de mouches des fruits

Un paradigme blessures en utilisant le cordon Drosophile larvaire nerveuse ventrale pour enquêter régénération du système nerveux central et de la réparation est décrite. Stabbing suivi par microscopie confocale à balayage laser dans des échantillons de time-lapse et fixe, combinée à une analyse quantitative d'un logiciel développé à dessein et de la génétique, sont utilisées pour étudier les mécanismes moléculaires de la régénération du SNC et de réparation.

Un paradigme d&#39;enquêter sur les blessures du système nerveux central de réparation de<em&gt; Drosophila</em

Ce protocole détaille une méthode simplifiée utilisée pour effectuer l'imagerie des cellules vivantes dans le cadre d'un cerveau intact larvaire. Approches d'imagerie des cellules vivantes sont très précieux pour l'étude des divisions de cellules souches neurales asymétriques ainsi que d'autres processus neurogène et de développement, les mécanismes qui ont été précédemment négligés découvrant constamment.

Imagerie en direct de<em&gt; Drosophila</em&gt; larves Neuroblastes

Ce protocole décrit la dissection et immunostaining des adultes Drosophila melanogaster tissus du cerveau. Plus précisément, ce protocole met en évidence l’utilisation de Drosophila champignon corps et photorécepteur neurones comme des sous-ensembles neuronale exemple qui peuvent être utilisés avec précision afin de découvrir les principes généraux de nombreux aspects du développement neuronal.

Dissection et immunofluorescence souillant de champignon corps et photorécepteur de neurones dans le cerveau adulte Drosophila melanogaster

Ce protocole décrit une méthode pour enregistrer l’activité électrique descendante du système nerveux central Drosophila melanogaster pour permettre le rapport coût-efficacité et pratique essais d’agents pharmacologiques, les mutations génétiques des protéines neuronales, et/ou le rôle des voies physiologiques inexplorées.

Enregistrement électrophysiologique de l’activité du système nerveux Central du troisième stade de Drosophila Melanogaster

Ce protocole décrit trois étapes pour préparer les lobes optiques de la drosophile larvaire et adulte à l’imagerie : 1) dissections cérébrales, 2) immunohistochimie et 3) montage. L’accent est mis sur l’étape 3, car des orientations de montage distinctes sont nécessaires pour visualiser des structures spécifiques du lobe optique.

Dissection, immunohistochimie et montage de cerveaux de drosophiles larvaires et adultes pour la visualisation du lobe optique

Ici, nous discutons d’un flux de travail pour préparer, disséquer, monter et imager des cerveaux d’explants vivants de larves du troisième stade de Drosophila melanogaster afin d’observer la dynamique cellulaire et subcellulaire dans des conditions physiologiques.

Imagerie de cellules vivantes du cerveau larvaire du troisième stade de Drosophila melanogaster

Apprenez la dissection du système nerveux central chez les larves de Drosophila melanogaster. Cette technique permet d'exposer le SNC intact pour l'étude de l'expression protéique en neurobiologie du développement.

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Dissection de SNC larvaire chez Drosophila melanogaster

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