Name: MCF - 7 세포주에서 세포 독성 Nanogenomedicine의 : MTT 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-03T00:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 34 s
Description: 학습하세요 MCF-7 세포에서 MTT 분석을 이용한 나노유전체의학 세포독성 평가 방법입니다. 이 프로토콜은 미토콘드리아 활성 기반 색소법으로 세포 생존율을 정량화하여 나노의학 안전성 평가에 활용됩니다.

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저자는 선물로 주입에 대한 페놀 빨간색과 멸균 물없이 DMEM을 제공하는 각각 줄기 세포 기술과 샤히드 Ghazi 타브 리즈 회사를 인정하고 싶습니다.

96 - 웰 플레이트에 MCF - 7 시딩 : MCF - 7 세포는 37 Dulbecco의 수정된 이글의 중간 (DMEM) 10 % FBS, 100 U / ML 페니실린, 100 μg / ML 스트렙토 마이신을 포함하는 배지에서 25 T - 플라스크에 교양되었습니다 ° C 5% CO 2, 95 %를 공기와 습기 완료. 일단 ~ 90 % confluency에 도달, 그들은 0.05 % 트립신 / EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)를 사용하여 분리하고 trypan 파란색과 hemocytometer에 의해 계산되었다. 이러한 전지는 다음 4 농도 × 10 4 세포 / cm 2 resuspended 및 8 채널 피펫으로 (즉, 250 μl / 음) 96 - 웰 플레이트에 추가되었습니다. 배경 흡수 들어, 일부 우물은 빈 제어로 휴대가없는, 즉 남아 있었다. 다른 nanopolyplexes와 세포 치료 : 40-50%에서 (48 시간 이후에 씨를 뿌린다) confluency, 재배 전지 nanostructured 스타 버스트 polyamidoamine의 dendrimers (즉, Superfect ® 및 Polyfect ®)와 공급자가 제공한 transfection 지침에 따라 새로운 테스트 폴리머로 치료했다. 세포는 또한 EGFR 대우 혼자 안티 센스를 스크램블하고,이 두 oligonucleotides의 세 가지 nanopolyplexes과 고분자 (n은 = 4)되었습니다. 푸르 웰스는 제어로 치료 남아 있었다. 사시간 후 치료 미디어가 제거되었습니다 신선한 미디어 보충함. 세포 생존 능력을 평가하기위한 MTT 분석 : MTT 분석은 transfection 후 24 시간을 수행했다. 이러한 목적으로, MTT 솔루션은 PBS에 1mg/ml에서 준비되었으며 0.2 μm의 필터를 통해 필터링했습니다. 그런 다음, MTT 플러스 페놀 레드없는 DMEM 200 μl 50 μl은 세포가없는 빈 우물 제외하고, 각 우물에 추가되었습니다. 전지는 37 4 시간 동안 incubated되었습니다 ° C 5% CO 2, 95 %의 공기와 완벽한 습도. 사시간 후, MTT 솔루션은 제거하고 DMSO와 25μl 소렌손의 글리신 버퍼 (글리신 0.1M, 0.1M NaCl, 전화 : 10.5 0.1 NaOH)를 200 μl로 대체되었습니다. 접시는 더욱 실온에서 5 분 incubated되었고, 우물의 광학 밀도 (OD)는 570 nm의의 테스트 파장과 630 nm의의 기준 파장에서 플레이트 판독기를 사용하여 결정되었다.

<ol><li>Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+pH+Dependence+of+3-%284%2C5-Dimethylthiazol-2-yl%29-2%2C5-diphenyltetrazolium+Bromide-Formazan+Absorption+on+Chemosensitivity+Determined+by+a+Novel+Tetrazolium-based+Assay%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay.</a> Cancer Research. 49, 4435-4435 (1989).</li>
<li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Colorimetric+Assay+for+Cellular+Growth+and+Survival%3A+Application+to+Proliferation+and+Cytotoxicity+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lmmunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays.</a> Journal of Lmmunological Methods. 65, 55-55 (1983).</li>
<li>Yang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Energy+and+Redox+States+in+the+C6+Glioma+Cells+Following+Acute+Exposure+to+Zn%2C+Se+%2B4+%2C+and+Se+%2B6+and+the+Correlation+with+Apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Mechanisms+and+Methods%22%5BJournal%5D)">Energy and Redox States in the C6 Glioma Cells Following Acute Exposure to Zn, Se +4 , and Se +6 and the Correlation with Apoptosis.</a> Toxicology Mechanisms and Methods. 16 (1), 13-13 (2006).</li>
<li>Spinner, D. M. MTT Growth Assays in Ovarian Cancer, in Ovarian Cancer: Methods and Protocols. Bartlett, J. M. S. , Humana Press, Inc. 175-177 (2000).</li>
</ol>

MTT 분석은 다양한 방법으로 간주하고 이에 따라 세포의 생존은 다양한 치료시 평가 수 있습니다. 결과 formazan의 생산은 세포의 에너지 대사의 수준에 비례하는 것 같아요. 따라서도 세포 증식의 부재에 metabolically 활성 세포를 측정할 수 있습니다. 생산 formazan의 양은 배양 매체에서 MTT의 금액에 비례합니다. 동안 formazan의 최대 금액을 달성하는 데 필요한 MTT의 농도는 다른 세포 라인의 활용도에 따라 변경될 수 있습니다를 생산. 게다가,이 분석을 사용하는 데, 살아있는 세포의 매우 작은 번호가 감지 될 수 있으며, 세척 단계를 필요가 없기 때문에 오류의 발병률은 최소한의 것입니다. formazan의 흡수는 pH의 10.5 1 버퍼를 추가로 극복할 수있는 핸드폰 번호뿐만 아니라 산도에 따라 다릅니다. formazan의 색상은 상온 2 몇 시간 동안 안정합니다. 하나 이상의 접시의 경우에는 컨트롤뿐만 아니라 다른 접시에 포함되어야합니다. 그럼에도 불구하고...

<table><tbody><tr><td>25 T-플라스크</td><td>Orange Scientific</td><td>5510100</td><td></td></tr><tr><td>인산완충식염수</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;수정 イー글 (Modified Eagle)&amp;rsquo;배지 - 고농도 포도당</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5671</td><td></td></tr><tr><td>MTT 분석 (MTT assay)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2128</td><td></td></tr><tr><td>태아송아지혈청</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>페니실린 200,000 u/ml</td><td>CinnaGen</td><td>CR7913</td><td></td></tr><tr><td>스트렙토마이신 200 mg/ml</td><td>CinnaGen</td><td>CR7912</td><td></td></tr><tr><td>트립신/EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3924</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>슈퍼펙트(Superfect)</td><td>Qiagen</td><td>301105</td><td></td></tr><tr><td>폴리펙트(Polyfect)</td><td>Qiagen</td><td>301305</td><td></td></tr><tr><td>EGFR 안티센스</td><td>Eurofins MWG Operon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>스크램블된 안티센스</td><td>Eurofins MWG Operon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>페놀 레드 제외 DMEM</td><td>Life Technologies의 GIBCO</td><td>11880</td><td></td></tr><tr><td>글리신</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8898</td><td></td></tr><tr><td>혈구계수기</td><td>HBG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>8채널 피펫</td><td>TreffLab Transferpette</td><td>96.9918.10.1</td><td></td></tr><tr><td>일회용 시린지 필터 </td><td>Iwaki, Asahi Techno Glass Corp.</td><td>2052-025</td><td></td></tr><tr><td>570 nm 필터가 장착된 플레이트 리더기 &amp;630 nm 필터 </td><td>BioTek</td><td>ELX808</td><td></td></tr><tr><td>뚜껑이 있는 96-웰 플레이트 (평평한 바닥)</td><td>Iwaki, Asahi Techno Glass Corp.</td><td>3860-096</td><td></td></tr><tr><td>층류 작업대</td><td>Esco Products</td><td></td><td></td></tr><tr><td>일산화탄소&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 배양기</td><td>ASTEC</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mcf - 7 세포주에서 세포 독성 nanogenomedicine의 : mtt 분석

Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay

미래 nanogenomedicine (예, 짧은 간섭 RNA와 안티 센스)의 세포 독성은 임상 개발을 방해 수 있습니다. 이들 중, 유전자 기반의 의학 및 / 또는 이동 통신사에서 세포 독성을 이끌어 수 있습니다. 이러한 세포 독성 평가를위한 일반적인 방법론 3의 활용에 따라 크게 좌우된다 - (4, 5 - 디메틸 - 2 - thiazolyl) 널리 사용되었습니다 -2, 5 - 디페닐 - 2 시간 - tetrazolium 브로마이드 (MTT) 분석 세포 mitochondrial 탈수소 효소의 활동을 기반으로하는 colorimetric 접근. 이 현재 조사에서, MCF - 7 세포는 96 - 웰 플레이트에 주사했다 50 % confluency에서 그들은 서로 다른 nanopolyplexes 대우했다, 24 시간 후 MTT 분석을 들어서는. 수용성 황색 MTT는 더욱 dimethylsulfoxide 및 Sornson의 버퍼 산도 10.5에 녹아있는 물에 불용성 보라색 formazan에 metabolically 활성 세포에 의해 대사됩니다. 결과 제품은 570 nm의에서 플레이트 판독기를 사용하여 분광 광도법으로 계량하실 수 있습니다.

MTT 분석은 노란색 MTT의 감소와 물 불용성 보라색 formazan의 생산을 기반으로 세포 생존 능력 평가를위한 간단하고 재현성 colorimetric 분석이다. 여기 nanogenomedicine 치료시 MCF - 7 세포의 생존 능력이 평가되었습니다.

MCF - 7 세포주에서 세포 독성 Nanogenomedicine의 : MTT 분석

미래형 나노유전체 의약품(예: 짧은 간섭 RNA 및 안티센스)의 세포독성은 임상 개발을 저해할 수 있습니다. 이 중 유전자 기반의...

안녕하세요, 제약기술연구센터의 Samaya Mad입니다. 오늘은 다양한 플렉스(plexes)로 세포를 처리한 후, 세포의 생존율을 평가하기 위해 assay를 사용하는 방법을 보여드리고자 합니다. 그럼 시작하겠습니다.먼저, 배지를 제거합니다. 그런 다음 PBS로 세포를 세척합니다. 하지만 오염을 방지하기 위해 먼저 PBS를 교체합니다.이제 새로운 배지로 세포를 세척한 후, 부드럽게 혼합하고 PBS를 완전히 제거합니다. 더 작은 P20 파이펫을 사용하여 트립신을 몇 µL 첨가합니다.팀원 여러분, 모든 세포가 배지로 덮여 있는지 확인하십시오. 이제 플라스크를 가볍게 두드리고 있습니다. 이는 세포를 완전히 분리하는 데 도움이 됩니다.이제 도립 현미경을 통해 세포들이 박리된 것을 확인할 수 있습니다. 트립신 반응을 중단시키기 위해 배지를 첨가합니다. 파이펫팅을 통해 모든 세포가 완전히 박리되었는지 확인합니다.이제 세포를 두 번째 Falcon 튜브로 옮깁니다. 다시 한번 피펫팅을 통해 세포 현탁액이 균질하게 섞이도록 합니다. 세포 현탁액 약 500 µL를 Eppendorf 튜브로 옮깁니다.그런 다음 약 50 µL의 세포 현탁액을 다른 마이크로 튜브에 옮기고, 동일한 부피의 trypan blue를 첨가하여 혼합합니다. 세포 수를 측정하기 위해서는 먼저 헤모사이토미터(hemocytometer)가 필요합니다. 여기에 물을 몇 방울 떨어뜨린 후, 슬라이드 위에 커버글라스를 조심스럽게 덮습니다. 계수 직전에 샘플을 완전히 혼합한 다음, 샘플 세부 사항에 따라 7 µL의 세포 현탁액을 계수 챔버에 넣습니다.과부하가 되지 않도록 주의하십시오. 시험 저장소의 세포 현탁액을 아래로 당긴 다음, 채널 전송 팁을 사용하여 96-well 플레이트에 세포를 분주합니다. 세포가 균일하게 현탁되었는지 확인하기 위해 세포를 혼합합니다.그 다음 세포를 관찰하고, 배지를 제거한 뒤 세척하고, 혈청 및 항체가 없는 배지로 교체합니다. 이 세포들은 반응 배지를 준비하기 위해 27°C에서 15분 동안 배양합니다.먼저 모든 샘플에 필름 및 항체 제거 배지를 추가한 다음, antisense를 추가하고 피펫팅하여 혼합합니다. 다른 샘플들에도 antisense를 추가합니다. antisense를 추가한 후 샘플을 완전히 혼합하고 scramble을 추가합니다.이 샘플에 안티센스(Antisense)를 넣고 혼합합니다. 이제 각 샘플에 서로 다른 폴리머를 첨가하고 혼합합니

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Research

연구

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Biology

생물학

우리는 네이티브 pancratistatin 같은 비교 안티 - 암 활동과 pancratistatin의 소설 아날로그를 합성했습니다, 흥미롭게도, tamoxifen과 조합 치료 noncancerous 섬유아 세포에 대한 최소한의 효과와 대상 mitochondrial에 의한 apoptotic 및 autophagic 유도의 급격한 향상이 나왔고. 따라서, tamoxifen와 함께 JCTH-4는 안전한 안티 암 치료를 제공할 수 있습니다.

인간 유방 선암과 Tamoxifen과 Neuroblastoma 셀의 7-deoxypancratistatin의 소설 합성 C-1 아날로그에 의한 Apoptotic 및 Autophagic 유도의 향상

치료 화합물은 종종 첫 번째 생존 분석과 시험 관내에서 검사합니다. 인간의 관찰자에 의해 블라인드 세포 수는 세포 수의 작은 변화에 매우 민감 할 수 있지만 기능을 평가하지 않습니다. 컴퓨터 생존 분석, 여기에 설명 된대로 객관적인 구조와 기능을 모두 평가할 수 있습니다.

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MTT의 분석에 의해 합성 및 세포 독성 평가 : 항암 금속 합성물

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신경 세포주에 신경 독성과 신경에 관여하는 분자 진학의 윤곽을하는 도구로 실시간 임피던스 기반의 세포 분석기

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다중 스펙트럼 화상 진찰 교류 세포측정을 사용하여 시험관 내 미세핵 분석기를 능력을 발휘하는 자동화된 방법

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낮은 중간 처리량에서 배양 포유류 세포에서 세포 성장 및 생존에 영향을 미치는 화합물을 식별하는 전략

여기에서, 우리는 2D 문화 보다는 생체 내 종양의 물리 화학 구배를 모방하는 3D 암 세포 스페로이드에 있는 생존과 죽음을 평가하기 위한 몇몇 간단한 방법을 제시합니다. 따라서 스페로이드 모델은 생체 내 조건으로의 번역을 개선하여 암 약물 효능의 평가를 허용합니다.

암세포의 3D 스페로이드 배양에서 세포 생존력과 사망 평가

이 절차는 시험관 내에서 고급 3D 간 배양을 개발하는 데 사용되기 위해 설립되었으며, 급성 또는 장기, 반복 투여 요법 모두에 걸쳐 나노 물질 노출과 관련된 물질 독성 위험의 보다 생리적으로 관련 된 평가를 제공 할 수 있습니다.

장기 나노 물질 노출 다음 체외 물질 독성 테스트를 위한 고급 3D 간 모델

이 프로토콜은 세포 생존 가능성을 효율적으로 결정하기 위한 신속하고 높은 처리량, 신뢰할 수 있고 저렴하며 편견없는 분석서를 설명합니다. 이 분석은 세포의 미토콘드리아가 손상되어 다른 분석과 방해가 되는 경우에 특히 유용합니다. 분석은 두 개의 핵 염료로 염색 된 세포의 자동 계수를 사용합니다 - Hoechst 33342 및 프로피듐 요오드.

미토칸 세포 독성의 정확한 측정을 위한 자동화된 차동 핵 염색 분석

이 프로토콜은 96웰 플레이트에서 제브라피쉬 배아(ZEM2S) 및 간(ZFL) 세포주의 세포독성 평가에 적합한 일반적으로 사용되는 세포독성 분석(Alamar Blue[AB], CFDA-AM, Neutral Red 및 MTT 분석)을 제시합니다.

Zebrafish 세포주를 이용한 세포독성 분석

다음 연구는 실시간 고처리량 스크리닝 기술인 전기 전지-기질 임피던스 감지(ECIS)를 활용하여 선택된 금속-유기 프레임워크의 독성학적 프로파일을 평가합니다.

금속-유기 프레임워크 독성 프로파일의 실시간 평가를 위한 전기 전지-기질 감지

학습하세요 MCF-7 세포에서 MTT 분석을 이용한 나노유전체의학 세포독성 평가 방법입니다. 이 프로토콜은 미토콘드리아 활성 기반 색소법으로 세포 생존율을 정량화하여 나노의학 안전성 평가에 활용됩니다.

MCF - 7 세포주에서 세포 독성 Nanogenomedicine의 : MTT 분석

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