SNABEL Förlängning Response (PER) analys i Drosophila

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Snabel förlängning svar eller PER är en smak beteende analysmetod som har använts i flugor och i honungsbin. När snabel tar kontakt med ett attraktivt ämne, förlänger föra dess snabel att konsumera ämnet. Lösningar av olika sockerarter är mycket attraktiva för flyga.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

SNABEL förlängning svar (PER) är en smak beteende analysmetod som har använts i flugor och i honungsbin.

På ytan av flugan mun (labellum) finns hårliknande strukturer som kallas sensilla som rymmer smak nervceller. När ett attraktivt ämne får kontakt med labellum, utökar föra dess snabel att konsumera materialet. SNABEL Förlängning Response (PER) analys mäter detta svar smak beteende, och det är en användbar metod för att lära sig om mat preferenser i en enda fluga. Lösningar av olika sockerarter, t ex sackaros, glukos och fruktos, är mycket attraktiv för de flyga. Effekten av aversiva ämnen kan också testas som minskning av PER när de blandas i en söt lösning.

Trots enkelheten i den grundläggande proceduren, det finns många saker som kan förhindra det från att arbeta. En av de faktorer som kräver uppmärksamhet är flugans lyhörd tillstånd. Den erforderliga svält tid att få flyga till rätt lyhörda staten varierar kraftigt från 36 till 72 timmar. Vi etablerade ett antal kontroller för att utvärdera flugans tillstånd och som tillåter screening av icke-känslig eller hyper-känslig enskilda djur. En annan viktig faktor är hur nivån och placeringen av kontakten till labellum, vilket skulle vara svårt att beskriva med ord. Denna video presentation visar alla dessa tillsammans med flera andra förbättringar som skulle öka reproducerbarheten för denna metod.

Protocol

Svält

  1. Först svälta flyga.
  2. Sätt en liten bit av Kim-torka indränkt med vatten i en tom flaska.
  3. Överföring 20-30 välnärd flyger till den tomma flaskan.
  4. Kontrollera var 12 -24 timmar för att se till att papperet är fuktigt.
  5. Svälta flyga 36-72 timmar.

Fäst flyga

  1. Ta en flyga i en aspirator.
  2. Placera en 200 l gul spets över öppningen. Samtidigt vända och blåsa på den, kan du pressa flyger upp i den gula spetsen.
  3. Försiktigt lite luft att pressa flyga upp till en punkt där den inte kan röra sig.
  4. Genom att använda en rakkniv, sätta ett märke på ungefär flugans öga, sedan suga flyger tillbaka och klipp av spetsen.
  5. Blås försiktigt flugan till läge, men precis innan den når ända till slutet, gör en vinkling avskurna vid den plats där snabel kommer att vara placerad. Du kan göra utan denna vinkling klippa, men det skulle definitivt göra följande processen enklare.

Förbered sackaros vekar

  1. Twist en 6 mm bred remsa av Kimwipes ® papper i en tråd, och dra sönder i små bitar av kon-formade veke (<1 cm).
  2. Dessa små vekar doppades i sackaros lösningar eller vatten och presenteras för snabel genom kontakt.

Förbered kontroller och försöksdjur

  1. Innan du testar något tastants, ger en 4% sackaros lösning på flyga. Detta fungerar som en positiv kontroll. Kassera fluga som inte svarade.
  2. Nästa, testa dH 2 0 på fluga. Detta fungerar som en negativ kontroll. Kasta flyga om det gjorde svara.
  3. Testa dessa kontroller efter att ha testat din tastants.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

I denna presentation har vi gått igenom alla stegen för SNABEL förlängning svar analys. Metoden låter ganska enkelt, men som i många andra beteende-analyser, kan många små saker hindrar analysen från att arbeta. Vi har gått igenom många sådana steg som kräver noggrann uppmärksamhet. Här reemphasize jag några av de viktigaste faktorerna.

En sådan faktor är formen på veken. Jag har visat några av de mycket goda exempel, men naturligtvis i verkligheten allt skulle bli ett kontinuerligt spektrum mellan mycket bra och mycket dåligt. I början kanske du använda saker nära till mycket bra sida, men dag för dag din standard kan börja flytta bit för bit till den inte så bra utbud. Människans uppfattning av så kallade "goda" kan mycket lätt flytta omedvetet. Ett sätt att förhindra detta är att ta en bild av veken du använde i ditt experiment, och jämföra alla bilder sida vid sida. Eller åtminstone ta en bild av vekar som fungerade mycket bra, och stirrar på den en stund innan testet PERS.

En annan viktig sak är hur nivån på kontakten. Det är lättare att handskas med eftersom målet är att göra kontakten så skonsam som möjligt. Om du inte ser flugan huvud rör sig alls, det är det bästa.

Den svält villkoret är den tuffaste faktor att kontrollera. I många smak eller lukt beteendemässiga analyser, är en svält på 24 timmar används väldigt ofta. 24 timmar kan vara mycket bekvämt för människor att göra experimentet, men om du bakre dina flugor i mycket gott skick, detta är en ganska kort period. Men även om du använt en rik fluga mat och kontrollera tätheten exakt, kan fönstret för att testa PER varierar från 36 timmar till 72 timmar. Så, som ett experiment måste jag säga att det är väldigt obekvämt för människor. Det finns en annan faktor som gör det svårare för praktiker. I själva verket skulle det finnas många partier, där fönstret för försöket kan vara mycket kort, eller kanske inte ens existerar alls.

Så det finns några större hinder du måste gå igenom, men det viktigaste är den positiva och negativa kontrollen jag nämnde. Genom att hålla dem standard mycket strikt, kommer du att kunna samla in tillförlitliga data.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Vi tackar Paul Graham för att fungera som en kamera man i videopresentation.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics