Name: Particle Agglutinatie Methode voor Poliovirus Identification (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Leer de deeltjesagglutinatiemethode voor snelle identificatie van poliovirusisolaten met behulp van gelatinedeeltjes gecoat met chimerische moleculen. Deze techniek vereenvoudigt diagnostiek en versnelt resultaten aanzienlijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We zijn dankbaar Junko Wada voor haar uitstekende technische bijstand. We zijn dankbaar aan Prof Akio Nomoto zo vriendelijk het verstrekken van een baculovirus expressie vector voor PVR-IgG2a. Dit onderzoek werd mede ondersteund door subsidies-in-Steun voor de bevordering van de bestrijding van polio en onderzoek voor nieuwe en opnieuw optredende infectieziekten van het ministerie van Volksgezondheid, Arbeid en Welzijn.

1. De voorbereiding van onderhoud medium (MM) en groeimedium (GM) Voor de voorbereiding van MM en GM, zie een Polio laboratorium handleiding van de WHO een. Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium (DMEM) aangevuld met 2% foetaal kalf serum (FCS) en 10% FCS kan worden gebruikt als vervangers van MM en GM respectievelijk. 2. Voorbereiding van de anti-PV-antilichamen <ol><li> Reconstitueer anti-PV-antilichaam (RIVM PV typen antiserum) door toevoeging van water (0,5 ml per flesje) aan elk flesje van anti-PV-antilichaam (type 1, 2 of 3). Voeg deze gereconstitueerde antilichaam-oplossingen (0,5 ml per stuk) tot 4,5 ml van de MM in aparte label buizen. Opmerking: Sommige tal van anti-PV-antilichaam worden geleverd als gereconstitueerd vorm (0,5 ml per flacon). Voor zulke veel anti-PV-antilichaam, toevoeging van water voor de reconstitutie is niet nodig. </li><li> Meng gelijke volume van de gereconstitueerde anti-PV-antilichaam. Voor de anti-PV1 +2, 2 +3 of 3 +1: Mix 1,8 ml van elk gereconstitueerd antilichaam (1,8 ml + 1,8 ml = 3,6 ml voor elk mengsel). Voor de anti-PV1 +2 +3: Mix 1,2 ml van elk gereconstitueerd antilichaam (1,2 ml + 1,2 ml + 1,2 ml = 3,6 ml). Let op: PV monsters kan een mengsel van verschillende serotypen van PV bevatten. Om een ​​serotype van PV te identificeren in monsters met een mengsel van PV's, zwembaden van anti-PV-antilichamen (dat wil zeggen 1 +2, 2 +3, 3 +1, 1 +2 +3) nodig is. </li><li> Voeg 1 / 5 volume van de FCS (0,72 ml) voor elke anti-PV (1 +2, 2 +3, 3 +1 of 1 +2 +3) antilichaam (3,6 ml per stuk) (laatste 18,2% FCS). Let op: Toevoeging van FCS is voor de reductie van niet-specifieke agglutinatie van gelatine deeltjes wordt veroorzaakt door antilichamen. </li><li> Houd het antilichaam zwembaden bij -20 ° C tot gebruik in de PA-test. </li></ol> 3. Reconstitutie van de gesensibiliseerde gelatine deeltjes <ol><li> Voeg 1,5 mL van reconstitutie buffer opgenomen in de kit om een ​​flacon van de gesensibiliseerde gelatine deeltjes (geleverd als gevriesdroogd poeder). </li><li> Meng alles goed door zachtjes te tikken </li><li> Houd de gereconstitueerde gevoelig deeltje bij 4 ° C. Gereconstitueerde gelatine deeltjes kunnen actief zijn minstens 2 weken bewaard bij 4 ° C, maar moet worden voorbereid vlak voor de test. </li></ol> Belangrijke opmerking: Meng geen ander lot van de gesensibiliseerde gelatine deeltjes, omdat de niet-agglutinatie imago van de gesensibiliseerde gelatine deeltjes kunnen verschillend zijn door het lot van de deeltjes. Voor elk experiment moet een enkele partij van de gesensibiliseerde gelatine deeltjes worden gebruikt. 4. PA test voor PV-identificatie <ol><li> Bereid een micro-titratie plaat. Voor de identificatie van een virus monster, moeten we vijf waterputten + ten minste een negatieve controle (gesensibiliseerde deeltjes zonder virus en antilichamen, goed # 6 in hieronder. See No-virus en antilichamen controle in voorbeeld). Totaal aantal putten is 5 x monsters + ten minste een controle in de test. Belangrijke opmerking: Neem ten minste een No-virus en antilichamen controle in de test. Een flacon van de gesensibiliseerde deeltje is ongeveer voor de identificatie van 10 virusmonsters. </li><li> Voeg 12 ul / putje van de anti-PV-antilichaam of GM om de micro-titratie plaat. De plaatsing van de plaat is als volgt (zie ook voorbeeld hieronder). In monsters zonder antilichaam (zowel # 1 en 6), voeg 12 ul van GM in plaats van anti-PV-antilichaam. Belangrijke opmerking: Als er veel PV-monsters moeten worden getest in deze test, zou multichannel pipet of dispenser nuttig zijn voor deze stap. <table border="1"><tbody><tr><td> Goed # 1 </td><td> Goed # 2 </td><td> Goed # 3 </td><td> Goed # 4 </td><td> Goed # 5 </td><td> Goed # 6 </td></tr><tr><td> GM </td><td> anti-P1 +2 +3 </td><td> anti-P1 +2 </td><td> anti-P2 +3 </td><td> ani-P1 +3 </td><td> GM </td></tr></tbody></table></li><li> Voeg 12 ul / putje van het virus monster. In een monster zonder virus (ook # 6), voeg 12 ul van GM in plaats van het virus oplossing. Let op: Virus monster is kweeksupernatant van geïnfecteerde cellen, meestal L20B cellen of RD-cellen. Belangrijke opmerking: Als er veel PV-monsters moeten worden getest in deze test, zou meerkanaalspipet nuttig zijn voor deze stap. <table border="1"><tbody><tr><td> Goed # 1 </td><td> Goed # 2 </td><td> Goed # 3 </td><td> Goed # 4 </td><td> Goed # 5 </td><td> Goed # 6 </td></tr><tr><td> virus monster </td><td> virus monster </td><td> virus monster </td><td> virus monster </td><td> virus monster </td><td> GM </td></tr></tbody></table></li><li> Neem gereconstitueerde gesensibiliseerde deeltjes oplossing van 4 ° C tot kamertemperatuur, en tik om volledig te schorsen van de deeltjes. Belangrijke opmerking: Na volledige schorsing van de deeltjes door zachtjes te tikken, moet de deeltjes onmiddellijk toegevoegd worden aan de platen voor de zwevende deeltjes neerslagte vormen en niet-homogene oplossing. </li><li> Voeg 25 ul / putje van de gesensibiliseerde deeltjes om alle putten. Belangrijke opmerking: Na toevoeging van de gesensibiliseerde deeltjes, moet de plaat onmiddellijk worden onderworpen aan bord mengen om een ​​uniforme reactie van de monsters te beginnen. Daarom moet toevoeging van de gesensibiliseerde deeltjes worden uitgevoerd door gebruik te maken dispenser met een tijdsverschil tussen de monsters in de plaat te minimaliseren. </li><li> Doe de micro-titratie plaat op een bord mixer en meng de plaat gedurende 30 sec. </li><li> Doe de micro-titratie plaat op wit papier (voor het gemak van de visuele waarneming) op een tafel bij kamertemperatuur (15 ~ 30 ° C) gedurende 2 uur Belangrijke opmerking: Beweeg niet de plaat tijdens en na de reactie voor het observeren van de resultaten en het nemen van foto's. De gevormde agglutinatie is niet stabiel en makkelijk verstoord door het bewegen van de platen. </li><li> Maak foto's van de plaat. Belangrijke opmerking: Gedeeltelijke weergave van de foto's niet konden geven voldoende gegevens voor later onderzoek en evaluatie van de resultaten voor interpretatie. Meerdere foto's moeten worden genomen om alle putjes van de platen zich richt op de agglutinatie beeld van de putten te dekken. </li></ol> 5. Interpretatie van de resultaten <ol><li> Identificatie van positieve en negatieve putten. Vergelijk de agglutinatie in de monsters met die van No virus en antilichamen controle (neerslag van gelatine deeltjes, niet-agglutinatie) (figuur 1 en 2). Beelden van agglutinatie die duidelijk onderscheiden van No virus en geen antilichamen controle (niet-agglutinatie, negatieve controle) moet worden beoordeeld als positief, en de beelden van agglutinatie die vergelijkbaar zijn met de negatieve controle moet worden beoordeeld als negatief. Monsters die duidelijk, maar slechts gedeeltelijke agglutinatie vertonen kan worden beoordeeld als positief, maar opnemen als 'Positive (gedeeltelijke agglutinatie)'. </li><li> Identificatie van de PV. Interpreteer de resultaten op basis van positieve en negatieve putten met anti-PV-antilichamen tegen PV-serotypen te identificeren. Principe van de interpretatie van het resultaat is vergelijkbaar met die van de neutralisatie test in celkweek systeem (bijvoorbeeld positief voor anti-P1 +2 antilichaam geeft aan dat het monster type 3 PV bevat). </li></ol> 6. Representatieve resultaten Representatief resultaat van PA-test PV identificatie is weergegeven in figuur 1. Alle PV-stammen gevormd agglutinatie van de gesensibiliseerde gelatine deeltjes (geen antilichamen monsters). In aanwezigheid van overeenkomstige anti-PV-antilichamen, neerslag van gelatine deeltjes (niet-agglutinatie), vergelijkbaar met No virus en geen antistoffen controle (negatieve controle) werd waargenomen (bijv., PV1 (Sabin) in de aanwezigheid van anti-P1 +2 of anti-P3 +1 antilichamen). <img src="/files/ftp_upload/2824/2824fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Identificatie van de PV door de PA-test. Virus oplossingen van PV1 (Sabin), PV2 (Sabin), en PV3 (Sabin) (virus titers van 1,2 x 10 8 CCID 50/12 uL, 8,2 x 10 7 CCID 50/12 uL, en 3,5 x 10 7 CCID 50/12 uL, respectievelijk) werden gebruikt voor de identificatie door PA-test. Geen virus en geen antistoffen controle toonde aan neerslag van gelatine deeltjes (niet-agglutinatie, negatieve controle). <img src="/files/ftp_upload/2824/2824fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Interpretatie van de positieve en negatieve putten. Virus oplossingen van PV1 (Sabin), PV2 (Sabin), en PV3 (Sabin) (virus titers van 2,4 x 10 8 CCID 50/25 uL, 1,7 x 10 8 CCID 50/25 uL, en 7,3 x 10 7 CCID 50/25 uL, respectievelijk) werden verdund 1 / 20 tot 1 / 320, en daarna 25 il van verdunde monsters werden onderzocht door PA-test zonder anti-PV-antilichamen.

<ol><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Polio+Laboratory+Manual+%284th+edition%29+WHO%2FIVB%2F04.10%22">Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10</a>. , 4th Edition, World Health Organization. (2004).</li>
<li>Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+particle+agglutination+method+with+soluble+virus+receptor+for+identification+of+poliovirus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus.</a> J. Clin. Microbiol. 48, 2698-2702 (2010).</li>
<li>Bibb, J. A., Witherell, G., Bernhardt, G., Wimmer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+poliovirus+with+its+cell+surface+binding+site%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Interaction of poliovirus with its cell surface binding site.</a> Virology. 201, 107-115 (1994).</li>
<li>Koike, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+poliovirus+receptor+protein+is+produced+both+as+membrane-bound+and+secreted+forms%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J.+9%22%5BJournal%5D)">The poliovirus receptor protein is produced both as membrane-bound and secreted forms.</a> Embo J. 9. , 3217-3224 (1990).</li>
<li>Mendelsohn, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+a+human+poliovirus+receptor+gene+into+mouse+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Transformation of a human poliovirus receptor gene into mouse cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 83, 7845-7849 (1986).</li>
<li>Mendelsohn, C. L., Wimmer, E., Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+receptor+for+poliovirus%3A+molecular+cloning%2C+nucleotide+sequence%2C+and+expression+of+a+new+member+of+the+immunoglobulin+superfamily%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cellular receptor for poliovirus: molecular cloning, nucleotide sequence, and expression of a new member of the immunoglobulin superfamily.</a> Cell. 56, 855-865 (1989).</li>
<li>Arita, M., Koike, S., Aoki, J., Horie, H., Nomoto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+poliovirus+with+its+purified+receptor+and+conformational+alteration+in+the+virion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Interaction of poliovirus with its purified receptor and conformational alteration in the virion.</a> J. Virol. 72, 3578-3586 (1998).</li>
<li>McDermott, B. M., Rux, A. H., Eisenberg, R. J., Cohen, G. H., Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+binding+affinities+of+poliovirus+for+its+cellular+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Two distinct binding affinities of poliovirus for its cellular receptor.</a> J. Biol. Chem. 275, 23089-23096 (2000).</li>
<li>Pipkin, P. A., Wood, D. J., Racaniello, V. R., Minor, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+L+cells+expressing+the+human+poliovirus+receptor+for+the+specific+detection+of+polioviruses+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterisation of L cells expressing the human poliovirus receptor for the specific detection of polioviruses in vitro.</a> J. Virol. Methods. 41, 333-340 (1993).</li>
<li>Avoort, H. G. vander <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+five+methods+for+intratypic+differentiation+of+polioviruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative study of five methods for intratypic differentiation of polioviruses.</a> J. Clin. Microbiol. 33, 2562-2566 (1995).</li>
<li>Kilpatrick, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+group-%2C+serotype-%2C+and+vaccine+strain-specific+identification+of+poliovirus+isolates+by+real-time+reverse+transcription-PCR+using+degenerate+primers+and+probes+containing+deoxyinosine+residues%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid group-, serotype-, and vaccine strain-specific identification of poliovirus isolates by real-time reverse transcription-PCR using degenerate primers and probes containing deoxyinosine residues.</a> J. Clin. Microbiol. 47, 1939-1941 (2009).</li>
</ol>

Souji Masujima is een medewerker van New Product Design Department, Fujirebio Inc

Het unieke punt van deze PA test is het gebruik van de PVR molecuul in plaats van anti-PV-antilichamen voor de detectie van PV-2. Dit maakt een specifieke interactie van de gesensibiliseerde gelatine deeltjes met PV met een uniforme affiniteit voor alle drie serotypen van PV 3-6. We gebruikten een immunoadhesine vorm van PVR (PVR-IgG2a) voor de sensibilisering van gelatine deeltjes, omdat de monomere vormen van PVR slechts matig affiniteiten aan de interne bindingsplaats op het virion (dissociatie constante v...

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th><th> Reacties </th></tr><tr><td> Gesensibiliseerd-gelatine deeltjes </td><td> Fujirebio Inc </td><td></td><td> Testkit </td></tr><tr><td> Reconstitutie buffer </td><td> Fujirebio Inc </td><td></td><td> Testkit </td></tr><tr><td> Microtiterplaat </td><td> Fujirebio Inc </td><td></td><td> Testkit </td></tr><tr><td> Anti-PV antilichaam </td><td> RIVM </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

particle agglutinatie methode voor poliovirus identification

Particle Agglutination Method for Poliovirus Identification

In het Global Polio Eradication Initiative, laboratoriumdiagnose speelt een cruciale rol door het isoleren en het identificeren van PV uit de ontlasting monsters van acute slappe verlamming (AFP) gevallen. In de World Health Organization (WHO) Global Polio Laboratory Network, PV isolatie en identificatie worden momenteel uitgevoerd met behulp van celkweek systeem en real-time RT-PCR, respectievelijk. In het post-uitroeiing tijdperk van de PV, zou een eenvoudige en snelle identificatie procedures nuttig zijn voor een snelle bevestiging van polio gevallen bij de nationale laboratoria. In de huidige studie, zullen we laten zien van de procedure van nieuwe PA-assay ontwikkeld voor PV-identificatie. Deze test maakt gebruik van PA interactie van PV-receptor (PVR) molecuul en virion die specifiek is en uniforme affiniteit met alle serotypes van het PV. De procedure is eenvoudig (een stap procedure in reactie platen) en snelle (resultaten kunnen worden verkregen binnen 2 uur van de reactie), en het resultaat is visueel waargenomen (waarneming van de agglutinatie van gelatine deeltjes).

Een recent ontwikkelde nieuwe deeltje agglutinatie (PA) test gebruik te maken van virus-receptor molecuul toegestaan ​​een snelle en eenvoudige identificatie van poliovirus (PV). In dit artikel zullen we de procedure show voor de PA-test voor PV-identificatie.

Particle Agglutinatie Methode voor Poliovirus Identification

Binnen het Global Polio Eradication Initiative speelt laboratoriumdiagnostiek een cruciale rol bij het isoleren en identificeren van PV uit ontlastingsmonsters van acute ...

Het algemene doel van de volgende procedure is om poliovirusisolaten snel te identificeren met behulp van een eenvoudig protocol. Voor deze analyse maken we gebruik van gesensibiliseerde gelatinepartikels gecoat met chimere moleculen die het extracellulaire domein van de menselijke poliovirusreceptor bevatten, verbonden met IgG twee fc. Omdat deze partikels een uniforme affiniteit hebben voor alle serotypes van poliovirusisolaten, treedt agglutinatie van de partikels op bij incubatie met monsters die elk menselijk poliovirus bevatten.Indien er echter antilichamen aanwezig zijn die in staat zijn het specifieke virus in het monster te herkennen, treedt neutralisatie op en wordt agglutinatie voorkomen; met behulp van dit experimentele systeem kan een snelle identificatie van poliovirusisolaten in een enkelstapsreactie worden uitgevoerd. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals de conventionele neutralisatietest, is de eenvoud van de procedure en interpretatie, met als doel de benodigde arbeid te verminderen en de tijd tot de resultaten te verkorten. Voeg om de anti PV one, PV two en PV three antilichamen te reconstitueren 0,5 milliliters

particle-agglutination-method-for-poliovirus-identification

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Het genoom van het influenza A-virus bestaat uit acht afzonderlijke complexen van RNA en eiwitten, de zogenaamde virale ribonucleoproteïne complexen (vRNPs). Dit document beschrijft de glycerol gradiënt zuivering en transmissie elektronenmicroscopie visualisatie van influenza A vRNPs.

Zuivering en Visualisatie van Influenza A Viral ribonucleoproteïne Complexen

In dit artikel wordt een eenvoudige, kwantitatieve, vloeibare fase affiniteit capture assay gepresenteerd. Het is een betrouwbare techniek op de interactie tussen het magnetische kralen en gemerkte eiwitten (bijv. nanobodies) enerzijds en de affiniteit tussen het gemerkte eiwit en een tweede, gemerkt eiwit (bijv. poliovirus) anderzijds.

Een vloeibare fase Affiniteit Capture test met behulp van magnetische korrels aan eiwit-eiwit interactie te bestuderen: het poliovirus-Nanobody Voorbeeld

In this video, we demonstrate an immunoprecipitation assay, called the VLP capture assay, to isolate antigen-displaying virus-like particles, or VLPs, from a sample. The antigen binds with specific antibodies bound to magnetic beads, forming an immobilized antigen-antibody complex that is later separated and stored for further analysis.

The Virus-Like Particles Capture Assay: A Method to Isolate Antigen-Displaying VLPs from a Sample Using Neutralizing Antibody-Conjugated Magnetic Beads

This video demonstrates the imaging-based micro-neutralization assay to analyze the antigenic relations between influenza A and B viruses. It provides a quantitative and visual way to assess the effectiveness of antibodies or other treatments in preventing viral infection.

Analyzing the Antigenic Relationship between Viruses using an Image-Based Microneutralization Assay

Met behulp van atoomkrachtmicroscopie in combinatie met biopanning-technologie hebben we een negatief en positief biopanning-systeem gemaakt om antilichamen te verkrijgen tegen ziektespecifieke eiwitvarianten die aanwezig zijn in elk biologisch materiaal, zelfs bij lage concentraties. We zijn erin geslaagd om antilichamen te verkrijgen voor TDP-43-eiwitvarianten die betrokken zijn bij Amyotrofe Laterale Sclerose.

Roman Atomic Force Microscopy Based Biopanning voor isolatie van morfologie specifieke reagentia tegen TDP-43 Varianten in Amyotrofische Lateraal Sclerose

We bieden een nieuwe strategie om virale replicatiecompartimenten (RC) te isoleren van adenovirus (Ad)-geïnfecteerde menselijke cellen. Deze aanpak vertegenwoordigt een celvrij systeem dat kan helpen om de moleculaire mechanismen die virale genoomreplicatie en -expressie reguleren, evenals de regulatie van virale-gastheerinteracties die in het RC worden gevestigd, te verduidelijken.

Isolatie van virale replicatie compartiment verrijkt Sub-nucleaire fracties uit adenovirus-geïnfecteerde normale menselijke cellen

Met behulp van een gedrukte glycaan-microarray-strategie werd een conventionele 96-wells plaat assay geminiaturiseerd voor analyse van hemagglutinine aviditeit en specificiteit voor sialic acid bevattende receptoren van het influenza A-virus.

Geminiaturiseerde Glycan Microarray Assay voor het beoordelen van Avidity en specificiteit van influenza A-virus hemagglutinine

Hier beschrijven we een enkele cel micro-aspiratie methode voor de scheiding van geïnfecteerde amoebae. Om virale subpopulaties te scheiden in Vermamoeba vermiformis geïnfecteerd door Faustovirussen en onbekende reus virussen, ontwikkelden we het protocol hieronder beschreven en toonden zijn vermogen om twee laag-overvloed roman reus virussen scheiden.

Single cell micro-aspiratie als alternatieve strategie voor de fluorescentie-geactiveerde celsortering voor scheiding van gigantische virus mengsels

Hier presenteren we een protocol om neutralisatie-epitopen te detecteren op antigeen-displaying virusachtige deeltjes (VLP's). Immunoprecipitatie van het van het humaan immunodeficiëntievirus (HIV) afgeleide VLP's wordt uitgevoerd met behulp van envelop glycoproteïnen-specifieke monoklonale antilichamen gekoppeld aan eiwit G-geconjugeerde magnetische kralen. Gevangen VLP's worden vervolgens onderworpen aan SDS-PAGE en Western blot-analyse met behulp van virale kerneiwit Gag-specifieke...

Detectie van neutralisatiegevoelige epitopen in antigenen die worden weergegeven op op virusachtige deeltjes (VLP) gebaseerde vaccins met behulp van een capture-assay

Een uitgebreid laboratoriumprotocol en analyseworkflow worden beschreven voor een snelle, kosteneffectieve en eenvoudige colorimetrische celgebaseerde test om neutraliserende elementen tegen AAV6 te detecteren.

Een stapsgewijze methode om neutraliserende antilichamen tegen AAV te detecteren met behulp van een colorimetrische celgebaseerde test

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerd protocol voor het genereren en zuiveren van adeno-geassocieerde virale vectoren met behulp van een geoptimaliseerde op heparine gebaseerde affiniteitschromatografiemethode. Het biedt een eenvoudige, schaalbare en kosteneffectieve aanpak, waardoor ultracentrifugatie niet nodig is. De resulterende vectoren vertonen een hoge zuiverheid en biologische activiteit, wat hun waarde bewijst in preklinische studies.

Isolatie van adeno-geassocieerde virale vectoren door middel van een eenstaps en semi-geautomatiseerd heparine-affiniteitschromatografieprotocol

Leer de deeltjesagglutinatiemethode voor snelle identificatie van poliovirusisolaten met behulp van gelatinedeeltjes gecoat met chimerische moleculen. Deze techniek vereenvoudigt diagnostiek en versnelt resultaten aanzienlijk.

Particle Agglutinatie Methode voor Poliovirus Identification

Meer video's verkennen