Name: PCR에 의한 날 (30) 돼지 배아의 정확하고 페놀 무료 DNA Sexing (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: 학습하세요 돼지 배아의 성별을 PCR로 정확하게 판별하는 페놀 무첨가 DNA 추출법. 30일령 돼지 배아를 분쇄하여 유해 화학물질 없이 안전하고 경제적인 성 결정을 수행하는 방법입니다.

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저자는 협력과 다음의 연구 자금 지원 기관의 재정 지원을 인정하고 싶습니다 : 앨버타 가축 및 육류 기관 (주), 돼지 고기 CRC, 앨버타 돼지 고기, Hypor 헨드릭스 유전학 회사와 NSERC CRSNG합니다.

동물 관리 지침에 캐나다 협의회와 학부 동물 정책 복지위원회의 승인에 따라 - 알버타 대학의 가축, 임신 모돈은 임신과 태아의 (30)는 수집 된 약의 날 훈련 된 직원에 의해 안락사시켰다. 과정에서 항상 시험 장갑을 사용합니다. 1. 샘플 수집 및 샘플 보관 <ol><li> 방혈 다음 고정 볼트를 사용하여 모돈을 안락사. 각 안락사 모돈에서 생식 책자와 배아를 수집하기 위해 시험 장갑을 착용 할 것. 참고 : 샘플 및 이식란의 신속한 수집을 얼음 또는 액체 질소는 마이크로 어레이 및 qPCR에 다른 분자 작품에 대한 높은 품질의 조직에서 발생합니다 건조. </li><li> 자궁을 해부 부드럽게 기본 자궁 벽 (21)로부터 자신의 배외 (extraembryonic) 태반 막 내의 모든 배아를 분리합니다. 모성 조직 오염이없는 것을 확인합니다. </li><li> 레냉동하기 전에 모든 가능한 배아의 코드 길이와 무게. </li><li> 각각의 배아를 수집하고 즉시 스냅 액체 질소로 냉동 전에 알루미늄 호일을 마무리. </li><li> 직접 -80 ° C 냉장고에 액체 질소에서 냉동 배아를 전송합니다. </li></ol> 2. 연삭 배아 <ol><li> 샘플 수에 필요한 샘플 ID 모든 샘플 튜브 (15 ml)에 라벨하는 분석한다. </li><li> 반 전체에 드라이 아이스와 열 컨테이너를 입력하고 드라이 아이스에 미리 라벨링 샘플 튜브를 삽입합니다. </li><li> 얼음 컨테이너를 건조 C의 냉동고 -80 °에서 미리 냉장 박격포와 방앗 공이를 전송하기 위해 상단에 시험 장갑 또 한 쌍의 겨울 장갑을 착용 할 것. </li><li> 드라이 아이스에 박격포 내부의 냉동 배아를 놓습니다. </li><li> 배아를 커버하고 미세 분말로 유봉으로 갈아 충분한 액체 질소를 따르십시오. </li><li> MICR으로 미리 라벨링 샘플 튜브 배아 분말 전송ospatula (그림 1) 및 -80 ° C의 냉동고에 튜브를 배치합니다. </li><li> 각각의 배아에 대한 깨끗한 사전 냉장 박격포와 유 봉을 사용하여 샘​​플 간의 교차 오염을 방지하기 위해 각 배아를 분쇄 한 후 시험 장갑을 변경합니다. </li></ol> 3. 게놈 DNA 준비 수산화 나트륨 방법 수정 사용 <ol><li> 샘플 수에 필요한 모든 라벨 마이크로 원심 튜브 (1.5 ml)을 분석한다. </li><li> 배아로부터 분말을 함유하는 샘플 튜브를 전송 -80 ° C에 냉동 컨테이너에 드라이 아이스로 앞서 개시한다. </li><li> 각각의 미리 라벨링 된 마이크로 원심 튜브에 50 밀리미터의 NaOH (수산화 나트륨)을 180 μL 피펫. </li><li> 95 ° C에 인큐베이터 및 예열을 켭니다. </li><li> 50 mM의 수산화 나트륨 용액을 함유하는 미리 라벨링 microcentrifuge 관으로 샘플 관으로부터 배아 분말의 정확한 양 (약 5 ~ 10 mg)를 (도 2) 전송 이쑤시개를 사용한다. </li><li> 유 당겨페이지 같은 이쑤시개 천천히 끈적 끈적 끈적한 흰색 투명 같은 물질 (그림 3)과 같이 DNA 용 해물을 시각화합니다. </li><li> 5 분 동안 95 ℃에서 예열 된 인큐베이터 DNA 해물과 마이크로 원심 튜브에 옮긴다. 즉시 얼음으로 가득 스티로폼 상자에 튜브를 전송합니다. </li><li> 직접 microcentrifuge 관에 1 M 트리스 - 염산 20 μl를 추가하고 부드럽게 튜브를 도청하여 섞는다. pH가 원심 분리에 앞서 약 8.0 (그림 4) 보장하기 위해 산도 용지를 사용하십시오. 주의 : 샘플 제제의 다수를 처리 할 때, 랜덤 pH를 확인하는 몇몇 시료를 선택하는 것도 수용 가능하다. </li><li> 불용 조직 파편을 제거하기 위해 실온에서 2 분 동안 미세 원심 2,000 XG에서 DNA 해물과 튜브를 원심 분리기. </li><li> 전송 새로운 튜브로 가기 맑은 상층 액 150 ㎕를 96 웰 플레이트. 참고 : 명확한 DNA 용 해물이 PC에서 템플릿으로 사용할 준비가R 반응하고 2 주 동안 39 ° C에서 안정하다거나 해 -20 ° C에 보관 될 수있다. </li></ol> 4. 디자인 성 특정 PCR 프라이머 <ol><li> NCBI 웹 사이트 http://www.ncbi.nlm.nih.gov에서 돼지 섹스 결정 지역 Y (SRY)에 대한 가입 번호 (NM_214452.3) 및 아연 손가락 단백질 X-링크 (ZFX) 유전자 (XM_005673501.1)을 구합니다 /. </li><li> 복사 및 온라인 프라이머 디자인 도구 이러한 NCBI의 가입 번호를 붙여 넣습니다. 주 : 길이로 Tm GC %의뿐만 아니라 PCR 생성물 크기 (BP) 컴퓨터 스크린 상에 생성된다 (도 5)을 포함하여 가장 프라이머 정보. </li><li> 이 시퀀스 만 각각 SRY 및 ZFX (그림 6)에 대한 X와 Y 염색체에있는 보장하기 위해 현재 돼지 게놈 데이터베이스 (104)에 대해 염기 폭발 프로그램 (BLASTN)를 사용하여 이러한 프라이머의 특이성을 확인합니다. </li></ol> 직접 DNA 해물 5. 게놈 DNA PCR <ol><li> 용도15 ㎕의 PCR 반응을위한 주형으로서 DNA 파쇄물의 1 μL. 참고 : 96 웰 PCR 플레이트에 대한 고 처리량 스크리닝 방법은 멀티 채널 피펫을 사용하여 유사한 방식으로 수행 될 수있다. </li><li> 단지 첫 번째 PCR을 위해 다음을 수행하십시오 시판 알려진 섹스 돼지 게놈 DNA 1 μL (0.5 NG)를 추가하여 더 템플릿 음성 대조군과 양성 대조군을위한 두 개의 추가 튜브에 대해 하나의 PCR 튜브를 준비합니다. 그 후, 양성 대조군으로 성공적인 마지막 sexing 분석에서 샘플을 포함 성 결정을위한 새로운 PCR 반응과 함께 실행. </li><li> 모든 핫 스타트 준비 믹스 PCR 효소를 사용하여 프라이머를 첨가하여 마스터 믹스를 제조 및 PCR 반응의 총 수에 따라 자유로운 물 클레아. PCR 마스터 믹스를 14 μL로 기존의 PCR 튜브에 DNA 용해 액 1 μl를 추가한다. 프라이머를 추가하여 두 성별 특정 유전자의 프라이머를 최종 농도 15 μL의 PCR (R)의 합계는 0.3 μM임을eaction. </li><li> 열 순환기 다음 PCR 프로그램을 설정 : 3 분, 95 ° C 35 사이클 15 초 신장 단계 다음 65 ℃에서 15 초간 어닐링 단계 다음 20 초 용융 단계 98 ° C, 각각의 72 ° C에서. 최종 단계에서, 72 ℃에서 1 분 동안 반응을 부화 성을 결정하는 전기 영동 검증 PCR 튜브를 제거 할 때까지 4 ℃에서 배양을 계속. 참고 : PCR 조건과 최적화 재료 표에 언급 된 PCR 키트의 설명서에 따라 있습니다. </li><li> 2 % TBE 아가 로스 젤을 준비 할 때 비 독성 녹색 형광 SYBR DNA 젤 얼룩의 적절한 금액을 추가합니다. 참고 : 사용할 수없는 경우 에티 디움 브로마이드가 녹색 형광 얼룩 대체 할 수 있습니다. </li><li> PCR 튜브에 로딩 염료 (10 배)의 1.5 μl를 추가하고, PCR 반응 버퍼 상하 피펫 팅하여 잘 섞는다. </li><li> 잘 연구에 시료의 부하 10 μL유엔 적절한 전압 설정을 사용하여 아가 로스 젤 (염료 밴드까지 100 V에서 작은 젤 장치, 150 V에서 96 웰 젤 장치는 젤을 통해 절반 방법을 실행). </li><li> 관찰 및 레이저 스캐너를 사용하여 형광 설정하에 밴드 강도를 조정하고, 겔의 이미지를 캡처. 주 : 일반 겔 메이져는 에티 디움 브로마이드 젤 치환 될 수있다. </li><li> 여성으로 하나의 밴드와 남성과 같은 두 개의 밴드 (그림 7)와 배아를 식별하여 돼지 태아의 성별을 결정합니다. </li></ol>

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</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

돼지 배아의 DNA 섹스 입력과 관련된 기존 프로토콜의 대부분은 초기 착상 전 단계 (15, 16)에만 적합하다. 우리는 성공적으로 임신 후기 돼지 배아 선별에 적합한 프로토콜을 개발했습니다. 이전 연구 6,18 배아의 발달 단계와 유사한 연구에 근거하여, 본 프로토콜은 안전하고 저비용으로되는 것으로 간주된다. 이 프로토콜은 또한 96- 웰 플레이트에 DNA 해물로 전송하여 PCR을 이용하여 성별에 대한 입력 샘플들의 다수 적합하다. 플레이트 포맷은 멀티 채널 피펫을 사용하여 PCR 반응을위한 DNA를 전사 파쇄물 1 μl를 허용함으로써 높은 처리량 스크리닝 할 수있다. 그러나, 절차에 관련된 여러 단계를주의 깊게 수행해야합니다. 보다 효율적으로 변성의 50 mM NaOH를 용해 방법을 수행하기 위해 개별적으로 냉동 배아 미세 분말로 접지되어야사전 냉장 (-80 ° C) 박격포와 유 봉...

돼지는 인간과 가축 부문 모두에서 개발, 유전학과 영양의 기초 연구 대상이되고있다. 인간에 ​​대한 생물 의학 연구 모델로 돼지의 전위 생리적 유사성에 기인 할 수있다. 가축, 성비의 조작 선택 유전자 개선 프로그램 (1)의 효과를 향상시킬 수있다. 개별 배아를 Sexing하는 것은 포함하지만 초기 배아 개발 2시 유전자형, 후성 유전학 성적 이형 태성의 X 불 활성화에 국한되지 많은 실험 연구에 사용되는 기본 도구입니다. 생쥐의 연구는 산모의식이 요법과 다른 요인은 성별 불균형 3 발생할 수 있습니다 것이 좋습니다. 돼지에서 성비 불균형의 원인은 아버지의 품종 4, 자궁 용량 5, 모돈의 대사 상태 (6)을 포함한다. 배아 및 새끼 관찰 차이 자체에 의해 영향을받을 수 있기 때문에xual의 이형 태성은, 연구자들은 자신의 연구에 대한 결론을 도출하기 전에 배아 섹스와 섹스 비율을 알고 있어야합니다. 개발의 날 (30)에 돼지 배아를 sexing을위한 효율적인 툴과 프로토콜의 개발은 여기에서 논의 될 것이다. 섹스 입력의 다양한 방법 모델 생물과 가축의 유전 연구를 위해 개발되었습니다. 특히 가축에, 남성과 여성의 초기 배아를 식별하는 육종 프로그램에 대한 유전 적 선택을 향상시키기 위해 매우 일반적이다. 김사 7 강렬한 형광 8,9 기술을 사용하여 돼지의 핵형 초기 배아는 성 입력을 위해 사용되어왔다. 그러나, 이들 방법은 시간 소모적이고 신속하고 정확하게 다수의 배아 스크리닝에 적합하지 않다. 가장 효과적인 성 입력 방법은 열 안정성 DNA 폴리머 라제 및 프라이머 쌍을 사용하여 DNA의 증폭이다. PCR 법에 의한 DNA의 sexing는 오보다, 특정 신속하고 민감할수 있답니다 다공질 재료의 미세한 양을 요구. 첫 번째 PCR 기반의 배아 sexing 인간 (10)에서 수행하고, 나중에 마우스 (11), 소 (12), 버팔로 (13)와 양 (14) 착상 전 배아에서했다. 돼지에서 초기 DNA 섹스 입력 방법은 Y 염색체 특이 DNA 프라이머 (15)의 한 쌍을 통해 착상 전 배아를 위해 설립되었다. 그러나 성 결정을위한 가장 일반적인 PCR 프라이머 말레 특정 SRY 유전자 (16) 및 X 및 Y 염색체 17 모두에 위치 징크 핑거 유전자의 비 성 차별적 영역의 Y 염색체로부터 선택 하였다. 이어서,이 프라이머는 아연 핑거 유전자의 X- 염색체를 검출하는 프라이머의 향상된 특이성이 연구에서 30 일 된 배아의 성을 확인하기 위해 적용되어왔다. 돼지의 착상 전 배아에서 게놈 DNA를 proteinas와 버퍼링 그대로 배반포를 노출하여 추출 할 수있다전자 K (16) 또는 개별 초기 분열에서 몇 세포의 생검을 고려하여 15 배아 직접 PCR을 위해 그들을 사용. 그러나 돼지의 혈액, 머리카락, 조직 또는 크기가 몇 센티미터 이상의 큰 수태에서 DNA의 방출을 효과적으로 테 K 방법을 사용하여 수행되지 않습니다. 이들 물질에 대한 DNA 추출 방법은 시간이 많이 걸리고, 페놀 / 클로로포름 프로토콜 6 비싼 열 기반 키트 (18)를 사용하여 설정 하였다. 잠재적 독성 화학 물질의 사용을 피하기 위해, 저렴하고 쉬운 페놀없는 DNA 추출 방법을 개발하는 경향이있다. 마우스 (19) 및 (20) 지브라 피쉬 조직으로부터 PCR 품질 게놈 DNA의 분리를위한 프로토콜이 이러한 유형의 핫 수산화 나트륨 및 트리스 (유능한)를 사용하여 구축되었다. 이 연구는 PCR 섹스인가요 수정 및 재 설계 이중 프라이머 쌍은 일의 세포 용 해물 (30) 돼지 배아에 직접 입력하여 DNA를 얻을 수있는 프로토콜을 제공높은 정확도.

<table><tbody><tr><td>KAPA HiFi 핫스타트 레디 믹스 PCR 키트&nbsp;</td><td>KAPABiosystems</td><td>KR0370</td><td>다른 뜨거운 시작 Taq 폴리메라이제는 최적화</td></tr><tr><td>SYBR 안전한 DNA 젤 얼룩</td><td>생활 기술</td><td>S33102</td><td>에티듐 브로마이드가 SYBR 안전한</td></tr><tr><td>돼지 여성과 남성 게놈 DNA</td><td>Zyagen</td><td>GP-160-F1를 대체한 후에 이용될 수 있습니다; GP-160-M5</td><td>알려진 성 DNA의 조직에서 포지티브 컨트롤을 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>Typhoon FLA 9500 레이저 스캐너</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>28-9969-43</td><td>다른 이미징 시스템을 사용할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>무료 소프트 니트릴 검사 장갑</td><td>WWR</td><td>89038-270</td><td>다른 검사 장갑도 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>. 수산화나트륨, 고체&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>BP 359 -212</td><td>분자 생물학 등급</td></tr><tr><td>Eppendorff DNA LoBind 튜브, 1.5 ml, PCR clean</td><td>Eppendorff</td><td>0030 108.051</td><td>내열성</td></tr><tr><td>ThermoStat plus</td><td>Eppendorff</td><td>22670204</td><td>95 &#176용 인큐베이터로 사용; C, 히터를 사용할 필요가 없습니다</td></tr><tr><td>이쑤시개</td><td>Bunzl Plc</td><td>75200815</td><td>모든 둥근 나무 이쑤시개를 사용할 수 있습니다 - 고품질</td></tr><tr><td>목재 마이크로 원심분리기 5417R/5417C</td><td>Eppendorff</td><td></td><td>22621807 이 모델은 단종되었습니다. 그러나 또 다른 새로운 모델은</td></tr><tr>매번 사용하기 전에<td>Microspatula</td><td>Fisher</td><td>SDI28540115</td><td>Autoclaved</td></tr>를 사용할 수 있습니다.</tbody></table>

pcr에 의한 날 (30) 돼지 배아의 정확하고 페놀 무료 dna sexing

Accurate and Phenol Free DNA Sexing of Day 30 Porcine Embryos by PCR

돼지의 태아 프로그래밍에 대한 연구는 배아 또는 태아의 성별이 발달 결과에 영향을 미칠 수있는 것으로 나타났습니다. 따라서, 배아의 성을 확인하는 능력은 특히 초기 개발에 대한 많은 실험이 필요하다. 본 프로토콜은 PCR에 사용할 돼지 게놈 DNA의 저렴하고 신속하고 비 독성 제제를 보여준다. 하루 30 배아는 인도적 본 프로토콜에 대한 기관 동물 정책 및 복지위원회가 설정 한 가이드 라인에 따라 수집해야합니다. 이 PCR 기반 sexing 기술에 대한 전체 배아의 제조는 단순히 미리 냉각 막자 사발을 사용하여 미세한 분말로 분쇄 냉동 배아를 포함한다. PCR 품질 DNA는 알칼리 용해 시약 뜨거운 인큐베이션함으로써 배아 분말 소량 방출된다. 그 다음, DNA 용액을 중화 완충액과 혼합하고 PCR에 직접 사용했다. 두 프라이머 쌍은 detec하기 위해 생성된다높은 정밀도와 특이 X- 염색체의 Y- 염색체 (SRY)와 ZFX 영역의 영역을 결정 t 특정 성. 동일한 프로토콜 일 이전 다른 신장 배아 (주 14 주 10)에 적용 할 수있다 (30)의 자동화 및 높은 것이 가능하게 배아 다수 선별 경우 이러한 프로토콜은 96 솟아 플레이트로 수행 될 수있다 처리량 섹스 입력합니다.

PCR에 의한 DNA 345 스크리닝 용 해물로부터 성 결정의 대표적인 결과가도 7에 도시되고 표 1에 요약 하였다. 도 7에서 알 수있는 바와 같이, 65 ℃에서 프라이머의 어닐링 온도가 다른 시료 중이 PCR 프로토콜에 유사한 강도와 프리디 케이드 앰플 리콘 크기를 생성 (도 5)의 최적의 조건이다. SRY (400 BP)와 ZFX (506 BP)의 두 증폭 된 제품은 젤 사진 (그림 7)에 표시됩니다. 남성 배아는 상부 (400 BP)의 정확한 크기와 하부 (506 bp의) 밴드와 함께 두 개의 ...

이 프로토콜은 페놀 클로로포름 추출 및 DNA 컬럼 정제 없이 배아를 분말로 분쇄한 후 PCR 방법을 사용하여 30일째 돼지 배아의 성별을 결정하는 정확하고 저렴하며 빠르고 무독성 방법을 설명합니다.

PCR에 의한 날 (30) 돼지 배아의 정확하고 페놀 무료 DNA Sexing

Research into prenatal programming in the pig has shown that the sex of the developing embryo or fetus can influence the developmental outcome. Therefore, ...

본 절차의 전반적인 목표는 각 배아에서 추출한 페놀 프리 DNA와 PCR 반응을 위한 한 쌍의 성별 특이적 프라이머 두 종류를 사용하여, 30일 차 돼지 배아의 성별을 정확하게 식별하는 것입니다. 이 방법은 자궁 용량 및 모돈의 대사 상태를 포함한 모체 요인과 다양한 부계 요인이 성비에 미치는 영향 등, 가축의 생식 생리학과 관련된 다양한 질문에 대한 답을 제시할 잠재력을 가지고 있습니다.이 기술의 장점은 DNA 정제 과정에서 페놀-클로로포름과 같은 독성 화학 물질이나 고가의 컬럼을 사용하지 않는다는 점입니다. 이제 본격적으로 시작해 보겠습니다. 이 방법의 시각적 시연은 시료 준비만큼이나 중요합니다.단계는 배우기 쉽지만, 증상 간의 교차 오염을 방지하기 위해 세부 사항에 각별한 주의를 기울이는 것이 중요합니다. 텍스트에 따라 배아 샘플을 -80 °C 냉동고로 옮기십시오. 분석할 샘플 수에 맞게 필요한 샘플 ID를 샘플 튜브에 라벨링하십시오.보온 용기의 절반을 드라이아이스로 채운 뒤, 라벨이 부착된 샘플 튜브를 드라이아이스에 삽입하십시오. 방한 장갑 위에 검진용 장갑을 겹쳐 낀 상태에서, -80 °C 냉동고에 보관되어 있던 냉각된 막자사발과 막자를 드라이아이스 용기로 옮기십시오. 그다음, 드라이아이스 위에 놓인 막자사발 안에 냉동 배아를 넣고, 배아가 완전히 잠길 정도로 충분한 양의 액체 질소를 부으십시오.그리고 유발을 사용하여 고운 가루가 될 때까지 갈아줍니다. 마이크로스파출러를 사용하여 배아 분말을 미리 라벨이 붙은 샘플 튜브로 옮기고, 해당 튜브를 -80°C 냉동고에 보관합니다. 추가 배아들에 대해서도 동일하게 분쇄 및 냉동 과정을 반복하며, 교차 오염을 방지하기 위해 샘플 사이에 검사 장갑을 교체합니다.분석할 샘플 수에 맞춰 필요한 모든 마이크로 원심분리 튜브에 라벨을 붙인 후, 배아 분말이 들어 있는 샘플 튜브를 -80°C 냉동고에서 드라이아이스 컨테이너로 옮깁니다. 라벨이 붙은 각 마이크로 원심분리 튜브에 50 mM 수산화나트륨 180 µL를 피펫으로 넣습니다. 인큐베이터를 95°C로 미리 가열해 둡니다.이쑤시개를 사용하여 샘플 튜브에서 약 5~10 mg의 배아 분말을 미리 라벨이 부착된 수산화나트륨 튜브로 옮깁니다. 이쑤시개를 용액에서 천천히 들어 올려 DNA 용해물이 끈적끈적하고 하얗고 투명한 물질로 나타나는지 확인합니다. DNA 용해물이 포함된 샘플을 95 °C 인큐베이터에 5분 동안 넣은 후,

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

고해상도 용융 분석 (르마)와 함께 PCR은 제브라 피쉬의 유전자형에 신속하고 효율적인 방법으로 보여줍니다.

고해상도 용융 분석과 PCR을 이용하여 신속하고 효율적인 Zebrafish의 유전자형

이 프로토콜은 매우 빠르고, 쉽고, 비 침습, 신뢰성과 저비용 수 방법의 편리한 세트, 조류의 분자 성 결정과 자신의 비 침습, 빠르고, 안전하고 쉽게 알아볼 곧 부화 후 마킹을 제공합니다. 병아리의 제한된 처리가 필요합니다. 방법이 편리한 도구는 RRR-지침을 완전히 준수합니다.

누구는 누구입니까? 비 침습적 인 방법 개별적으로 섹스와 마크 Altricial 병아리

Microarray 기술은 게놈 전체에 기초를 둔 transcripts의 정량적 측정 및 유전자 발현 프로파일링을 가능하게 합니다. 따라서 이 프로토콜은 적은 양의 총 RNA를 사용할 수 있는 타당성을 입증하기 위해 Day 7 소 배아를 사용하여 2색 맞춤형 소 어레이에서 최적화된 기술 절차를 제공합니다.

의 사체 프로파일 링 생체 제작 소 착상 전 배아

여기, 우리는 돌고래 정 충, cryopreservation, 수집과 소 oocytes를 사용 하 여 분리 IVF 성능을 위해 성공적으로 사용 된 프로토콜을 제시.

병 코 돌고래 (Tursiops truncatus) 정 충: Cryopreservation, 수집과 Heterologous 체 외에서 수정

여기서는 짧은 처리 시간, 낮은 비용 및 높은 처리량의 장점을 가진 이수성 (PGT-A)에 대한 착상 전 유전자 검사를위한 반도체 염기서열 분석 방법을 소개합니다.

이류성 에 대한 착상 전 유전자 검사를위한 반도체 시퀀싱

이 프로토콜에서, 돼지 특이적 프라이머는 설계되었고, 플라스미드함유 돼지 특이적 DNA 단편이 시공되었고, 수량에 대한 표준 곡선이 확립되었다. cpsDNA는 종별 프라이머를 사용하여 돼지-마우스 세포 이식 모델 및 돼지-원숭이 동맥 패치 이식 모델에서 qPCR에 의해 정량화되었다.

제노이식 모델의 혈액에서 순환 돼지 특이적 DNA의 정량화

본 연구는 배아 생검을 피하고 NGS를 사용하여 염색체 ploidy 식별을 가능하게 하는 폐배양 배지를 사용하는 인간 배아의 염색체 스크리닝 프로토콜을 보고합니다. 본 논문에서는 배양액 제조, 전장 유전체 증폭(WGA), 차세대 염기서열분석(NGS) 라이브러리 준비, 데이터 분석 등 자세한 절차를 제시한다.

사용된 배양 배지를 사용한 인간 착상 전 배아의 염색체 스크리닝: 샘플 수집 및 염색체 배합 분석

초기 개발은 모계 유전 제품에 의존하며 이러한 제품 중 많은 부분의 역할은 현재 알려져 있지 않습니다. 여기에서는 CRISPR-Cas9를 사용하여 단일 세대에서 모성 효과 표현형을 식별하는 프로토콜을 설명했습니다.

모성 크리스펀트를 사용한 초기 발달에서 모계 발현 유전자의 역할 결정

여기에서는 CRISPR RNP 접합체 전기천공(CRISPR-EZ)이라고 하는 유전자 변형 마우스의 효율적인 생성을 위한 간단한 기술을 설명합니다. 이 방법은 100%에 가까운 효율로 배아에 전기천공을 통해 편집 시약을 전달합니다. 이 프로토콜은 포유류 배아의 점 돌연변이, 작은 게놈 삽입 및 결실에 효과적입니다.

접합체의 CRISPR 전기천공에 의한 마우스의 효율적인 게놈 편집

이 논문은 단일 세포 및 핵의 염기서열 분석을 위한 gastrulating mouse embryos의 고품질 single-cell 및 nuclei suspensions를 위한 파이프라인을 설정합니다.

돌연변이 전체 마우스 배아의 단일 세포 RNA 염기서열 분석: epiblast에서 gastrulation 말기까지

학습하세요 돼지 배아의 성별을 PCR로 정확하게 판별하는 페놀 무첨가 DNA 추출법. 30일령 돼지 배아를 분쇄하여 유해 화학물질 없이 안전하고 경제적인 성 결정을 수행하는 방법입니다.

PCR에 의한 날 (30) 돼지 배아의 정확하고 페놀 무료 DNA Sexing

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