Name: دراسة في Complexation من الزئبق (II) مع Dicysteinyl Tetrapeptides التي كتبها Electrospray التأين الطيف الكتلي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-08T13:00:01.000+00:00
Duration: 12 min 59 s
Description: اكتشف تحليل مركبات الزئبق مع الببتيدات ثنائية السيستين باستخدام مطياف الكتلة بالتأين الرشاش الكهربائي. تساعد هذه الطريقة في تصميم عوامل مخلبة لعزل أيونات الزئبق السامة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

MN-S يعترف بدعم من مؤسسة العلوم الوطنية، وروي منح CHE 1011859. والكتاب الامتنان مرفق ثالوث الطيف الكتلي في جامعة كارولينا الشمالية في جرينسبورو لاستخدام مطياف الكتلة الحرارية فيشر LTQ العلمي Orbitrap XL. الكتاب أشكر دانيال تود، فنسنت سيكا، وBrandie Erhmann في جامعة كارولينا الشمالية في جرينسبورو للحصول على اقتراحات وتعليقات مفيدة بشأن هذا العمل.

ملاحظة: يرجى التشاور مع جميع بيانات سلامة المواد ذات الصلة (MSDS) قبل الاستخدام. الزئبق كلوريد هو مادة كيميائية سامة. يجب ارتداء معدات الوقاية الشخصية (القفازات، ونظارات السلامة، ومعطف المختبر) عند تسليمه وجميع الحلول المرتبطة بها. التخلص من الحلول في زجاجات النفايات الكيميائية علامات واضحة المعينة للمعادن الثقيلة. 1. إعداد 5 ملي نزع الغاز الأمونيوم فورمات العازلة، ودرجة الحموضة 7.5 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل 0.1576 غرام من عازلة فورمات الأمونيوم في 450 مل من الماء HPLC الصف. ضبط درجة الحموضة من الحل أعلاه مع 1 M حمض الفورميك و1 M هيدروكسيد الأمونيوم إلى 7.5. نقل هذا الحل إلى 500 مل قارورة حجمية وإضافة الماء HPLC إلى خط المعايرة لجعل 5 ملي حل فورمات الأمونيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ديغا 5 ملي العازلة فورمات الأمونيوم في ظل نظام فراغ لمدة 10 دقيقة وتطهير مع الأرجون. كرر مرتين وحل مخزن تحت الأرجون. في يوم من الاستخدام، تصفية حل العازلة من خلال مرشح 0.2 ميكرون قبل احتساباستخدام البريد. </li></ol> 2. إعداد الزئبق (II) حلول كلوريد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن من 0.2375 غرام من الزئبق (II) كلوريد. حله في 25 مل من 5 ملي العازلة فورمات الأمونيوم لإنتاج 0.035 M الزئبق (II) محلول كلوريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 0.214 مل من 0.035 حل M الزئبق (II) كلوريد إلى 9.785 مل من 5 ملي العازلة فورمات الأمونيوم لإنشاء 7.5 × 10 -4 M الحل. بطانية 7.5 × 10 -4 M الزئبق (II) حل مع غاز الارجون. </li></ol> 3. إعداد CGGC محلول المخزون <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل 2.0 ملغ من رباعي البيبتيد dicysteinyl، CGGC، في 0.118 مل من HPLC الصف الأسيتونتريل ثم قم بإضافة 1.0647 مل من 5 فورمات الأمونيوم ملم، ودرجة الحموضة 7.5 العازلة التي تم نزع الغاز في الأرجون لانتاج ملي CGGC حل سهم 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 225 ميكرولتر من ملي CGGC حل سهم 5 إلى 1275 ميكرولتر من 5 ملم تشكيل الأمونيوم 7.5 درجة الحموضة عازلة لإعطاء 7.5 × 10 -4 M CGGC الحل. </li></ol> 4. إعدادمن مخاليط رد فعل مختلفة من الزئبق (II) وCGGC <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 1: 0.5 نسبة الزئبق (II): CGGC الحل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 255 ميكرولتر من فورمات الأمونيوم 5 ملم، ودرجة الحموضة 7.5 العازلة في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. إضافة 30 ميكرولتر من 7.5 X10 -4 M الحل الزئبق (II) كلوريد في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل مع العازلة فورمات الأمونيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة الحل لمدة 10 ثانية. ثم إضافة 15 ميكرولتر من 7.5 × 10 -4 M CGGC حل في microcentrifuge ل1.5 مل. دوامة الحل لمدة 10 ثانية. اسمحوا الحل الوقوف لمدة 10 دقيقة قبل الحقن في مطياف الكتلة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 1: 1 نسبة الزئبق (II): CGGC الحل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 240 ميكرولتر من فورمات الأمونيوم 5 ملم، ودرجة الحموضة 7.5 العازلة في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. إضافة 30 ميكرولتر من 7.5 X10 -4 M الحل الزئبق (II) كلوريد في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل مع العازلة فورمات الأمونيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة الحل لمدة 10 ثانية. ثمإضافة 30 ميكرولتر من 7.5 × 10 -4 M CGGC الحل في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. كرر بطريقة مماثلة كما هو موضح في القسم 4.1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 1: 2 نسبة من الزئبق (II): CGGC الحل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 210 ميكرولتر من فورمات الأمونيوم 5 ملم، ودرجة الحموضة 7.5 العازلة في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. إضافة 30 ميكرولتر من 7.5 X10 -4 M الحل الزئبق (II) كلوريد في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل مع العازلة فورمات الأمونيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة الحل لمدة 10 ثانية. ثم إضافة 60 ميكرولتر من 7.5 × 10 -4 M CGGC الحل في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. كرر بطريقة مماثلة كما هو موضح في القسم 4.1. </li></ol></li></ol> 5. إعداد التعاون الاقتصادي الأوروبي محلول المخزون <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل 3،5 ملغ من رباعي البيبتيد dicysteinyl، التعاون الاقتصادي الأوروبي، في 0.145 مل من HPLC الصف الأسيتونتريل إلى حل الببتيد. ثم إضافة 13.067 مل من 5 فورمات الأمونيوم ملم، ودرجة الحموضة 7.5 العازلة التي تم نزع الغاز في الأرجون لإنتاج 0.5 مترM التعاون الاقتصادي الأوروبي الحل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة الحل حتى يذوب كل الببتيد. إضافة 1.125 مل من 0.5 ملي حل التعاون الاقتصادي الأوروبي و0.375 مل من 5 ملي فورمات الأمونيوم، ودرجة الحموضة 7.5 العازلة لأنبوب microcentrifuge 1.5 مل لإعطاء 7.5 × 10 -5 M التعاون الاقتصادي الأوروبي الحل. دوامة حتى تمتزج. </li></ol> 6. إعداد خلطات رد فعل مختلفة من الزئبق (II) وحلول التعاون الاقتصادي الأوروبي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 1: 0.5 نسبة الزئبق (II): حل التعاون الاقتصادي الأوروبي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 255 ميكرولتر من فورمات الأمونيوم 5 ملم، ودرجة الحموضة 7.5 العازلة في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. إضافة 30 ميكرولتر من 7.5 X10 -4 M الحل الزئبق (II) كلوريد في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل مع العازلة فورمات الأمونيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة الحل لمدة 10 ثانية. ثم إضافة 15 ميكرولتر من 7.5 × 10 -4 M التعاون الاقتصادي الأوروبي الحل في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. كرر بطريقة مماثلة كما هو موضح في القسم 4.1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 1: 1 نسبة الزئبق (II): حل التعاون الاقتصادي الأوروبي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع 24081؛ ل فورمات الأمونيوم 5 ملم، ودرجة الحموضة 7.5 العازلة في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. إضافة 30 ميكرولتر من 7.5 X10 -4 M الحل الزئبق (II) كلوريد في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل مع العازلة فورمات الأمونيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة الحل لمدة 10 ثانية. ثم إضافة 30 ميكرولتر من 7.5 × 10 -4 M التعاون الاقتصادي الأوروبي الحل في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. كرر بطريقة مماثلة كما هو موضح في القسم 4.1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 1: 2 نسبة من الزئبق (II): حل التعاون الاقتصادي الأوروبي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 210 ميكرولتر من فورمات الأمونيوم 5 ملم، ودرجة الحموضة 7.5 العازلة في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. إضافة 30 ميكرولتر من 7.5 X10 -4 M الحل الزئبق (II) كلوريد في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل مع العازلة فورمات الأمونيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة الحل لمدة 10 ثانية. ثم إضافة 60 ميكرولتر من 7.5 × 10 -4 M التعاون الاقتصادي الأوروبي الحل في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. كرر بطريقة مماثلة كما هو موضح في القسم 4.1. </li></ol></li></ol> 7. Analyزينغ ومخاليط رد فعل من الزئبق (II) وعينات CGGC التي كتبها Orbitrap ESI الطيف الكتلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مطياف الكتلة ESI 16 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم 100 ميكرولتر من المعايير المعايرة في كوب 500 ميكرولتر حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع حقنة في المهد حقنة من مضخة MS، إرفاق الأنابيب، وحقن في معمل الشامل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد اسم الملف على المدى عن طريق اختيار رمز الملف وكتابة اسم الملف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختر زر البيانات تحصل عليها في وحدة الحصول على البيانات وجمع 150 بالاشعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل اللوني للتحقق من معايير المعايرة عن طريق فتح وحدة معالجة البيانات من البرنامج. فتح وحدة، انتقل إلى القائمة ملف واختر &quot;فتح&quot;، وحدد الملف في مربع الحوار. تحقق من أن القمم في اللوني ترتبط إلى كتلة لتوجيه الاتهام نسب للمعايير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف الزجاج 500 ميكرولتر حقنة عن طريق وضع 500 ميكرولتر HPLC الصف الميثانول ثم الاستغناء مالايثانول في كوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 500 ميكرولتر من HPLC الصف الميثانول في حقنة زجاجية وطرد النظام كما في الخطوة 7.1.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد وحدة طريقة إعداد البرنامج لتعيين المعلمات. اختر من القائمة وضع المسح الضوئي وتحديد محلل كما في Ftms، ثم اضغط على &quot;OK&quot;. ثم من خلال النقر على الرموز المختلفة على صفحة عرض الطيف في الوقت الحقيقي، تعيين المعلمات التالية: غمد معدل تدفق الغاز: 10، ودرجة الحرارة المصدر: 0، شعري الجهد: 37 V، عدسة أنبوب: 95 V، الرذاذ الجهد: 4.20 كيلو فولت ، معدل التدفق 10.00 ميكرولتر / دقيقة، محلل: في Ftms، عدد المسحات: 150. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل عينات CGGC على ESI مطياف الكتلة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل 5 ملي فورمات الأمونيوم درجة الحموضة 7.5 العازلة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 500 ميكرولتر من 5 ملي العازلة فورمات الأمونيوم في الزجاج 500 ميكرولتر حقنة، وضعه في مهد حقنة من مضخة MS، ونعلق الأنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل عازلة من خلال الأنبوب لمدة 1-2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد اسم الملف على المدىعن طريق اختيار رمز الملف وكتابة اسم الملف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختر زر البيانات تحصل عليها في وحدة وجمع 150 بالاشعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على زر التشغيل لوقف جمع بعد جمع 150 بالاشعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح وحدة متصفح البيانات، ثم انتقل إلى القائمة ملف واختر &quot;فتح&quot;، وحدد الملف في مربع الحوار. تحقق من عدم وجود قمم في 483، 683، 1163 و 1363 م / ض موجودة تشبه الببتيد أو الزئبق (II) المجمعات -peptide. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل 1: الزئبق 0.5 (II): CGGC نسبة حل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 250 ميكرولتر من 1: 0.5 الزئبق (II): نسبة CGGC من العينة إلى الحقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الحقنة في مهد حقنة من مضخة MS، ونعلق الأنبوب، ورئيس الجهاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد اسم ملف على المدى عن طريق اختيار رمز الملف وكتابة اسم الملف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط على زر البيانات تحصل عليها في وحدة الحصول على البيانات وجمع 150 بالاشعة وانقر على زر التشغيل لوقف جمع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح وحدة، انتقل إلى القائمة ملف واختر &quot;فتح&quot;، وحدد الملف في مربع الحوار. تحقق من أن اللوني يحتوي على قمم بما في ذلك واحدة لالببتيد CGGC وحدها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل حقنة بواسطة الشفط مع 500 ميكرولتر العازلة فورمات الأمونيوم ثم الاستغناء المخزن المؤقت فورمات الأمونيوم في دورق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد زر النفايات على MS وتدفق أنابيب ثلاث مرات مع 500 ميكرولتر العازلة فورمات الأمونيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل حقنة بواسطة الشفط مع 500 ميكرولتر الميثانول ثم الاستغناء عن الميثانول في دورق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح مرة واحدة أنابيب مع 500 ميكرولتر الميثانول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد زر للكشف عن الحمل على MS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 500 ميكرولتر من العازلة فورمات الأمونيوم إلى الحقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الحقنة في مهد حقنة من مضخة MS، ونعلق الأنبوب، ورئيس الجهاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد اسم ملف المنطقة العازلة التي تديرها اختيار رمز الملف وكتابة اسم الملف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صحافةالزر البيانات اكتساب وجمع 150 بالاشعة ثم انقر على زر التوقف التشغيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح وحدة متصفح البيانات، انتقل إلى القائمة ملف واختر &quot;فتح&quot;، وحدد الملف في مربع الحوار. تحقق من أن اللوني هو باطل من قمم من الزئبق السابق: CGGC التشغيل. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل 1: 1 الزئبق (II): CGGC نسبة حل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 250 ميكرولتر من 1: 1 الزئبق (II): CGGC العينة نسبة إلى الحقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر بطريقة مماثلة كما هو موضح لخطوات 7.2.2.2 ل7.2.2.15. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل 1: 2 الزئبق (II): CGGC نسبة حل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 250 ميكرولتر من 1: 2 الزئبق (II): CGGC عينة تركيز في حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر بطريقة مماثلة كما هو موضح لخطوات 7.2.2.2 ل7.2.2.15. </li></ol></li></ol></li></ol> 8. تحليل مخاليط رد فعل للزئبق وعينات التعاون الاقتصادي الأوروبي التي كتبها Orbitrap ESI الطيف الكتلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل عينات التعاون الاقتصادي الأوروبي على ESI مطياف الكتلة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء تحليل كرر (خطوات 7،1-7،2) باستخدام عينات التعاون الاقتصادي الأوروبي ومخاليط رد فعل من الزئبق (II) والتعاون الاقتصادي الأوروبي في مختلف نسب متكافئة. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Clifton, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mercury+exposure+and+public+health%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Clin.+N.+Am%22%5BJournal%5D)">Mercury exposure and public health.</a> Pediatr. Clin. N. Am. 54, 237-269 (2007).</li>
<li>Andersen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+and+Recent+Developments+in+Chelation+Treatment+of+Metal+Intoxication%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Principles and Recent Developments in Chelation Treatment of Metal Intoxication.</a> Chem. Rev. 99, 2683-2710 (1999).</li>
<li>Aposhian, H. V., Maiorino, R. M., Gonzalez-Ramirez, D., Zuniga-Charles, M., Xu, Z., Hurlbut, J. M., Junco-Munoz, P., Dart, R. C., Aposhian, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mobilization+of+heavy+metals+by+newer%2C+therapeutically+useful+chelating+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Mobilization of heavy metals by newer, therapeutically useful chelating agents.</a> Toxicology. 97, 23-38 (1995).</li>
<li>Flora, S. J. S., Pachauri, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chelation+in+Metal+Intoxication%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Environ.+Res.+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Chelation in Metal Intoxication.</a> Int. J. Environ. Res. Public Health. 7, 2745-2788 (2010).</li>
<li>Campbell, J. R., Clarkson, T. W., Omar, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+use+of+2%2C3-dimercaptopropane-1-sulfonate+in+two+cases+of+inorganic+mercury+poisoning%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">The therapeutic use of 2,3-dimercaptopropane-1-sulfonate in two cases of inorganic mercury poisoning.</a> JAMA. 256, 3127-3130 (1986).</li>
<li>Rooney, J. P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+thiols%2C+dithiols%2C+nutritional+factors+and+interacting+ligands+in+the+toxicology+of+mercury%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">The role of thiols, dithiols, nutritional factors and interacting ligands in the toxicology of mercury.</a> Toxicology. 234, 145-156 (2007).</li>
<li>Lin, X., Brooks, J., Bronson, M., Ngu-Schwemlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evalution+of+the+association+of+mercury+%28II%29+with+some+dicysteinyl+tripeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Chem%22%5BJournal%5D)">Evalution of the association of mercury (II) with some dicysteinyl tripeptides.</a> Bioorg. Chem. 44, 8-18 (2012).</li>
<li>Ngu-Schwemlein, M., Lin, X., Rudd, B., Bronson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+ESI+mass+spectrometric+analysis+of+the+association+of+mercury%28II%29+with+multi-cysteinyl+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Inorg.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Synthesis and ESI mass spectrometric analysis of the association of mercury(II) with multi-cysteinyl peptides.</a> J. Inorg. Biochem. 133, 8-23 (2014).</li>
<li>Winther, J. R., Thorpe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+thiols+and+disulfides%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et.+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Quantification of thiols and disulfides.</a> Biochimica et. Biophysica Acta. 1840, 838-846 (2014).</li>
<li>D'Agstino, A., Colton, R., Traeger, J. C., Cantry, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Electrospray+Mass+Spectrometric+Study+of+Organomercury+%28II%29+and+Mercuric+Interactions+with+Peptides+Involving+Cysteinyl+Ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">An Electrospray Mass Spectrometric Study of Organomercury (II) and Mercuric Interactions with Peptides Involving Cysteinyl Ligands.</a> Eur. Mass Spectrom. , 273-285 (1990).</li>
<li>Hofstadler, S. A., Sannes-Lowery, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+ESI-MS+in+drug+discovery%3A+interrogation+of+noncovalent+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Applications of ESI-MS in drug discovery: interrogation of noncovalent complexes.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 5, 585-595 (2006).</li>
<li>Rubino, F. M., Verduci, C., Giampiccolo, R., Pulvirenti, S., Brambilla, G., Columbi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Characterization+of+Homo-+and+Heterodimeric+Mercury+%28II%29-bis-thiolates+of+Some+Biologically+Relevant+Thiols+by+Electrospray+Ionization+and+Triple+Quadruple+Tandem+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Molecular Characterization of Homo- and Heterodimeric Mercury (II)-bis-thiolates of Some Biologically Relevant Thiols by Electrospray Ionization and Triple Quadruple Tandem Mass Spectrometry.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 15, 288-300 (2003).</li>
<li>Krupp, E. M., Milne, B. F., Mestrot, A., Meharg, A. A., Feldmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+into+mercury+bound+to+biothiols%3A+structural+identification+using+ESI-ion-trap+MS+and+introduction+of+a+method+for+their+HPLC+separation+with+simultaneous+detection+by+ICP-MS+and+and+ESI-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Investigation into mercury bound to biothiols: structural identification using ESI-ion-trap MS and introduction of a method for their HPLC separation with simultaneous detection by ICP-MS and and ESI-MS.</a> Anal. Bioanal. Chem. 390, 1753-1764 (2008).</li>
<li>Schaumlöffel, D., Tholey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+directions+of+electrospray+mass+spectrometry+for+elemental+speciation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Recent directions of electrospray mass spectrometry for elemental speciation analysis.</a> Anal. Bioanal. Chem. 400, 1645-1652 (2011).</li>
<li>Patiny, L., Borel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ChemCalc%3A+a+building+block+for+tomorrow%27s+chemical+infrastructure%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Inf.+Model%22%5BJournal%5D)">ChemCalc: a building block for tomorrow's chemical infrastructure.</a> J. Chem. Inf. Model. 53, 1223-1228 (2013).</li>
<li>Thermo Scientific. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Xcaibur+Versions+2.1.0-2.3.0+Data+Acquisition+and+Processing+User+Guide.+Revision+E.+United+States%22">Xcaibur Versions 2.1.0-2.3.0 Data Acquisition and Processing User Guide. Revision E. United States</a>. , Thermo Fisher Scientific Inc. (2012).</li>
<li>Falcone, G., Foti, C., Gianguzza, A., Giuffrè, O., Napoli, A., Pettignano, A., Piazzese, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequestering+ability+of+some+chelating+agents+towards+methylmercury%28II%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Sequestering ability of some chelating agents towards methylmercury(II).</a> Anal. Bioanal. Chem. 405 (2), 881-893 (2013).</li>
<li>Mah, V., Jalilehvand, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+Complex+Formation+with+Mercury%28II%29+in+Aqueous+Solution+at+Physiological+pH%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Res.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Glutathione Complex Formation with Mercury(II) in Aqueous Solution at Physiological pH.</a> Chem. Res. Toxicol. 23, 1815-1823 (2010).</li>
</ol>

لا يوجد إفصاح عن العمل المبلغ عنه.

وdicysteinyl رباعي البيبتيد مسعور CGGC (C 10 H 18 N 4 O 5 S 2، MW = 338) (الشكل 1)، وأشكال المجمعات مع الزئبق (II) كما هو مبين في الشكل 2 والجدول 1 بالإضافة إلى ذلك، يشكل dimers الببتيد وtrimers. تدريجيا كما زادت كمية الببتيد في خليط التفاعل. كما يتضح من قيم م / ض من dimers يرتبط [(2M + H) + = 677] وtrimers [(3M + H) + = 1015]، ومجموعة ثي...

تحتوي الأدوية السريرية الحالية الموصوفة للعلاج بالخلب للتسمم بالزئبق1 على مجموعة (مجموعات) الثيول) ، وهي / مسؤولة عن ربط وعزل أيونات الزئبق2،3. ومع ذلك ، فقد أظهرت الدراسات أن مركبات الثيول الصغيرة هذه [حمض ديميركابتوسوكسينيك (DMSA) وحمض ديميركابتوبروبان سلفونيك (DMPS)] ليست مثالية للعلاج باستخلاب الزئبق4-6. لذلك ، هناك حاجة إلى فهم الارتباط والاتجاهات المعقدة للتكوين بين الزئبق والثيولات لتعزيز التصميم الدوائي العقلاني لمركبات الثيول لخلب الزئبق. في الآونة الأخيرة ، أبلغنا أن ثلاثي الببتيدات n-alkyl و aryl dicysteinyl مع مجموعات dithiol يمكن أن تكون بمثابة "مرتكزات مزدوجة" فعالة لاستيعاب مواقع التنسيق للزئبق (II) لتشكيل 1: 1 زئبق (II) :p eptide و 1: 2 زئبق (II) :(الببتيد) 2 المجمعات7. بالإضافة إلى ذلك ، درسنا تأثير زيادة بقايا السيستينيل على التكوينات المعقدة8. في هذه الدراسة ، نحقق في ارتباط الزئبق (II) باثنين من رباعي الببتيد من ديسيستينيل ، حيث يتم فصل بقايا السيستينيل بواسطة بقايا من الأحماض الأمينية. من أجل تقييم تأثير مجموعات الربط المساعدة للزئبق ، فإن الأحماض الأمينية المتداخلة هي إما بقايا جلايسين (غير مستبدلة) أو بقايا حمض الجلوتاميك (جاما - كربوكسيل). 
يتطلب تفاعل ببتيد السيستينيل مع الزئبق (II) ظروفا تمنع أكسدة مجموعات السيستينيل ثيول لتكوين روابط ثاني كبريتيد9. علاوة على ذلك ، فإن ارتباط الزئبق (II) بببتيدات السيستينيل لتكوين أنواع مختلفة من مجمعات الزئبق والببتيد يعتمد على النسبة الأولية للزئبق (II): الببتيد في خليط التفاعل7،8. يمكن تحليل أنواع مجمعات الزئبق والببتيد المتكونة في مخاليط التفاعل هذه عن طريق التحليل الطيفي الكتلي بالتأين الناعم ، وهو أداة تحليلية حساسة لتحديد تفاعلات الأنواع بين أيونات المعادن والببتيدات10-14. وفقا لذلك ، سيوفر ملفا شخصيا لأنواع مختلفة من مقاربات الببتيد الزئبقية التي تتشكل في ظل ظروف تأين الرش الكهربائي المحددة. هنا ، سوف نوضح كيف يمكن تحضير ببتيدات السيستينيل ومحاليل كلوريد الزئبق (II) في محلول عازل فورمات الأمونيوم منزوع الغازات مغطى بالأرجون لتقليل الأكسدة. من خلال تفاعل معادلات الخلد المختلفة للزئبق (II) مع رباعي الببتيد ديسيستينيل ، سنوضح كيف تؤثر النسبة الأولية للزئبق (II) :p eptide على أنواع المجمعات المتكونة. سنوضح أيضا كيف يمكن استخدام قياس الطيف الكتلي لتأين الرش الكهربائي (ESI) كأداة توصيف لتوفير قياس متكافئ دقيق للزئبق إلى الببتيد في المجمعات المتكونة. وسيبين بروتوكول الفيديو المرتبط بالشروط التجريبية لإعداد مجمعات الزئبق، وإجراء تحليل مخاليط التفاعل في ظل ظروف محددة من التأين بالرش الكهربائي، وتوصيف القياسات المتكافئة لمجمعات رباعي الببتيد الزئبق (II) - ديسيستينيل، استنادا إلى أنماط توزيع نظائر الزئبق المتميزة، باستخدام برنامج ChemCal15. الغرض منه هو مساعدة المهتمين باستخدام مطياف الكتلة ESI orbitrap لتحليل المجمعات المختلفة التي تشكلها أيونات المعادن الموجودة في أشكال نظائر مختلفة.

<table><tbody><tr><td>كلوريد الزئبق (II)</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>429724</td><td>فورمات</td></tr><tr><td>الأمونيوم</td> شديدة السمية <td>سيجما ألدريتش</td><td>516961</td><td></td></tr><tr><td>حمض الفورميك</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>F0507</td><td></td></tr><tr><td>هيدروكسيد الأمونيوم</td><td>فيشر</td><td>A512-P500</td><td></td></tr><tr><td>HPLC المياه</td><td>فيشر</td><td>W5-4</td><td></td></tr><tr><td>HPLC أسيتونيتريل</td><td>فيشر</td><td>BP2405-1</td><td></td></tr><tr><td>HPLC ميثانول</td><td>فيشر</td><td>A452-4</td><td></td></tr></tbody></table>

دراسة في complexation من الزئبق (ii) مع dicysteinyl tetrapeptides التي كتبها electrospray التأين الطيف الكتلي

A Study of the Complexation of Mercury(II) with Dicysteinyl Tetrapeptides by Electrospray Ionization Mass Spectrometry

في هذه الدراسة قمنا بتقييم طريقة لتوصيف المجمعات ، التي تشكلت بنسب نسبية مختلفة من الزئبق (II) إلى رباعي الببتيد ثنائي الستينيل ، بواسطة قياس الطيف الكتلي لمدار التأين بالرش الكهربائي. وتستند هذه الاستراتيجية إلى التوصيف الناجح السابق لمجمعات الزئبق - ديسيستينيل التي تنطوي على ثلاثي الببتيد باستخدام قياس الطيف الكتلي من بين تقنيات أخرى. تم تحضين كلوريد الزئبق (II) ورباعي الببتيد ديسيستينيل في وسط مخزن منزوع الغازات بنسب متكافئة متفاوتة. تم تحليل المجمعات المتكونة لاحقا على مطياف كتلة الرش الكهربائي الذي يتكون من محلل كتلة أيون وأوربي خطي هجين. تم الحصول على أطياف قياس الطيف الكتلي المؤين بالرش الكهربائي (ESI-MS) في الوضع الموجب ثم تم تحليل القمم المرصودة لأنماط توزيع نظائر الزئبق المتميزة والقمة أحادية النظير المرتبطة بها. ويبين هذا العمل أن القياس المتكافئ الدقيق للزئبق والببتيد في المجمعات المتكونة في ظل ظروف محددة للتأين بالرش الكهربائي يمكن تحديده باستخدام ESI MS عالي الاستبانة استنادا إلى أنماط توزيع نظائر الزئبق المتميزة.

<html> وأجريت دراسة لتوصيف الممكن الزئبق الببتيد تكوين معقد لمدة tetrapeptides، CGGC والتعاون الاقتصادي الأوروبي (الشكل 1) من خلال ESI الطيفي. وقد تم التحقيق المجمعات من الزئبق (II) مع CGGC أو التعاون الاقتصادي الأوروبي عن طريق تفاعل خليط من الزئبق (II) وحلول الببتيد في ثلاث نسب مختلفة المولي: 1: 0.5، 1: 1 و 1: 2 (الزئبق (II): الببتيد) . وكان تركيز الزئبق (II) 7.5 × 10 -6 M وتركيز الببتيد تختلف وفقا لذلك. <p class="jo...

يتم تقديم توصيف المجمعات المتكونة بنسب نسبية مختلفة من الزئبق (II) إلى رباعي الببتيدات dicysteinyl بواسطة قياس الطيف الكتلي لمدار التأين بالرش الكهربائي.

دراسة في Complexation من الزئبق (II) مع Dicysteinyl Tetrapeptides التي كتبها Electrospray التأين الطيف الكتلي

In this study we evaluated a method for the characterization of complexes, formed in different relative ratios of mercury(II) to dicysteinyl tetrapeptide, ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحضير معقدات من الزئبق وببتيدات ثنائي السيستين تحت نسب قياس تفاعل مختلفة، وتوصيف المعقدات المختلفة المتكونة باستخدام التأين بالترذيذ الإلكتروني ومطيافية الكتلة من نوع orbitrap. يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية تتعلق بميول تكوين المعقدات بين الزئبق ومركبات الثيول، مما سيعزز التصميم العقلاني لعوامل مخلبية لعزل أيونات الزئبق. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية في أنها تسهل تحليل معقدات الأيونات المعدنية مع تفتت ضئيل للغاية.وتشمل الميزات الأخرى نمط توزيع نظائري مميز للزئبق، وسهولة تعيين الشحنة وتحليل القمم المتداخلة باستخدام مطياف الكتلة الترادفي. ورغم أن هذه الطريقة توفر رؤية متعمقة حول معقدات الببتيد والزئبق، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضاً مع معقدات أخرى، لا سيما مع الأيونات المعدنية التي توجد في أشكال نظائرية مختلفة.قم بإزالة الغازات من محلول منظم من فورمات الأمونيوم بتركيز 5 millimolar باستخدام نظام تفريغ لمدة 10 دقائق، ثم قم بالتطهير باستخدام غاز الأرجون. كرر هذه العملية مرتين وقم بتخزين المحلول تحت غاز الأرجون. وفي يوم الاستخدام، قم بترشيح المحلول المنظم عبر مرشح بمسامية 0.2 micron قبل الاستعمال.لتحضير محاليل كلوريد الزئبق، يتم وزن 0.2375 grams من كلوريد الزئبق. يتم إذابته في 25 milliliters من محلول منظم فورمات الأمونيوم بتركيز five millimolar، لإنتاج محلول كلوريد الزئبق بتركيز 0.035 molar. يُضاف 0.214 milliliters من محلول كلوريد الزئبق إلى 9.785 milliliters من محلول منظم فورمات الأمونيوم بتركيز five millimolar، لتحضير محلول بتركيز 0.75 millimolar.قم بتغطية المحلول الناتج بغاز الأرجون. بعد ذلك، أضف 225 µL من محلول CGGC المخزون بتركيز 5 mM إلى 1.275 mL من محلول منظم فورمات الأمونيوم بتركيز 5 mM و pH 7.5، للحصول على محلول CGGC بتركيز 0.75 mM. ثم، قم بتحضير نسبة 1 إلى 0.5 من الزئبق إلى محلول CGGC عن طريق وضع 255 µL من محلول منظم فورمات الأمونيوم بتركيز 5 mM و pH 7.5 في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 mL.بعد ذلك، أضف 30 µL من محلول كلوريد الزئبق بتركيز 0.75 mM إلى الأنبوب. قم بمزج المحلول باستخدام جهاز الفورتكس لمدة 10 ثوانٍ. ثم، أضف 15 µL من محلول CGGC بتركيز 0.75 mM إلى الأنبوب.قم برج المحلول بواسطة جهاز الـ Vortex لمدة 10 ثوانٍ إضافية، ثم اتركه لمدة 10 دقائق قبل حقنه في مطياف الكتلة. لتجهيز مطياف الكتلة بالتأين بالترذيذ الإلكتروني (ESI mass spectrometer)، أو MS، اسحب 100 µL من معايير المعايرة في حقنة زجاجية سعة 500 µL. ضع الحقنة في حامل الحقن الخاص بمضخة الـ MS.قم بتوصيل الأنابيب، ثم احقن العينة في مطياف الكتلة. قم بتحديد اسم الملف الخاص بعملية التشغيل من خلال اختيار أيقونة الملف وكتابة الاسم. اختر زر الحصول على البيانات في وحدة اكتساب البيانات، وقم بجمع 150 مسحاً.قم بتحليل الكروماتوغرام للتحقق من معايير المعايرة عن طريق فتح وحدة معالجة البيانات في البرنامج. بعد ذلك، انتقل إلى قائمة الملف (file)، واختر فتح (open)، ثم اختر الملف من مربع الحوار. تحقق من أن القمم في الكروماتوغرام تتوافق مع نسب الكتلة إلى الشحنة الخاصة بالمعايير.قم بتنظيف المحقنة الزجاجية سعة 500 µL عن طريق سحب 500 µL من الميثانول بدرجة HPLC ثم تفريغه في كأٍس. اسحب 500 µL من الميثانول بدرجة HPLC في المحقنة الزجاجية، وقم بغسل النظام. اختر وحدة إعداد الطريقة (method setup module) في البرنامج لضبط المعاملات.اختر قائمة وضع المسح (scan mode) وحدد أجهزة التحليل FTMS، ثم انقر فوق موافق. بعد ذلك، انقر فوق الأيقونات المختلفة في صفحة طيف العرض في الوقت الفعلي لضبط المعلمات كما هو مفصل في البروتوكول النصي. لتشغيل المحلول المنظم، ضع 500 µL من محلول أمونيوم فورمات المنظم بتركيز 5 mM في محقنة زجاجية سعة 500 µL.ضعها في حامل المحقنة الخاص بمضخة MS، ثم افصل الأنابيب. قم بتمرير المحلول المنظم عبر الأنابيب لمدة تتراوح من دقيقة إلى دقيقتين. حدد اسم الملف الخاص بعملية التشغيل، وذلك باختيار أيقونة الملف وكتابة اسم الملف.حدد زر الحصول على البيانات (acquire data) في الوحدة، وقم بجمع 150 مسحاً. انقر فوق زر إيقاف التشغيل (stop run) لإيقاف الجمع بعد اكتمال جمع 150 مسحاً. بعد ذلك، افتح وحدة متصفح البيانات (data browser)، وانتقل إلى قائمة الملف (file menu) واختر فتح (open)، ثم حدد الملف من مربع الحوار.تحقق من عدم وجود قمم عند شحنة كتلة زائدة قدرها 483 و683 و1163 و1363 تشبه الببتيد أو معقدات أيون الزئبق والببتيد. قم بتشغيل المحلول الذي تبلغ فيه نسبة الزئبق إلى CGGC من 1 إلى 0.5 عن طريق وضع 250 µL من العينة في المحقنة. ضع المحقنة في حامل المحقنة الخاص بمضخة MS.قم بتوصيل الأنابيب، ثم قم بتهيئة الجهاز. وللحصول على 150 مسحاً للبيانات، افتح وحدة المتصفح، وانتقل إلى قائمة الملف (file)، واختر فتح (open). بعد ذلك، اختر الملف من مربع الحوار.تحقق من أن الكروماتوغرام يحتوي على قمم تشمل القمة الخاصة بالببتيد CGGC وحده. ويتمثل الجانب الحاسم في هذا الإجراء في ضمان إزالة المواد التحليلية من التشغيل السابق تماماً قبل تحليل كل خليط تفاعل. ويتم ضمان تقليل تلوث العينة بالمواد التحليلية المتبقية من خلال تنظيف خط الحقن بدقة.اغسل المحقنة عن طريق سحب 500 µL من محلول ammonium formate buffer، ثم تفريغ المحلول في دورق. بعد ذلك، اختر زر النفايات (waste) في جهاز MS وقم بشطف الأنابيب ثلاث مرات باستخدام 500 µL من محلول ammonium formate buffer. واصل غسل المحقنة عن طريق سحب 500 µL من الميثانول وتفريغه في دورق.قم بشطف الأنابيب مرة واحدة باستخدام 500 µL من الميثانول. بعد ذلك، اختر زر تحميل الكاشف (load detector) في جهاز MS. بعد إضافة 500 µL من محلول منظم فورمات الأمونيوم إلى المحقنة، ضع المحقنة في حامل المحقنة الخاص بمضخة MS. قم بتوصيل الأنابيب، ثم قم بتحضير الجهاز (prime).اختر اسماً للملف الخاص بتشغيل المحلول المنظم كما في السابق، ثم قم بجمع 150 مسحاً ضوئياً قبل النقر على زر إيقاف التشغيل. افتح وحدة متصفح البيانات للتحقق من خلو الكروماتوغرام من أي قمم ناتجة عن عملية التشغيل السابقة من الزئبق إلى CGGC. كرر إجراء التحليل لبقية عينات CGGC.لتحضير نسبة 1 إلى 0.5 من الزئبق إلى محلول CEEC، ضع 255 µL من محلول منظم فورمات الأمونيوم بتركيز 5 mM ورقم هيدروجيني pH 7.5 في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 mL. أضف 30 µL من محلول كلوريد الزئبق بتركيز 0.75 mM إلى الأنبوب. بعد مزج المحلول بجهاز الفورتيكس لمدة 10 ثوانٍ، أضف 15 µL من محلول CEEC بتركيز 0.75 mM إلى الأنبوب.قم برج المحلول باستخدام جهاز الـ Vortex لمدة 10 ثوانٍ إضافية. واترك المحلول لمدة 10 دقائق قبل حقنه في مطياف الكتلة. كرر إجراء التحليل باستخدام عينات CEEC ومزيج تفاعل أيون الزئبق وCEEC.يظهر طيف كتلة تمثيلي. بعد 10 دقائق، تظهر الأنواع المختلفة من معقدات الببتيد والزئبق لخليط تفاعل الزئبق إلى CGGC بنسبة 1 إلى 0.5، إلى جانب ذروة ببتيد عند 339.08، ودايمر ببتيدي عند 677.15. وكما لوحظ في الطيف السابق، يحتوي خليط تفاعل الزئبق إلى CGGC بنسبة واحد إلى واحد على بعض الذرى المماثلة.على سبيل المثال، تشير القمة 539.03 إلى المعقد بنسبة واحد إلى واحد من الزئبق والببتيد. ويُظهر العرض المكبر نمط نظائر الزئبق المميز الذي يتوافق مع نظائر الزئبق السبعة الرئيسية الموجودة طبيعيًا. كما لوحظ وجود معقد من الزئبق إلى CGGC بنسبة واحد إلى اثنين، كما تم الإبلاغ عنه سابقًا بالنسبة لثنائي سيستيينيل تريببتيد الزئبق.يظهر هذا المعقد في جميع مخاليط التفاعل الثلاثة للزئبق وCGGC. وقد تم تحليله بسهولة من خلال نمط نظيري مميز للزئبق مع ذروة أحادية النظير عند 877. ومع ذلك، إذا كان الزئبق فائضاً، كما هو الحال في خليط التفاعل بنسبة 1 إلى 0.5 من الزئبق إلى CGGC، يتم الكشف عن معقد إضافي بنسبة اثنين إلى اثنين من الزئبق إلى CGGC.تتوافق بصمة نظائر الزئبق هذه مع معقد زئبق ثنائي كما تم حسابه باستخدام برنامج chem cal. وتتوافق الكتلة أحادية النظير البروتونية النظرية مع قيمة شحنة كتلة تبلغ 1077، وهي القمة التاسعة في العنقود النظائري المرصود. ويظهر هنا طيف نموذجي يوضح معقدات مختلفة من الزئبق إلى CEEC.ومن المثير للاهتمام وجود قمم متداخلة مرتبطة بمركبات إضافة الزئبق إلى CEEC في حالة الشحنة زائد واحد، حيث تظهر قمة أحادية النظير عند 883. وفي حالة الشحنة زائد اثنين، تظهر قيمة قمة أحادية النظير محسوبة قدرها 1765. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها في أقل من ساعتين إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.أثناء محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر إزالة الغازات من المحاليل المنظمة وشطف الخط جيداً لتجنب انتقال المواد التحليلية. وبناءً على هذا الإجراء، يمكن استخدام طرق أخرى مثل مطيافية الرنين المغناطيسي النووي للبروتون، والكربون-13، والزئبق-199، أو قياس الجهد الكهربائي، لتوفير تحديد أكثر دقة لمعقدات المحتوى في الطور السائل. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكون قادراً على تحليل معقدات الزئبق المختلفة وأنماط توزيع نظائر الزئبق المتميزة وتكوينات الشحنات باستخدام مطيافية الكتلة أوربيتراب ذات التأين بالترذيذ الإلكتروني، بالإضافة إلى تمييز القمم المتداخلة عن طريق تحليل مطيافية الكتلة الترادفية.لا تنسَ أن العمل مع محاليل الزئبق يمكن أن يكون خطيراً للغاية، ويجب دائماً اتخاذ الاحتياطات اللازمة مثل ارتداء معدات الوقاية الشخصية أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

a-study-complexation-mercury-ii-with-dicysteinyl-tetrapeptides

Research

JoVE Journal

Chemistry

الكيمياء

وقد أثبتت الطيف الكتلي ليكون أداة قيمة لتحليل البروتين المجمعات الكبيرة. هذا الأسلوب يتيح نظرة ثاقبة لتكوين العمارة ، رياضيات الكيمياء والشاملة متعددة الوحيدات التجمعات. هنا ، وصفنا ، وخطوة بخطوة ، وكيفية إجراء تحليل الطيف الكتلي الهيكلي ، وتوصيف البنى الجزيئات.

تحليل البروتين المجمعات الكبيرة التي الطيف الكتلي الإنشائية

وصفنا إعداد نقاط الكم الغروية مع حجم مصغر لتصوير الهيدروديناميكية مضان واحدة جزيء. مقارنة نقاط الكم التقليدية، هذه الجسيمات النانوية هي مماثلة في الحجم إلى البروتينات الكروية وهي الأمثل لواحدة جزيء السطوع والاستقرار ضد التحلل الضوئي، ومقاومة غير محددة ملزمة للبروتينات وخلايا.

الكم النقاط المدمجة لواحدة جزيء التصوير

يوصف تحديد الحموضة في مرحلة غاز من oligopeptides تحتوي على السيستين. وتجرى التجارب باستخدام الثلاثي مطياف الكتلة رباعي. يتم قياس الحموضة النسبية للالببتيدات باستخدام الاصطدام الناجم عن التجارب التفكك، ويتم تحديد الحموضة الكمي باستخدام الطباخون الموسعة طريقة الحركية.

تحديد الحموضة في مرحلة غاز من Oligopeptides

الدراسات البيوكيميائية البيوفيزيائية والتفاعلات بين المجالات بروتين الغشاء جزءا لا يتجزأ من مواجهة التحديات التقنية كثيرة، وأولها هو الحصول على المواد المناسبة الدراسة. توضح هذه المقالة بروتوكول لإنتاج وتنقية ثاني كبريتيد-استقرت المجمعات الببتيد عبر الغشاء التي هي مناسبة لتحليل الهيكلية التي كتبها صدى حل المغناطيسي النووي (NMR) والتطبيقات التحليلية الأخرى.

إنتاج ثاني كبريتيد استقرت مجمعات الببتيد عبر الغشاء الدراسات الإنشائية

هنا ، نقدم بروتوكولات مفصلة لقياس الطيف الكتلي لتبادل الهيدروجين / الديوتيريوم في الحالة الصلبة (ssHDX-MS) وقياس الطيف الكتلي لوضع العلامات الضوئية للحالة الصلبة (ssPL-MS) للبروتينات في المساحيق الصلبة. توفر الطرق معلومات عالية الدقة حول تشكل البروتين والتفاعلات في الحالة الصلبة غير المتبلورة ، والتي قد تكون مفيدة في تصميم الصياغة.

كتلة الطيفية المداخل لدراسة بنية البروتين والتفاعلات في مساحيق المجففة بالتبريد

المرونة بتكوين تلعب دورا حاسما في وظيفة البروتين. هنا، نحن تصف استخدام تأين بالإرذاذ الإلكتروني مطياف الكتلة وقت حل جانب لصرف الهيدروجين الديوتيريوم للتحقق التغييرات الهيكلية السريعة التي تدفع وظيفة في البروتينات أمر والمختلين.

وقت حل التأين electrospray الهيدروجين، الديوتيريوم تبادل الطيف الكتلي لدراسة بنية البروتين وديناميكية

يمكن أن يتسم قياس الطيف الكتلي للأيون وتقنيات النمذجة الجزيئية بالأداء الانتقائي للربط المعدني للببتيدات المصممة الملزمة بالمعادن والببتيد المربط بالنحاس ميثانوباكتين. تطوير فئات جديدة من الببتيدات المعدنية مخلب يساعد على أن يؤدي إلى العلاجات للأمراض المرتبطة بسوء التوازن الأيون المعادن.

تقنيات قياس الطيف الكتلي للتنقل من أيون لتحديد بنية وآليات التعرف على الأيون المعدني ونشاط الأكسدة من Oligopeptides التجليد المعدني

وتستخدم مجموعات محايدة SO2 من الطاقة الحركية المنخفضة (&lt; 0.8 eV/constituent) لdesorb جزيئات السطح المعقدة مثل الببتيدات أو الدهون لمزيد من التحليل عن طريق قياس الطيف الكتلي باستخدام مطياف كتلة فخ أيون. لا يلزم إعداد عينة خاصة ، ومراقبة ردود الفعل في الوقت الحقيقي أمر ممكن.

تحليل الجزيئات المعقدة وردود أفعالها على الأسطح عن طريق الامتصاص/التأيّن الطيفي الكتلي الناجم عن الكتلة

Lanthipeptide synthetases يحفز ردود الفعل متعددة الخطوات خلال التمثيل الحيوي للمنتجات الطبيعية الببتيد. هنا، ونحن نصف مستمر، من أسفل إلى أعلى، الهيدروجين الديوتريوم تبادل الطيف الكتل (HDX-MS) سير العمل التي يمكن استخدامها لدراسة الديناميات التركيبية من synthetases lanthipeptide، فضلا عن الإنزيمات المماثلة الأخرى المشاركة في التمثيل الحيوي للمنتج الطبيعي الببتيد.

منصة قياس الطيف الكتلي لتبادل الهيدروجين والديوتريوم (HDX-MS) للتحقيق في إنزيمات الببتيد التركيب الحيوي

يظهر هنا بروتوكول لنهج تبادل الهيدروجين / الديوتيريوم (HDX) القائم على الرحلان الكهربائي الشعري إلى جانب قياس الطيف الكتلي من أعلى إلى أسفل. يميز هذا النهج الفرق في الهياكل ذات الترتيب الأعلى بين أنواع البروتين المختلفة ، بما في ذلك البروتينات في حالات مختلفة وأشكال بروتينية مختلفة ، من خلال إجراء فصل HDX التفاضلي المتزامن والفصل الكهربائي.

تبادل الهيدروجين / الديوتيريوم القائم على الرحلان الكهربائي الشعري للتوصيف التوافقي للبروتينات باستخدام مطياف الكتلة من أعلى إلى أسفل

توضح هذه المقالة بروتوكولا تجريبيا يستخدم مطياف الكتلة الحركية لأيون البخاخ الكهربائي ، والحسابات الكمومية شبه التجريبية ، والتفكك الناجم عن تصادم العتبة الذي تم حله بالطاقة لقياس الكيمياء الحرارية النسبية لتفكك المجمعات المعدنية الثلاثية ذات الصلة.

الدراسات الكيميائية الحرارية للمجمعات الثلاثية Ni(II) و Zn(II) باستخدام مطياف الكتلة الأيونية

اكتشف تحليل مركبات الزئبق مع الببتيدات ثنائية السيستين باستخدام مطياف الكتلة بالتأين الرشاش الكهربائي. تساعد هذه الطريقة في تصميم عوامل مخلبة لعزل أيونات الزئبق السامة.

دراسة في Complexation من الزئبق (II) مع Dicysteinyl Tetrapeptides التي كتبها Electrospray التأين الطيف الكتلي

استكشف المزيد من الفيديوهات