Name: Medidas autoradiográficas de 14 C -Iodoantipyrine no cérebro de um rato Seguindo Central pós-AVC Dor (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: Aprenda a medir a captação de [14C]-iodoantipirina para avaliar substratos neurais envolvidos na dor pós-AVC central em modelo de roedor. Este método radioisotópico oferece uma alternativa eficiente para mapeamento cerebral.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

O presente estudo foi apoiado por bolsas do Conselho Nacional de Ciência para Dr. Bai-Chuang Shyu (NSC 99-2320-B-001-016-MY3, NSC 100-2311-B-001-003-MY3 e NSC 102-2320- B-001-026-MY3). Este trabalho foi realizado no Instituto de Ciências Biomédicas, que receberam financiamento da Academia Sinica.

O protocolo do presente estudo recebeu a aprovação da Academia Sinica Institutional Animal Care e do Comitê de utilização em Taiwan. 1. Preparações Animais <ol><li> Obter ratos Sprague-Dawley machos (cerca de 300-400 g). Manter os ratos em um quarto com ar condicionado (21 - 22 ° C, 50% de umidade), sob a 12 luz hr / ciclo de 12 hr / escuro (luzes acesas às 08:00) com livre acesso a comida e água. </li></ol> 2. Procedimento Experimental <ol><li> Permitir que todos os ratos para se adaptar ao ambiente nas suas gaiolas durante 1 semana antes das experiências. Durante a adaptação, realizar os testes plantares von Frey e estabelecer linhas de base. </li><li> von Teste Frey <ol><li> Coloque o rato em um gabinete de acrílico (30 centímetros x 30 centímetros x 80 cm) por 30 min para habitação. </li><li> Se obter filamentos de von Frey (filamento 11 -. 20) que têm o mesmo comprimento mas variando diâmetros para proporcionar um intervalode forças de 2-100 g. </li><li> Para avaliar o limiar de retirada da pata na pata traseira do rato, usar filamentos de von Frey para estimular o centro das patas traseiras por meio de uma porta do tipo rede na placa acrílica em intervalos entre tentativas 5 min. Para gravar a pressão máxima aplicada, use os filamentos em ordem crescente, de baixo para cima, até que a pressão máxima aplicada é gravado. 10 </li><li> Quando os ratos apresentam uma resposta de retirada da pata ao estímulo, registrar o número de filamentos. Determinar a resposta de retirada neste ensaio de acordo com o menor estímulo. </li><li> Repetir o mesmo procedimento imediatamente, para um total de três vezes em sucessão no mesmo rato. Converter o número de filamentos na força correspondente (em gramas) e a média dos valores. </li></ol></li><li> teste plantar <ol><li> Colocar o rato dentro de uma caixa de acrílico transparente (dividida em quatro quadros, 80 cm de × 30 cm × 15 cm) durante 30 min para a habitação. </li><li> Use um infrared feixe para estimular o centro da pata traseira por meio de uma placa de vidro. Ajuste a intensidade da luz infravermelha para obter uma latência média de resposta de retirada da pata de aproximadamente 10 seg. Conduzir um teste pressionando uma chave que liga a fonte de luz infravermelha e inicia um temporizador de estado sólido digital. Manipular a duração do feixe de luz infravermelha. </li><li> Grave a duração da luz infravermelha, quando os ratos exibem uma resposta de retirada da pata. A maior duração não deve exceder 20 s em cada ensaio, para evitar danos nos tecidos. Use um intervalo entre tentativas de pelo menos 5 minutos para evitar a estimulação sucessiva. </li><li> Repita o teste com três ensaios para as patas traseiras esquerda e direita, e calcular a média para cada pata traseira para cada rato. </li></ol></li><li> Cirurgia colagenase Lesão <ol><li> Anestesiar o rato com 4% de isoflurano até a perda da resposta toe-pitada e respostas somáticas a ocorrer estímulos cirúrgicos. Manter a anestesia com 1,5 - 2% isoflurane para a duração da cirurgia. </li><li> Colocar o rato num dispositivo estereotáxico com um simples almofada de aquecimento para manter a temperatura corporal a 36,5-37,5 ° C. Aplique o creme de olho nos olhos para evitar a secura e sob anestesia. </li><li> Raspar a pele com cortador elétrico esterilizados, e fazer uma incisão lisa (cerca de 2-2,5 cm) com um bisturi ao longo da linha média do couro cabeludo. Limpe a pele e do crânio com a alternância de iodo providência e solução de álcool 75% para desinfecção. Durante a fase cirúrgica, use% de álcool 75 para esterilizar todos os dispositivos, ferramentas, e a bancada para manter condições estéreis. Antes disso, todos os materiais cirúrgicos devem ser esterilizados em autoclave a vapor. </li><li> Use as luvas e instrumentos esterilizados, e faça um pequeno furo (3 mm de diâmetro) no crânio com uma broca elétrica sobre o VB (incluindo núcleo ventral póstero-medial do tálamo [VPM] e ventral núcleo talâmico póstero [VPL]) do tálamo (3,0 -3,5 mm posterior, 3,0-3,5 mm lateralem relação ao bregma, e 5,5-5,8 mm de profundidade a partir da superfície do crânio). </li><li> Microinject 0,5 mL de solução salina normal ou 0.125 U do tipo 4 solução de colagenase no controle e grupos experimentais, respectivamente. </li><li> Manter a agulha de injecção no lugar durante mais 5 minutos para permitir a difusão da droga. </li><li> Use cimento dental para encher o orifício no crânio, e sutura da incisão. Após a sutura da incisão, aplicam-se os anestésicos analgésicos locais (lidocaína pomada) sobre a ferida, e devolvê-los às suas gaiolas. </li><li> Após a cirurgia, isoladamente abrigar os ratos em gaiolas de plástico até que eles manter decúbito esternal, e mantém quente até recuperado da anestesia. </li></ol></li><li> Testes comportamentais após a recuperação cirúrgica <ol><li> Após 7 dias de recuperação da cirurgia, repita os procedimentos nas seções 2.2 e 2.3 para a fase de teste. Realizar os testes comportamentais ao longo de 4 semanas, enquanto monitora a saúde e estado de desenvolvimento dos animais. </li><li&gt; Monitorar as condições de saúde dos animais (por exemplo, o peso corporal, a quantidade de alimentação, e livre circulação) entre os grupos controle e experimental para a fase pós-cirurgia. </li></ol></li><li> Execute cânula Implantação com PE-50 Tubing <ol><li> Anestesiar ratos com 4% de isoflurano, e manter a temperatura corporal a 36,5-37,5 ° C com uma almofada de aquecimento simples. </li><li> Com um bisturi, cortar dois furos (2 cm de diâmetro cada) na linha média da parte dorsal dos membros anteriores e a intersecção da parte ventral do ombro esquerdo e cavidade torácica, respectivamente. </li><li> Dissociar a pele e o músculo com um par de tesouras entre os dois orifícios. </li><li> Conectar uma extremidade de tubagem PE-50 (20 cm de comprimento) para a veia jugular externa através do orifício ventral. Ligar a extremidade terminal da mesma tubagem PE-50 para o furo dorsal, e apor à pele. </li><li> Utilize uma seringa para injectar solução salina na veia jugular para verificar que a tubagem PE- 50não está obstruído. </li><li> Suturar a incisão, e injetar os ratos com 6 mg / kg de gentamicina (via intraperitoneal). </li><li> Lave a tubagem a cada dois dias após a cirurgia com 0,3 ml de solução salina a 0,9%, seguido por 0,1 ml de soro fisiológico com 20 U / ml de heparina. </li></ol></li><li> Teste Comportamental final <ol><li> Uma semana após o passo 2.6, repita os passos de 2,2-2,3 para confirmar que o comportamento é estável em comparação com o passo 2.5 após a recuperação cirúrgica. </li></ol></li><li> de injeção <ol><li> Coloque o rato em uma gaiola de descanso para 5 - 10 min para a adaptação. </li><li> Usando um splitter, conecte PE- 50 tubulação para duas seringas de 1 ml. Encher uma seringa com solução salina normal e encher o outro com [14 C] -IAP solução (125 uCi / kg num volume de 0,3 - 0,5 mL). </li><li> Injectar o radiofármaco na veia jugular externa, e substituir a seringa com uma outra seringa cheia com cloreto de 3 M de potássio. </li><li> Dez segundos após a inj radiofármacoexão, injetar cloreto de 3 M de potássio sob uma overdose de isoflurano e sacrificar os animais de acordo com métodos de eutanásia padrão (ou seja, isoflurano a partir de um vaporizador por 50 min) com base nas diretrizes da Academia Sinica Institutional Animal Care e do Comitê de utilização em Taiwan. </li><li> Após 1 min, expor o crânio, e retire o músculo remanescente. Usando fórceps, descascar a superfície dorsal do crânio do cérebro. Aparar os lados do crânio utilizando fórceps. Em seguida, usando uma espátula, cortar os bulbos olfativos e ligações nervosas ao longo da superfície ventral do cérebro, e remover o cérebro. </li><li> Use composto óptima temperatura de corte (OCT) para congelar o cérebro em gelo seco e metilbutano (aproximadamente -55 ° C). Armazenar o tecido cerebral em um congelador. 11, 12 </li></ol></li><li> Cortando o cérebro <ol><li> Orientar o tecido num micrótomo, com o cérebro posterior virado para baixo. Use um criostato para cortar o cérebro em 20 &amp;# 181; seções m de espessura. </li><li> Coloque as fatias de cérebro em lâminas de microscópio num criostato a -20 ° C, com um intervalo de 240 um entre cada fatia. </li><li> Coloque as lâminas de microscópio e cinco papéis de filtro padrão com radioatividade classificados em cassetes de exposição durante 3 dias a -20 ° C. De acordo com a sequência das fatias de cérebro, providenciar as lâminas de microscópio de cima para baixo. Finalmente, colocar os papéis de filtro na parte inferior das cassetes. 12 </li><li> Remover tela de fósforo a partir das cassetes de exposição, e use um gerador de imagens de modo variável a ler o ecrã de fósforo e gerar imagens para mostrar [14 C] absorção -IAP para as fatias de cérebro. </li></ol></li></ol> Análise 3. Dados <ol><li> Após o passo 2.9.4, ajustar as imagens utilizando o Statistical Parametric Mapping (SPM) e software ImageJ. Reconstruir todas as imagens usando cortes coronais em série. Suave e normalizar as imagens de acordo com um modelo de cérebro de rato de referência.12, 13 </li><li> Para avaliações quantitativas, medir a região de interesse (ROI) das imagens do cérebro usando software ImageJ para determinar a intensidade do sinal pixel, e usar software estatístico para a análise. 12, 13 </li><li> Para investigar as conexões entre diferentes núcleos cerebrais, use MATLAB software de análise de correlação para exibir relação radioatividade em uma matriz de correlação inter-regional, e visualizar as matrizes como mapas de cores. Finalmente, use software Pajek para análise de rede. 12, 13 </li><li> Use 2 × 5 bidireccional análise mista de variância (ANOVA), com o grupo e semanas como factores, para comparar a duração da tolerância ao calor no teste plantar e força mecânica no teste de von Frey nos grupos de placebo e CPSP na linha de base e semana 1 - 5. Use a 2 × 31 two-way ANOVA para medir a taxa de radioatividade acordo com o grupo e área do cérebro. Quando adequado, a realizar Diferença Honestamente significativa de Tukey (HSD) Testes post hoc. Calcorrelação cular Pearson coeficientes para avaliar correlações entre todas as áreas do cérebro selecionados na farsa e grupos CPSP. </li></ol>

<ol><li>Finnerup, N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+central+neuropathic+pain+states%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Anaesthesiol%22%5BJournal%5D)">A review of central neuropathic pain states.</a> Curr Opin Anaesthesiol. 21 (5), 586-589 (2008).</li>
<li>Andersen, G., Vestergaard, K., Ingeman-Nielsen, M., Jensen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+central+post-stroke+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Incidence of central post-stroke pain.</a> Pain. 61 (2), 187-193 (1995).</li>
<li>Chen, B., Stitik, T. P., Foye, P. M., Nadler, S. F., DeLisa, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+post-stroke+pain+syndrome%3A+yet+another+use+for+gabapentin%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Phys+Med+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Central post-stroke pain syndrome: yet another use for gabapentin?</a> Am J Phys Med Rehabil. 81 (9), 718-720 (2002).</li>
<li>Greenspan, J. D., Ohara, S., Sarlani, E., Lenz, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allodynia+in+patients+with+post-stroke+central+pain+%28CPSP%29+studied+by+statistical+quantitative+sensory+testing+within+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Allodynia in patients with post-stroke central pain (CPSP) studied by statistical quantitative sensory testing within individuals.</a> Pain. 109 (3), 357-366 (2004).</li>
<li>Klit, H., Finnerup, N. B., Jensen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+post-stroke+pain%3A+clinical+characteristics%2C+pathophysiology%2C+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Central post-stroke pain: clinical characteristics, pathophysiology, and management.</a> Lancet Neurol. 8 (9), 857-868 (2009).</li>
<li>Kumar, G., Soni, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+post-stroke+pain%3A+current+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Central post-stroke pain: current evidence.</a> J Neurol Sci. 284 (1-2), 10-17 (2009).</li>
<li>Denk, F., McMahon, S. B., Tracey, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+vulnerability%3A+a+neurobiological+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Pain vulnerability: a neurobiological perspective.</a> Nat Neurosci. 17 (2), 192-200 (2014).</li>
<li>Ji, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+impairment+in+pain+through+amygdala-driven+prefrontal+cortical+deactivation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cognitive impairment in pain through amygdala-driven prefrontal cortical deactivation.</a> J Neurosci. 30 (15), 5451-5464 (2010).</li>
<li>Jungehulsing, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Levetiracetam+in+patients+with+central+neuropathic+post-stroke+pain%3A+a+randomized%2C+double-blind%2C+placebo-controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurol%22%5BJournal%5D)">Levetiracetam in patients with central neuropathic post-stroke pain: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial.</a> Eur J Neurol. 20 (2), 331-337 (2013).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> J Neurosci Methods. 53, 55-63 (1994).</li>
<li>Jay, T. M., Luciqnani, G., Crane, A. M., Jehle, J., Sokoloff, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+local+cerebral+blood+flow+with+%5B14C%5Diodoantipyrine+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Measurement of local cerebral blood flow with [14C]iodoantipyrine in the mouse.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 8 (1), 121-129 (1988).</li>
<li>Lu, H. C., Chang, W. J., Kuan, Y. H., Huang, A. C., Shyu, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+%5B14C%5Diodoantipyrine+study+of+inter-regional+correlations+of+neural+substrates+following+central+post-stroke+pain+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">A [14C]iodoantipyrine study of inter-regional correlations of neural substrates following central post-stroke pain in rats.</a> Mol Pain. 11 (1), (2015).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+brain+activation+during+retrieval+of+visceral+pain-conditioned+passive+avoidance+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Functional brain activation during retrieval of visceral pain-conditioned passive avoidance in the rat.</a> Pain. 152, 2746-2756 (2011).</li>
<li>Wasserman, J. K., Koeberle, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+a+hemorrhagic+rat+model+of+central+post-stroke+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of a hemorrhagic rat model of central post-stroke pain.</a> Neuroscience. 161 (1), 173-183 (2009).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para revelar.

Nos testes comportamentais, o grupo CPSP exibiram reduções do limiar de retirada da pata no teste de dor térmica e força mecânica no teste de von Frey no início do estudo e semanas 1 - 5. Os resultados foram consistentes com um estudo anterior 14. O [C 14] -IAP método baseia-se na intensidade de pixel de imagens do cérebro para a análise quantitativa de diferentes fatias de cérebro. Para avaliar os dados das imagens do cérebro, a intensidade do sinal de pixel foi defini...

Hemorragia acidente vascular cerebral foi demonstrado que ocorrem em mais do que 8% de pacientes que sofrem de dor neuropática, a que se refere dor pós-derrame como central (CPSP). 1-3 CPSP pode resultar de disfunção somatossensorial, induzindo, assim, a hipersensibilidade e a alodinia. 4 Contudo , os mecanismos fisiopatológicos da disfunção somatossensorial em CPSP permanecem incertas. Por exemplo, a perda de sensações somáticas resulta de desaferentação neuronal na área do cérebro hemorrágico. A hiperalgesia pode ser causada pela hiper-excitabilidade de neurónios nociceptivos centrais ou desinibição Central, 5, 6, mas os substratos neurais que estão envolvidos nos sintomas de CPSP permanecem desconhecidos. Alguns estudos sugeriram que o córtex pré-frontal dorsolateral (CPFD), rostral do córtex cingulado anterior (ACC), a amígdala, o hipocampo, substância cinzenta periaquedutal (PAG), medula ventromedial rostral, e suas conexões com o outro mediar processamento nociceptivo. 7 adicionaiscircuitos -amygdala ly, medial córtex pré-frontal (mPFC) foram mostrado para ser envolvido na percepção relacionados com a dor. 8 Os dados sobre os mecanismos fisiopatológicos da CPSP são diversas, ea ativação de substratos neurais no CPSP precisa de uma análise mais aprofundada. [14 C] -Iodoantipyrine captação (IAP) é usado para observar indirectamente o fluxo sanguíneo cerebral regional (FSCr), assumindo uma relação entre a atividade cerebral e CBF. Apesar de [14 C] -IAP não permite avaliar a actividade cerebral em tempo real, tal como acontece com a ressonância magnética (IRMf), tem várias vantagens. Por exemplo, [14 C] -IAP é adequado para a medição que ocorre espontaneamente eventos cerebrais durante estados patológicos. 9 Além disso, a [14 C] -IAP absorção é medida sem anestesia. Ele também custa menos do que outros métodos de imagem, incluindo fMRI e tomografia por emissão de positrões (PET). O [C 14] -IAP método tem sido sugerido para ser apropriado para measuring dor espontânea (p.ex., CPSP) que é induzido pelas lesões do núcleo basal ventral (VB) do tálamo. 9 O presente protocolo descreve como realizar a [14 C] -IAP método para avaliar o envolvimento de substratos neurais de CPSP que é induzido pelas lesões da VB do tálamo em um modelo animal. A técnica oferece uma maneira de determinar os mecanismos fisiopatológicos subjacentes a sintomas CPSP nos níveis comportamentais e neuronais.

<table><tbody><tr><td><forte>Anestésico:</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Halocarbon Products Corporation&nbsp;</td><td>NDC 12164-002-25</td><td>4%</td></tr><tr><td>Surgery</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>homeothermic blanket system</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Model 50&ndash; 7079</td><td>temperatura corporal foram mantidas em 36,5 - 37,5 °C.</td></tr><tr><td>10 &micro; l micro seringa</td><td>Hamilton</td><td>80008, Modelo 1701SN</td><td>injetada com tubo</td></tr><tr><td>de polietileno-50 colagenase</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>427411</td><td>cateterizada na seringa da veia jugular externa</td></tr><tr><td>1 cc</td><td>Terumo Medical Products</td><td>SS-01T</td><td>injetada com 14C-IAP e solução salina.</td></tr><tr><td>solução salina (cloreto de sódio 0,9 g)</td><td>Taiwan Biotech Co., LTD.</td><td>100-130-0201</td><td>Para lavar o tubo</td></tr><tr><td><forte>Drogas</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr>tipo <tr><td>4 colagenase</td><td>Sigma</td><td>C5138-500MG</td><td>0,125 U</td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Sigma</td><td>G1264-250MG</td><td>6 mg/kg</td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Sigma</td><td>H9399</td><td>20 U/ml; 0,1 ml/dia</td></tr><tr><td>14C-iodoantipirina (IAP)</td><td>PerkinElmer</td><td>NEC712</td><td>125 mCi/kg em 300 ml de solução salina a 0,9%</td></tr><tr><td>Cloreto de potássio</td><td>Merck</td><td>1.04936.1000</td><td>3 M</td></tr><tr><td>Sistema de comportamento:estesiômetro </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>von Frey</td><td>Fabrication Enterprises, Inc.</td>A hiperalgesia mecânica <td>dos monofilamentos táteis da linha de base 12-1666</td><td>foi avaliada medindo a resposta de retirada a um</td></tr><tr><td>aparelho de teste plantar</td> de estímulo mecânico <td>IITC Life Science</td><td>IITC 390G Plantar Test</td><td>A hiperalgesia térmica foi avaliada medindo a latência de retirada da pata traseira em resposta ao calor radiante.</td></tr><tr><td><forte>Fatia de cérebro:</forte>Composto de</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>temperatura de corte ideal</td><td>Sakura Fintek Inc</td><td>4583</td><td>incorporou o gelo</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> seco do cérebro <td>congelado em gelo seco/metilbutano (aproximadamente &menos; 55 &graus; C)</td></tr> <tr><td>metilbutano</td><td>Sigma</td><td>M32631-1L</td><td>congelado em gelo seco/metilbutano (aproximadamente &menos; 55 &graus; C)</td></tr> <tr><td>Criostato</td><td>&nbsp; Leica Biosystems Nussloch GmbH, Alemanha</td><td>Leica CM1850</td><td>Fatia de cérebro coronal foi seccionada nesta máquina.</td></tr><tr><td><análise > dados fortes</></td><td></td><td></td><td></td> exposição forte</tr> <tr><td>com tela de fósforo</td><td>Amersham Biosciences&nbsp;</td><td>20 cm x 25 cm</td><td>As fatias foram secas em lâminas de vidro e colocadas ao lado de cinco papéis de filtro padrão com radioatividade graduada. Todos os slides foram expostos aos em &minus; 20 &deg;C.</td></tr><tr><td>Contador de</td> cintilação líquida <td>Beckman Coulter</td><td>Beckman LS 6500</td><td>Para medir a contagem de radioatividade dos papéis de filtro.</td></tr><tr><td>Gerador de Imagens de Modo Variável Typhoon 9410</td><td> GMI, Inc.</td><td>WS-S9410</td><td>Para ler&nbsp; tela de fósforo que foi exposta por fatia de cérebro</td></tr><tr><td>Mapeamento Paramétrico Estatístico (SPM)</td><td>Wellcome Center for Neuroimaging</td><td>versão 8</td><td>todos os cérebros foram calculados para criar o modelo final do cérebro. Para determinar diferenças significativas entre as imagens nesses dois grupos, as imagens foram derivadas subtraindo-se o grupo simulado do grupo CPSP.</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>http://imagej.nih.gov/ij</td><td>versão 1.46</td><td>As seções adjacentes foram alinhadas manualmente e usando o Stack-Reg, um algoritmo de registro automatizado baseado em pixels no software ImageJ. Todos os cérebros tridimensionalmente reconstruídos originais foram suavizados e normalizados para o modelo de cérebro de rato de referência.</td></tr><tr><td>O Matlab</td><td>MathWorks</td><td>versão 2009b</td><td>usou coeficientes de correlação de Pearson para examinar as relações entre os grupos CPSP e simulado. Uma matriz de correlação inter-regional foi calculada entre os animais de cada grupo.</td></tr><tr><td>Pajek</td><td>http://Pajek.imfm.si/</td> <td>versão 3.06</td><td>A análise teórica gráfica foi realizada em redes definidas pelas matrizes de correlação acima usando o software Pajek.</td></tr></tbody></table>

medidas autoradiográficas de [<sup&gt; 14</sup&gt; c] -iodoantipyrine no cérebro de um rato seguindo central pós-avc dor

Autoradiographic Measurements of [14C]-Iodoantipyrine in Rat Brain Following Central Post-Stroke Pain

Aproximadamente 8% dos pacientes com AVC apresentam sintomas de dor central pós-AVC (CPSP). A CPSP está associada a alodinia e hipersensibilidade a estímulos nociceptivos. Embora alguns estudos tenham mostrado que a dor neuropática pode envolver o córtex pré-frontal dorsolateral, córtex cingulado anterior rostral, amígdala, hipocampo, cinza periaquedutal, medula ventromedial rostral e tálamo medial, os substratos neurais e suas conexões que medeiam o CPSP permanecem obscuros. A captação de [14C]-iodoantipirina (IAP) pode ser medida para avaliar a dor espontaneamente ativa. Pode ser usado para avaliar a ativação de substratos neurais que podem estar envolvidos no CPSP em um modelo animal. O método [14C]-IAP em ratos é mais barato de realizar em comparação com outras técnicas de mapeamento cerebral. O presente protocolo [14C]-IAP é usado para medir a ativação de substratos neurais envolvidos no CPSP que é induzida por lesões do núcleo basal ventral (VB) do tálamo em um modelo de roedor.

A Figura 1A mostra a linha do tempo experimental. Os ratos foram atribuídos ao simulada e grupos CPSP para os testes comportamentais (isto é, teste de teste plantar e von Frey). O primeiro dia da experiência serviu como linha de base, e os testes foram repetidos nas semanas 1 - 5. PE-50 cateterização foi realizada na veia jugular externa na semana 4. A heparina (20 U / ml, 0,1 ml / dia) foi injectada durante semanas 4 e 5. Cinco minutos após a injeção de heparin...

Apresentamos um protocolo para medir a captação de [14C]-iodoantipirina (IAP) e avaliar a ativação de substratos neurais envolvidos na dor central pós-AVC (CPSP) em um modelo de roedor.

Medidas autoradiográficas de [<sup&gt; 14</sup&gt; C] -Iodoantipyrine no cérebro de um rato Seguindo Central pós-AVC Dor

Approximately 8% of stroke patients present symptoms of central post-stroke pain (CPSP). CPSP is associated with allodynia and hypersensitivity to ...

O objetivo geral deste procedimento experimental é avaliar o envolvimento de substratos neurais na dor central pós-AVC induzida por lesão talâmica, utilizando o método de traçador com isótopo radioativo. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais sobre quais áreas cerebrais estão envolvidas na dor central pós-AVC. A principal vantagem dessa abordagem é que ela é menos cara e mais eficiente em comparação com outras técnicas de mapeamento cerebral.Neste procedimento, realize os testes de von Frey e Plantar para estabelecer as linhas de base colocando a rata em um recinto de acrílico por 30 minutos. Obtenha filamentos de von Frey com o mesmo comprimento, mas diâmetros variados, para fornecer uma faixa de forças de dois a 100 gramas. Em seguida, use os filamentos para estimular o centro da pata traseira do animal através de uma abertura em formato de rede na placa de acrílico.Quando os ratos apresentarem resposta de retirada da pata ao estímulo, registre o número do filamento. Em seguida, utilize filamentos ascendentes e determine o menor valor que provoca a resposta de retirada. Repita o teste por um total de três vezes consecutivas no mesmo rato até que a pressão máxi

autoradiographic-measurements-14c-iodoantipyrine-rat-brain-following

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Indução cirúrgica de uma lesão cerebral isquêmico no rato é um modelo amplamente utilizado para a pesquisa acidente vascular cerebral. Aqui nós demonstram a indução de isquemia cerebral focal por oclusão da artéria cerebral média. Visualização do infarto resultantes de coloração histológica e ressonância magnética também é mostrada.

Modelo de isquemia focal cerebral por oclusão Suture Endovascular da artéria cerebral média no Rat

Os danos cerebrais resultantes da isquemia cerebral podem ser visualizados de forma não invasiva e estudados em ratos usando tomografia pré-clínica por emissão de pósitrons acoplada à sonda radioativa injetável, 18F-fluorodesoxiglicose. Além disso, o uso de ferramentas de software modernas que incluem modelos cerebrais de volume de interesse (VOI) aumenta drasticamente as informações quantitativas obtidas nesses estudos.

Imagem não invasivo e Análise de Isquemia Cerebral em Ratos de Vida Usando Positron Emission Tomography com<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Imagem de tomografia por emissão de pósitrons (PET) de translocator proteína 18 kDa (TSPO) fornece um meio não-invasivo para visualizar o papel dinâmico de neuroinflammation no desenvolvimento e progressão de doenças cerebrais. Este protocolo descreve autoradiografia TSPO-PET e ex vivo para detectar neuroinflammation em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico.

Imagem de Neuroinflammation usando [11C] DPA-713 em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico do animal de estimação

A síntese proteica é um processo biológico crítico para as células. No cérebro, é necessário para mudanças adaptativas. A mensuração das taxas de síntese proteica no cérebro intacto requer considerações metodológicas cuidadosas. Aqui nós apresentamos o L-[1-14C]-método Bakersfield quantitativo da leucina para a determinação de taxas regionais da síntese da proteína cerebral in vivo.

Método autoradiográfico quantitativo para determinação das taxas regionais de síntese protéica cerebral in vivo

Aqui nós apresentamos um protocolo para induzir a depressão do borne-curso nos ratos obstruindo a artéria cerebral média através da artéria carotídea interna. Utilizamos o teste de nadada forçada de Porsolt e o teste de preferência de sacarose para confirmar e avaliar o humor depressivo induzido.

Uma técnica de oclusão da artéria cerebral média para induzir A depressão pós-AVC em ratos

Um método para fornecer células-tronco neurais, adaptáveis para soluções ou suspensões injetáveis, através da artéria carótida comum (mouse) ou artéria carótida externa (rato) após o derrame isquêmico ser relatado. As células injetadas são distribuídas amplamente por todo o parenchyma cerebral e podem ser detectadas até 30 d após o parto.

Entrega intra-arterial de células-tronco neurais ao cérebro de ratos e ratos: aplicação à isquemia cerebral

Este protocolo descreve uma nova técnica de medição dos três parâmetros mais importantes de lesão cerebral isquêmica no mesmo conjunto de amostras cerebrais de roedores. Usar apenas uma amostra cerebral é altamente vantajoso em termos de custos éticos e econômicos.

Medição de edema cerebral pós-acidente vascular cerebral, zona de infarto e quebra da barreira hematoencefálica em um único conjunto de amostras cerebrais de roedores

Este protocolo tem o objetivo de monitorar as alterações in vivo da mielina (desmielinização e remielinização) por meio da tomografia de emissão de pósitrons (PET) em um modelo animal de esclerose múltipla.

Tomografia de emissão de pósitrons para medição in vivo de conteúdo de mielina no modelo de rato de lysolecithin de esclerose múltipla

O protocolo atual descreve um modelo de oclusão/reperfusão da artéria cerebral média em ratos que preserva a estrutura anatômica dos vasos cerebrais sem causar danos.

Um modelo de rato de oclusão/reperfusão da artéria cerebral média sem danificar a estrutura anatômica dos vasos cerebrais

Langendorff modo de perfusão do coração isolado, em conjunto...

Avaliação da função cardíaca e Energetics em Corações Isolados rato Usando 31 P NMR Spectroscopy

Aprenda a medir a captação de [14C]-iodoantipirina para avaliar substratos neurais envolvidos na dor pós-AVC central em modelo de roedor. Este método radioisotópico oferece uma alternativa eficiente para mapeamento cerebral.

Medidas autoradiográficas de [

Explorar mais vídeos